一种制备绞股蓝皂苷L的方法技术

本发明专利技术公开了一种制备绞股蓝皂苷L的方法，该方法以同属但不同亚属的心籽绞股蓝Gynostemma cardiospermum Cogn.ex Oliv替代绞股蓝Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino作为原料，可以提取分离纯化制备得到大量绞股蓝皂苷LVI、XLVI、L、LI、达木林A和达木林B，绞股蓝皂苷LVI、XLVI、L、LI、达木林A和达木林B在心籽绞股蓝Gynostemma cardiospermum Cogn.ex Oliv叶中的含量分别是在绞股蓝Gynostemmapentaphyllum(Thunb.)Makino叶中的含量的10‑50倍；而心籽绞股蓝Gynostemma cardiospermum Cogn.ex Oliv没有商品化，漫田遍野无人问津，成本可以忽略。

A method for preparation of Gypenoside L

The invention discloses a method for preparing Gynostemma saponin L. Gynostemma cardiospermum Cogn. ex Oliv of the same genus but different subgenus can be used instead of Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino as raw material to extract, separate and purify Gynostemma saponin LVI, XLVI, L, LI and up to 100%. The contents of Gynostemma cardiospermum Cogn.ex Oliv, Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) and gynostemma cardiospermum Cogn. Liv is not commercialized, and no one cares about it. The cost can be ignored.

【技术实现步骤摘要】
一种制备绞股蓝皂苷L的方法
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种制备绞股蓝皂苷L的方法。
技术介绍
绞股蓝Gynostemmapentaphyllum(Thunb.)Makino又名甘茶蔓、神仙草、遍地生根等，是葫芦科绞股蓝属的多年生草质藤本植物，在我国主要生长在秦岭及长江以南的地区。其始载于明代的《救荒本草》，作野菜使用，《本草纲目》中开始将其以“乌蔹莓”之名入药。《中国壮药学》：“通调三道两路，清热解毒，止咳祛痰。用于慢性气管炎，病毒性肝炎，肾盂肾炎，胃肠炎，泄泻，高血压，动脉硬化症，高血脂，痈疮肿毒，蛇咬伤”。绞股蓝中主要化学成分为皂苷和多糖，另外还含有少量的黄酮类化合物、萜类、有机酸、蛋白质、维生素、脂肪、纤维等成分以及锌、铜、镁、铁、锰、硒等微量元素。绞股蓝具有抗肿瘤、降血糖、抗衰老、抗肝纤维化等药理作用，其主要有效成分绞股蓝皂苷过量服用亦无副作用，因而在保健食品和新型药品研发上都有巨大的应用前景，是一种新的药食两用植物资源。绞股蓝中含有的皂苷成分众多，研究较多、活性较好的有绞股蓝皂苷LVI、XLVI、L、LI、达木林A(DamulinA)和达木林B(DamulinB)。其中，绞股蓝皂苷LVI、XLVI含量较高，其他四种为含量极低的稀有皂苷(为绞股蓝皂苷LVI、XLVI的转化产物)。目前，绞股蓝皂苷LVI、XLVI以绞股蓝为原料提取分离纯化得到，绞股蓝皂苷L、LI、达木林A和达木林B以经过加热炮制的绞股蓝为原料提取分离纯化得到(文献：DeterminationbyUPLC-MSoffourdammaranetypesaponinsfromheat-processedGynostemmapentaphyllum；Bioscience,Biotechnology,andBiochemistry,2014；Vol.78,No.2,311-316)。以绞股蓝为原料制备绞股蓝皂苷LVI、XLVI、L、LI、达木林A和达木林B存在两点不足：第一，绞股蓝价格相对较高，成本高。自从1986年国家科委在“星火计划”中把绞股蓝列为待开发的“名贵中药材”之首位，绞股蓝的市场价格就明显上涨。第二，未加热炮制的绞股蓝中绞股蓝皂苷L、LI、达木林A和达木林B非常低，分离纯化难度大；加热炮制费事，且加热后绞股蓝皂苷L、LI、达木林A和达木林B的含量并非同步增加，加热温度和时间难以掌控(上述引用文献也可体现这种现象)。绞股蓝属共有2亚属13种2变种，2亚属为绞股蓝亚属、喙果藤亚属，上述的绞股蓝Gynostemmapentaphyllum(Thunb.)Makino即为绞股蓝亚属中的一种(文献：绞股蓝属植物的分类系统和分布，植物分类学报，1995)。研究专利技术，绞股蓝属植物基本都含有绞股蓝皂苷，且种类基本相同，但是该属不同植物中特定绞股蓝皂苷的含量差别较大。产自湖北西部、陕西南部和四川的心籽绞股蓝GynostemmacardiospermumCogn.exOliv属于喙果藤亚属，其主要特征是果为蒴果，成熟时顶端沿腹缝线开裂，具宿存的3枚喙状花柱，其他特征则与绞股蓝Gynostemmapentaphyllum(Thunb.)Makino基本一致。目前尚未有报道公开绞股蓝皂苷LVI、XLVI、L、LI、达木林A、B在心籽绞股蓝GynostemmacardiospermumCogn.exOliv中的含量显著高于绞股蓝Gynostemmapentaphyllum(Thunb.)Makino。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种制备绞股蓝皂苷L的方法。上述目的通过如下技术方案实现：绞股蓝皂苷LVI、XLVI、L、LI、达木林A和达木林B的制备方法包括如下步骤：步骤S1，收集心籽绞股蓝GynostemmacardiospermumCogn.exOliv的叶，阴干，用乙醇水溶液加热回流提取，纱布过滤，合并滤液浓缩至无醇味；步骤S2，将浓缩至无醇味的提取液上样于D101大孔吸附树脂柱，树脂径高比为1:10，拌样树脂占树脂总量的1/10，湿法装柱，拌树脂上样；先用10BV的30％乙醇以10BV/h的流速洗脱除杂，再用10BV的85％乙醇以10BV/h的流速洗脱，收集3-10BV洗脱液，浓缩至无醇味得到总皂苷水溶液；步骤S3，将总皂苷水溶液调节pH值至6.0，加入壳聚糖/凹凸棒石黏土复合物，常温搅拌、静置、过滤，收集滤液，调节pH值至中性，冷冻干燥得到精制总皂苷粉末；步骤S4，将精制总皂苷粉末上样于正相硅胶柱，硅胶径高比为1:10，拌样硅胶占硅胶总量的1/10，干法装柱，拌硅胶上样；依次用体积比为20:1:2、10:1:2、5:1:2、2:1:2的二氯甲烷/甲醇/丙酮混合溶剂以12BV/h的速度梯度洗脱，分别洗脱10BV、6BV、5BV、3BV；步骤S5，分别收集20:1:2二氯甲烷/甲醇/丙酮洗脱7-8BV、9-10BV的洗脱液浓缩干燥得到达木林B、达木林A；分别收集10:1:2二氯甲烷/甲醇/丙酮洗脱3-4BV、5-6BV的洗脱液浓缩干燥得到绞股蓝皂苷L、绞股蓝皂苷LI；收集5:1:2二氯甲烷/甲醇/丙酮洗脱4-5BV的洗脱液浓缩干燥得到绞股蓝皂苷XLVI；收集2:1:2二氯甲烷/甲醇/丙酮洗脱2-3BV的洗脱液浓缩干燥得到绞股蓝皂苷LVI。优选地，壳聚糖/凹凸棒石黏土复合物制备方法为：1g壳聚糖溶于100mL质量分数为1％的醋酸水溶液中得到壳聚糖溶胶，向该溶胶中加入8g凹凸棒石黏土，常温搅拌48h，静置2h后将上层溶液倾倒出，剩余物50℃烘干，研磨、干燥。优选地，步骤S1乙醇水溶液体积百分浓度为75％。优选地，步骤S1提取的固液比为1:20。优选地，步骤S3中1L总皂苷水溶液加入50g壳聚糖/凹凸棒石黏土复合物。优选地，步骤S3加入壳聚糖/凹凸棒石黏土复合物后搅拌24h，静置2h后过滤。优选地，步骤S3用盐酸和氨水调节pH。本专利技术技术优势：1、本专利技术以同属但不同亚属的心籽绞股蓝GynostemmacardiospermumCogn.exOliv替代绞股蓝Gynostemmapentaphyllum(Thunb.)Makino作为原料，可以提取分离纯化制备得到大量绞股蓝皂苷LVI、XLVI、L、LI、达木林A和达木林B，绞股蓝皂苷LVI、XLVI、L、LI、达木林A和达木林B在心籽绞股蓝GynostemmacardiospermumCogn.exOliv叶中的含量分别是在绞股蓝Gynostemmapentaphyllum(Thunb.)Makino叶中的含量的10-50倍；而心籽绞股蓝GynostemmacardiospermumCogn.exOliv没有商品化，漫田遍野无人问津，成本可以忽略。2、本专利技术步骤S3用壳聚糖/凹凸棒石黏土复合物对总皂苷水溶液进行精制，有效降低了总皂苷中的杂质，极大简化了后续正相硅胶柱色谱工艺，产物纯度高。附图说明图1为步骤S2总皂苷水溶液的高效液相色谱分析谱图；图2为步骤S3精制总皂苷粉末的高效液相色谱分析谱图；图3为硅胶柱色谱纯化得到的达木林B的高效液相色谱分析谱图；图4为硅胶柱色谱纯化得到的达木林A的高效液相色谱分析谱图；图5为硅胶柱色谱纯化得到的绞股蓝皂苷L的高效液相色谱分析谱图；图6为硅胶柱色本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备绞股蓝皂苷L的方法，其特征在于，包括通过如下步骤：步骤S1，收集心籽绞股蓝Gynostemma cardiospermum Cogn.ex Oliv的叶，阴干，用乙醇水溶液加热回流提取，纱布过滤，合并滤液浓缩至无醇味；步骤S2，将浓缩至无醇味的提取液上样于D101大孔吸附树脂柱，树脂径高比为1:10，拌样树脂占树脂总量的1/10，湿法装柱，拌树脂上样；先用10BV的30％乙醇以10BV/h的流速洗脱除杂，再用10BV的85％乙醇以10BV/h的流速洗脱，收集3‑10BV洗脱液，浓缩至无醇味得到总皂苷水溶液；步骤S3，将总皂苷水溶液调节pH值至6.0，加入壳聚糖/凹凸棒石黏土复合物，常温搅拌、静置、过滤，收集滤液，调节pH值至中性，冷冻干燥得到精制总皂苷粉末；步骤S4，将精制总皂苷粉末上样于正相硅胶柱，硅胶径高比为1:10，拌样硅胶占硅胶总量的1/10，干法装柱，拌硅胶上样；依次用体积比为20:1:2、10:1:2的二氯甲烷/甲醇/丙酮混合溶剂以12BV/h的速度梯度洗脱，分别洗脱10BV、4BV；步骤S5，收集10:1:2二氯甲烷/甲醇/丙酮洗脱3‑4BV的洗脱液浓缩干燥得到绞股蓝皂苷L。...

【技术特征摘要】
1.一种制备绞股蓝皂苷L的方法，其特征在于，包括通过如下步骤：步骤S1，收集心籽绞股蓝GynostemmacardiospermumCogn.exOliv的叶，阴干，用乙醇水溶液加热回流提取，纱布过滤，合并滤液浓缩至无醇味；步骤S2，将浓缩至无醇味的提取液上样于D101大孔吸附树脂柱，树脂径高比为1:10，拌样树脂占树脂总量的1/10，湿法装柱，拌树脂上样；先用10BV的30％乙醇以10BV/h的流速洗脱除杂，再用10BV的85％乙醇以10BV/h的流速洗脱，收集3-10BV洗脱液，浓缩至无醇味得到总皂苷水溶液；步骤S3，将总皂苷水溶液调节pH值至6.0，加入壳聚糖/凹凸棒石黏土复合物，常温搅拌、静置、过滤，收集滤液，调节pH值至中性，冷冻干燥得到精制总皂苷粉末；步骤S4，将精制总皂苷粉末上样于正相硅胶柱，硅胶径高比为1:10，拌样硅胶占硅胶总量的1/10，干法装柱，拌硅胶上样；依次用体积比为20:1:2、10:1:2的二氯甲烷/甲醇/丙酮混...

【专利技术属性】
技术研发人员：娄志春，
申请(专利权)人：娄志春，
类型：发明
国别省市：湖南,43