转基因作物的检测方法技术

本发明专利技术的转基因作物的检测方法是通过聚合酶链反应检测转基因作物的方法，其包含以下工序：以受检试样中的核酸或从所述受检试样中提取的核酸为模板，使用能够特异性地扩增大豆来源的DREB基因的部分序列的引物对，对具有所述大豆来源的DREB基因的部分序列的核酸进行扩增的工序；和对经所述扩增的核酸进行检测或定量的工序。另外，本发明专利技术还提供利用聚合酶链反应对导入有大豆来源的DREB基因的转基因作物进行检测或定量的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】转基因作物的检测方法
本专利技术涉及转基因作物的检测方法及转基因作物检测用的试剂盒。
技术介绍
利用转基因技术开发的转基因作物已被用作食品。日本对于玉米、大豆、菜籽、棉籽(棉花)、马铃薯等多种转基因作物，经过安全性审查，也认可了进口和销售。另外，对于转基因作物或以其为原料的食品，设置标识制度，对于指定的转基因作物及其加工食品、赋予进行该标识的义务(非专利文献1、2)。另一方面，在日本国外，有转基因作物和非转基因作物在临近的位置进行栽培或者在同一加工厂内使用的情况。因此，即便是混入微量转基因作物及其来源的加工食品、非转基因作物的原料及仅使用非转基因作物制成的加工食品，也有检测到转基因作物来源的重组DNA的可能性。作为农产品或使用了该农产品的食品等受检试样中的转基因作物的检测方法，有利用聚合酶链反应(以下称作“PCR”)检测重组DNA的方法；利用酶联免疫吸附法检测重组蛋白的方法等，一般进行利用PCR实施的检测，非专利文献3中也记载了使用了PCR的转基因作物的检查分析。在利用PCR研究受检试样中是否混有转基因作物时，一般是对利用转基因技术导入的重组DNA的部分碱基序列进行扩增的方法，但当所导入的重组DNA种类不清楚时，需要代替成为标的的重组DNA而多次进行PCR，确认不含有转基因作物。但是，这样的方法很费功夫，并不实用。因而，对于农产品或使用了该农产品的食品等而言，为了适当地进行与是否含有转基因作物有关的标识，期待开发出可靠性和实用性较高的转基因作物的检测技术。另外，作为利用转基因技术导入至农产品的外来基因，已知控制环境胁迫耐受性所需的基因组的表达的脱水应答元件结合蛋白(Dehydrationresponsiveelementbindingprotein，以下称作“DREB”)基因。有报告指出，通过使农产品内过剩地表达该DREB基因，对干燥、盐、低温等环境胁迫的耐受性提高。例如，专利文献1中公开了对转导低温等胁迫耐受性有用的新型多核苷酸(结构基因区域及其表达控制区域)。现有技术文献非专利文献非专利文献1：「遺伝子組換えに関する表示に係る加工食品品質表示基準第7条第1項及び生鮮食品品質表示基準第7条第1項の規定に基づく農林水産大臣の定める基準」(平成12年3月31日農林水産省告示第517号)非专利文献2：「食品衛生法施行規則及び乳及び乳製品の成分規格等に関する省令の一部を改正する省令等の施行について」(平成13年3月15日厚生労働省食発第79号)非专利文献3：JAS分析試験ハンドブック遺伝子組換え食品検査·分析マニュアル改訂第2版专利文献专利文献1：日本特开2002-223757号公报
技术实现思路
本专利技术提供以下的(1)～(4)。(1)一种转基因作物的检测方法，其为利用PCR对转基因作物进行检测的方法，其包含以下工序：以受检试样中的核酸或从所述受检试样中提取的核酸为模板，使用能够特异性扩增大豆来源的DREB基因的部分序列的引物对，对具有所述大豆来源的DREB基因的部分序列的核酸进行扩增的工序；和对经所述扩增的核酸进行检测的工序(以下提到第1专利技术时是指本专利技术)。(2)一种转基因作物的检测方法，其为利用PCR对转基因作物进行检测的方法，其包含以下工序：以受检试样中的核酸或从所述受检试样中提取的核酸为模板，使用能够特异性扩增棉花来源的DREB基因的部分序列的引物对，对具有所述棉花来源的DREB基因的部分序列的核酸进行扩增的工序；和对经所述扩增的核酸进行检测的工序(以下提到第2专利技术时是指本专利技术)。(3)一种试剂盒，其为用于利用PCR对导入有大豆来源的DREB基因的转基因作物进行检测或定量的试剂盒，其含有由以下核酸构成的引物对：含有序列号1所记载的碱基序列的核酸、含有序列号1所记载的碱基序列中的至少80％的连续的碱基序列的核酸、或与含有序列号3所记载的碱基序列的核酸进行杂交的核酸，和含有序列号2所记载的碱基序列的核酸、含有序列号2所记载的碱基序列中的至少80％的连续的碱基序列的核酸、或与含有序列号4所记载的碱基序列的核酸进行杂交的核酸(以下提到第3专利技术时是指本专利技术)。(4)一种试剂盒，其为用于利用PCR对导入有棉花来源的DREB基因的转基因作物进行检测或定量的试剂盒，其含有由以下核酸构成的引物对：含有序列号6所记载的碱基序列的核酸、含有序列号6所记载的碱基序列中的至少80％的连续的碱基序列的核酸、或与含有序列号8所记载的碱基序列的核酸进行杂交的核酸，和含有序列号7所记载的碱基序列的核酸、含有序列号7所记载的碱基序列中的至少80％的连续的碱基序列的核酸、或与含有序列号9所记载的碱基序列的核酸进行杂交的核酸(以下提到第4专利技术时是指本专利技术)。附图说明图1为排列了大豆来源的DREB基因及棉花来源的DREB基因的各个DNA序列的一部分的图。图2为表示本专利技术的实施例1的结果的图。图3为表示本专利技术的实施例1的结果的图。图4为表示本专利技术的实施例2的结果的图。图5为表示本专利技术的实施例2的结果的图。具体实施方式目前，世界范围内正在开发充分利用了DREB基因等、耐受环境胁迫的作物，可以预想到今后导入有DREB基因的转基因作物的生产会扩大。因此，导入有DREB基因的转基因作物的检测技术变得重要。但是，仍未提供能够以高可靠性和实用性对导入有DREB基因的转基因作物进行检测的方法。专利文献1中对于特异性地检测DREB基因的方法也没有记载。因此，本专利技术的目的在于提供能够以高可靠性和实用性检测导入有DREB基因的转基因作物的方法及试剂盒。以下，根据本专利技术优选的实施方式对本专利技术进行说明。本专利技术(第1及第2专利技术)涉及对转基因作物进行检测的方法。即涉及，对作为植物的作物、由该作物获得的食品原材料或者使用作物或食品原材料获得的加工食品等受检试样中含有的、导入有重组DNA的转基因作物进行检测的方法。作为植物的作物，可举出谷物粒、马铃薯、甜燕麦、黑麦、薏米菜、菠萝等。作为谷物粒，例如可举出麦类(小麦、大麦、等)、大米、玉米、甜瓜、小米、粟黍等禾本科植物，大豆、小豆、花生、豌豆、菜豆等豆科植物的种子，特别优选麦类。作为由该农作物获得的食品原材料，当农作物为小麦时，可举出低筋粉、中筋粉、全麦粉、准高筋粉、高筋粉、硬粒小麦粉(durumwheat)等，当农作物为除小麦以外的谷物粒时，可举出黑麦粉、米粉等。作为使用农作物或由该农作物获得的食品原材料而获得的加工食品，当农作物为小麦时，可举出面包或面类，当农作物为大豆时，可举出豆腐等。本专利技术中进行检测的重组DNA为DREB基因。DREB基因可以提高农作物的环境胁迫耐受性，可以预想到今后导入有DREB基因的转基因作物的生产会扩大。因此，今后若在转基因作物的检测中使用DREB基因，则能够较为简便地对转基因作物进行检测。此外，在判定是否为转基因作物时，除了DREB基因的检查之外，还优选进行除DREB基因以外的重组DNA的检查。第1专利技术中，通过PCR对受检试样中的大豆来源的DREB基因进行检测。该检测以受检试样中的核酸或从所述受检试样中提取的核酸为模板，使用能够特异性扩增大豆来源的DREB基因的部分序列的引物对，利用PCR对具有大豆来源的DREB基因的部分序列的核酸进行扩增，对该经扩增的核酸进行检测或定量。第2专利技术中，通过本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种转基因作物的检测方法，其为通过聚合酶链反应检测转基因作物的转基因作物的检测方法，其包含以下工序：以受检试样中的核酸或从所述受检试样中提取的核酸为模板，使用能够特异性地扩增大豆来源的DREB基因的部分序列的引物对，对具有所述大豆来源的DREB基因的部分序列的核酸进行扩增的工序，和对经所述扩增的核酸进行检测或定量的工序。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.24 JP 2016-0606691.一种转基因作物的检测方法，其为通过聚合酶链反应检测转基因作物的转基因作物的检测方法，其包含以下工序：以受检试样中的核酸或从所述受检试样中提取的核酸为模板，使用能够特异性地扩增大豆来源的DREB基因的部分序列的引物对，对具有所述大豆来源的DREB基因的部分序列的核酸进行扩增的工序，和对经所述扩增的核酸进行检测或定量的工序。2.根据权利要求1所述的转基因作物的检测方法，其中，所述引物对由以下核酸构成：含有序列号1所记载的碱基序列的核酸、含有序列号1所记载的碱基序列中的至少80％的连续的碱基序列的核酸、或与含有序列号3所记载的碱基序列的核酸进行杂交的核酸，和含有序列号2所记载的碱基序列的核酸、与含有序列号2所记载的碱基序列中的至少80％的连续的碱基序列的核酸、或与含有序列号4所记载的碱基序列的核酸进行杂交的核酸。3.根据权利要求1或2所述的转基因作物的检测方法，其中，在所述经扩增的核酸的检测或定量中，使用经荧光标记、放射性物质标记或生物素标记的核酸探针，所述核酸探针含有序列号5所记载的碱基序列、与该碱基序列互补的碱基序列、或相对于这些中任一个碱基序列具有80％以上的同源性的碱基序列。4.一种转基因作物的检测方法，其为通过聚合酶链反应检测转基因作物的转基因作物的检测方法，其包含以下工序：以受检试样中的核酸或从所述受检试样中提取的核酸为模板，使用能够特异性地扩增棉花来源的DREB基因的部分序列的引物对，对具有所述棉花来源的DREB基因的部分序列的核酸进行扩增的工序，和对经所述扩增的核酸进行检测或定量的工序。5.根据权利要求4所述的转基因作物的检测方法，其中，所述引物对由以下核酸构成：含有序列号6所记载的碱基序列的核酸、含有序列号6所记载的碱基序列中的至少80％的连续的碱基序列的核酸、或与含有序列号8所记载的碱基序列的核酸进行杂交的核酸，和含有序列号7所记载的碱基序列的核酸、含有序列号7所记载的碱基序列中的至少80％的连续的碱基序列的核酸、或与含有序列号9所记载的碱基序列的核酸进行杂交的核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：野间聪，菊池洋介，西真名美，宫武圣子，
申请(专利权)人：株式会社日清制粉集团本社，
类型：发明
国别省市：日本,JP