一种山杏叶角鲨烯的制备方法技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：(1)将山杏叶阴干粉碎；(2)加入酵母菌液体菌种固体发酵；(3)有机溶剂浸提；(4)水浴加热，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放；(5)抽滤过滤留滤液；(6)通过旋转蒸发浓缩获得山杏叶角鲨烯粗提物。本发明专利技术提供的山杏叶提取角鲨烯的方法工艺简单，成本较低，制备的角鲨烯纯度好，开辟了角鲨烯的新原料源，具有较强的实用性。

Preparation method of Prunus armeniaca leaf squalene

The invention relates to the field of genetic engineering technology, in particular to a method for preparing Squalene from apricot leaves, which comprises the following steps: (1) shady and dry grinding of apricot leaves; (2) solid fermentation by adding yeast liquid strains; (3) organic solvent extraction; (4) water bath heating to promote squalene release from Apricot Leaf fermentation; (5) filtration and filtration. The filtrate was retained; (6) the crude extract of Armeniaca sibirica was obtained by rotary evaporation and concentration. The method for extracting Squalene from apricot leaves provided by the invention has the advantages of simple process, low cost, good purity of squalene prepared, opening up a new raw material source of squalene, and strong practicability.

【技术实现步骤摘要】
一种山杏叶角鲨烯的制备方法
本专利技术涉及基因工程
，特别是涉及一种山杏叶角鲨烯的制备方法。
技术介绍
随着生活水平的提高，人们对自身的健康日益关注，全球居民的健康消费水平逐年攀升。由于天然营养保健食品不以治病为目的，能调节人体机能、有特定保健功能，适合于特定人群食用。所以，保健品市场需求十分旺盛。国家卫生部限定的保健食品功能，包括：增强免疫力、改善睡眠、改善营养性贫血、改善生长发育、缓解体力疲劳、提高缺氧耐受力、对辐射危害有辅助保护功能、辅助改善记忆、辅助降血脂、辅助降血糖、辅助降血压、促进消化、减肥、抗氧化、调节肠道菌群、通便等27种。世界各国对保健食品的开发都非常重视，新功能、新产品、新造型和新的食用方法不断出现。角鲨烯是在黑鲨鱼肝油中发现的一种高度不饱和烃类化合物，是一种重要的生物活性物质，具有增强免疫力、抗癌、防癌及保湿养颜作用，广泛应用于化妆品、医药、保健品、食品等许多行业。目前提取角鲨烯，多以大鲨鱼肝为原料，资源短缺。因此，寻找新的角鲨烯原料资源是提高角鲨烯产量、降低产品价格的必要途径。
技术实现思路
本专利技术为了克服上述技术问题的不足，提供了一种山杏叶角鲨烯的制备方法，可以很大程度上扩大角鲨烯原料资源。解决上述技术问题的技术方案如下：一种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：(1)原料准备：选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干，粉碎成山杏叶粉；(2)固体发酵：向步骤(1)的山杏叶粉内加入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物；(3)有机溶剂浸提：在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提1～2次；(4)水浴加热：将步骤(3)中浸提的液体在50～70℃水浴环境下加热1～4小时，优选2～3小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化；(5)过滤：对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；(6)浓缩：将步骤(5)所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物。进一步地说，步骤(1)所述的山杏叶为秋天落叶，粉碎至80～120目，优选粉碎至90～110目。进一步地说，步骤(2)所述的活化好的酵母菌液体菌种为酿酒酵母菌在PDA液体培养基中培养30h，在活化好的酵母菌液体菌种加入之前，加入麸皮和红糖的混合物，接入活化好的酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的5～30％，优选为10～20％，所述的固体发酵为25～30℃下发酵培养6～15天，优选为28～30℃下发酵培养10～15天。进一步地说，步骤(3)中所述的有机溶剂为30～60℃的石油醚、60～90℃的石油醚或环己烷中任意一种，优选为60～90℃的石油醚。进一步地说，步骤(3)中山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:2～10。进一步地说，步骤(4)中所述的需要保持角鲨烯不被氧化是通过控制温度不超过70℃实现。进一步地说，步骤(6)中所述的旋转蒸发是在60～90℃真空条件下进行，优选为60～80℃真空条件下进行。该山杏叶角鲨烯的应用是可以将山杏叶角鲨烯粗提物生产保健食品。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种从山杏叶提取角鲨烯的方法，工艺简单，成本较低，制备的角鲨烯纯度好，开辟了角鲨烯的新原料源，具有较强的实用性。我国有山杏面积3000多万亩，据估算每年山杏叶的产量为12000多万t。但总体来说，山杏叶的利用率极低，研究发现，山杏叶中含有五环三萜类化合物、黄酮类化合物等生物活性物质，山杏叶提取物具有很高的抗氧化生物活性。对山杏叶提取物进行GC-MS分析，发现其中角鲨烯含量较高。另据报道，酵母菌中角鲨烯含量相对较高，借助酵母菌发酵山杏叶，将山杏叶的纤维素分解，促进角鲨烯释放，同时酵母菌生长合成角鲨烯。本专利技术以秋天山杏落叶为原料，经酵母发酵，促进山杏叶角鲨烯的释放，同时酵母菌生长合成角鲨烯，利用石油醚或环己烷非极性高的特点，溶解山杏叶中的角鲨烯，使其充分释放出来，大大提高了成品中角鲨烯含量。在操作过程中，是直接将山杏叶发酵物与石油醚或者环己烷混合，通过水浴加热处理加速有效成分的释放，简单高效；山杏叶角鲨烯不含任何化学成分和有毒物质，是一种新型、纯天然的保健品前原料。在加入活化好的酵母菌液体菌种之前加入了麸皮和红糖，其作用是让酵母菌能够在培养液中良好生长。经GC-MS定性检测，检测结果如图1所示，图1中，上部分是角鲨烯标准品图，下部分是山杏叶提取物图，经过比对，确定提取物为角鲨烯。经过GC-MS定性检测和后期气相色谱法定量分析(如图2或3所示，5分钟左右的峰是角鲨烯的峰)，确定本专利技术获得的提取物角鲨烯含量为3.67％。附图说明下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。图1为角鲨烯标品(上图)及山杏叶提取物(下图)GC-MS检测图；图2为角鲨烯标品气相色谱图；图3为山杏叶提取物气相色谱图；具体实施方式实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。实施例1：一种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：(1)原料准备：选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干至含水量为10％～15％，粉碎成山杏叶粉；山杏叶为秋天(每年阳历8月底到11月初)落叶，粉碎至80目，取100g。(2)固体发酵：向步骤(1)的山杏叶粉内加入1g麸皮和1.5g红糖，接入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物；接入活化好的酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的5％，固体发酵为25℃下发酵培养6天。(3)有机溶剂浸提：在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提1次；有机溶剂为30～60℃的石油醚，山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:2。(4)水浴加热：将步骤(3)中浸提的液体(包括山杏叶发酵物和有机溶剂混合物料)在50℃水浴环境下加热1小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化；(5)过滤：对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；(6)浓缩：将步骤(5)所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物0.20g，旋转蒸发是在60℃真空条件下进行。该山杏叶角鲨烯粗提物可以用来生产保健食品。实施例2：一种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：(1)原料准备：选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干至含水量为10％～15％，粉碎成山杏叶粉；山杏叶为秋天(每年阳历8月底到11月初)落叶，粉碎至120目，取100g。(2)固体发酵：向步骤(1)的山杏叶粉内加入1g麸皮和1.5g红糖，接入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物；接入酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的30％，固体发酵为30℃下发酵培养15天。(3)有机溶剂浸提：在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提2次；有机溶剂为60～90℃的石油醚。山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:10。(4)水浴加热：将步骤(3)中浸提的液体(包括山杏叶发酵物和有机溶剂混合物料)在70℃水浴环境下加热4小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化，一旦温度超过70℃，角鲨烯会迅速氧化，保证温度不可以超过70℃为宜；(5)过滤：对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；(6)浓本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种山杏叶角鲨烯的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)原料准备：选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干，粉碎成山杏叶粉；(2)固体发酵：向步骤(1)的山杏叶粉内加入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物；(3)有机溶剂浸提：在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提1～2次；(4)水浴加热：将步骤(3)中浸提的液体在50～70℃水浴环境下加热1～4小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化；(5)过滤：对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；(6)浓缩：将步骤(5)所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物。

【技术特征摘要】
1.一种山杏叶角鲨烯的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)原料准备：选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干，粉碎成山杏叶粉；(2)固体发酵：向步骤(1)的山杏叶粉内加入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物；(3)有机溶剂浸提：在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提1～2次；(4)水浴加热：将步骤(3)中浸提的液体在50～70℃水浴环境下加热1～4小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化；(5)过滤：对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；(6)浓缩：将步骤(5)所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物。2.根据权利要求1所述的山杏叶角鲨烯的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的山杏叶为秋天落叶，粉碎至80～120目。3.根据权利要求1所述的山杏叶角鲨烯的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述的活化好的酵母菌液体菌种为酿酒酵母菌在PDA液体培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭艳芳，李洁，
申请(专利权)人：河北民族师范学院，
类型：发明
国别省市：河北,13