一种检测Cys的荧光探针制造技术

本发明专利技术公开了一种检测Cys的荧光探针，其分子结构式如下：

A fluorescent probe for detecting Cys

The invention discloses a fluorescent probe for detecting Cys, and its molecular structure is as follows:

【技术实现步骤摘要】
一种检测Cys的荧光探针
本专利技术涉及的是荧光探针领域，涉及一种检测Cys的荧光探针的制备与应用。
技术介绍
Cys(半胱氨酸)作为生物硫醇的一种，在生物体的许多生理病理过程中有着重要的作用。研究表明生物体内Cys的含量不正常会导致一些疾病的发生，如：神经中毒、生长缓慢、头发脱色、水肿、嗜睡、肝脏损伤、肌肉脂肪萎缩无力。用于检测Cys的常规方法有色谱法、电化学方法、气质联用法。但是常规方法方法具有一些弊端如：需要昂贵的仪器设备、复杂的操作过程、样品前处理繁琐等。荧光探针作为一种新型的分析方法，具有高高灵敏性、选择性、的优点。比值型荧光探针由于可以检测两个发射峰的荧光强度，可以避免由于探针浓度、仪器因素、环境因素造成的误差，从而提高检测的准确性。但是关于检测Cys的荧光探针的报道数量有限，比值型检测Cys的荧光探针数量更是甚少。
技术实现思路
本专利技术目的之一是提供一种检测Cys的荧光探针合成方法；目的之二是提供一种检测Cys的荧光探针。本专利技术解决问题采取的技术方案为，一种可以特异性识别Cys的荧光探针，其分子结构式如下：具体合成路线如下：具体成方法如下：(1)将405mg化合物2、305mg化合物5溶于10mL甲苯中，回流反应24小时，抽滤，用10mL正己烷洗涤滤饼，烘干得到210mg灰白色粉末为化合物4，产率，54.1％。(2)将102.8mg化合物4溶于10mL无水二氯甲烷中，加入70μL三乙胺，氩气保护冰水浴30分钟，再加入40μL丙烯酰氯，继续保持冰水浴90分钟。旋干溶剂，柱层析得到72mg黄色粉末为化探针，产率57.8％。本专利技术的荧光探针测试方法如下，将探针分子溶解在PBS(pH＝7.4，10mM)与乙腈混合溶液中(体积比为1:1)中，室温下进行测试。具体实施方法在实施实例中详细介绍。本专利技术的荧光探针的响应机理如下：Cys与探针分子响应后，Cys的巯基首先与丙烯酰酯的双键发生迈克尔加成反应，随后Cys的氨基进攻酯基形成一个七元环，释放出染料分子(化合物2)溶液的荧光由绿色变成蓝色。从而实现了荧光比值型检测Cys过程。探针分子的响应过程如下：本专利技术的荧光探针的发射峰在500nm，与Cys响应后的荧光发射峰在425nm处。探针与Cys完全响应后425nm处荧光强度与500nm处荧光强度的比值(I425/I500)由0.14变成2.06。本专利技术所述的探针分子合成路线简单，操作简单，成本较低，可以识别Cys的。附图说明图1为本专利技术化合物2在氘代氯仿中氢谱，横坐标为化学位移(ppm)，纵坐标为强度。图2为本专利技术探针在氘代氯仿中氢谱，横坐标为化学位移(ppm)，纵坐标为强度。图3为本专利技术的荧光探针(1.0×10-5mol/L)在PBS(pH＝7.4，10mM)与乙腈混合溶液中(体积比为1:1)中，与1.0×10-4mol/LCys响过程荧光光谱，横坐标为波长，纵坐标为荧光强度。图4为本专利技术的荧光探针(1.0×10-5mol/L)在PBS(pH＝7.4，10mM)与乙腈混合溶液中(体积比为1:1)中，与1.0×10-4mol/LCys响过程500nm处与425nm处荧光强度，横坐标为时间，纵坐标为荧光强度。图5为本专利技术的荧光探针(1.0×10-5mol/L)在PBS(pH＝7.4，10mM)与乙腈混合溶液中(体积比为1:1)中，与1.0×10-4mol/LCys响应过程500nm处与425nm处荧光强度比值(I425/I500)，横坐标为时间，纵坐标为荧光强度比值I425/I500)。图6为本专利技术的荧光探针(1.0×10-5mol/L)在PBS(pH＝7.4，10mM)与乙腈混合溶液中(体积比为1:1)中，与1.0×10-4mol/LCys响应过程500nm处与425nm处荧光强度比值(I425/I500)与时间关系的线性拟合，横坐标为时间，纵坐标为荧光强度比值(I425/I500)。具体实施实例实施例1：中间产物4的合成将405mg化合物2、305mg化合物5溶于10mL甲苯中，回流反应24小时，抽滤，用10mL正己烷洗涤滤饼，烘干得到210mg灰白色粉末为化合物4，产率，54.1％。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.74(s，1H)，7.15(s，1H)，5.21(s，1H)，3.23(dd，J＝11.1，5.5Hz，4H)，2.71(dd，J＝8.9，6.1Hz，4H)，1.87(dd，J＝11.9，6.2Hz，4H).13CNMR(100MHz，DMSO-d6)δ167.06，163.29，151.47，146.46，120.35，117.78，105.83，103.57，86.28，49.69，40.43，40.22，40.01，39.80，39.59，27.43，21.49，20.62，20.58。实施例2：探针的合成将102.8mg化合物4溶于10mL无水二氯甲烷中，加入70μL三乙胺，氩气保护冰水浴30分钟，再加入40μL丙烯酰氯，继续保持冰水浴90分钟。旋干溶剂，柱层析得到72mg黄色粉末为化探针，产率57.8％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ6.86(d，J＝39.1Hz，1H)，6.69(d，J＝17.3Hz，1H)，6.36(dd，J＝17.2，10.5Hz，1H)，6.14(d，J＝10.4Hz，1H)，6.01(s，1H)，3.27(dd，J＝11.2，5.8Hz，4H)，2.87(t，J＝6.2Hz，2H)，2.74(t，J＝6.1Hz，2H)，1.96(d，J＝4.1Hz，4H).实施例3：本专利技术:荧光探针检测Cys的应用将探针溶于pH在PBS(pH＝7.4，10mM)与乙腈混合溶液中(体积比为1:1)中，向溶液中加其它10倍当量的Cys，385nm波长激发，每间隔1分钟测一次荧光。发现探针与半管干山响过程500nm处与425nm处荧光强度比值(I425/I500)由0.14变成2.06。说明本专利技术探针可以用于检测Cys。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测Cys的荧光探针，其结构为：

【技术特征摘要】
1.一种检测Cys的...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋相志，苏远安，熊海青，
申请(专利权)人：襄阳柏邦新材料科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42