一种人参蛋白的提取分离方法技术

本发明专利技术的一种人参蛋白的提取分离方法，属于蛋白质分离纯化的技术领域。以人参根部为原料提取人参蛋白，有有机溶剂除杂过程，两次近中性缓冲液浸提过程，合并两次浸提的上清液冻干得到人参蛋白粉。本发明专利技术的方法提取效率较高，提取率高；并且制备方法简便，适用于工业化生产，用于功能食品的开发。

A method for extraction and separation of Ginseng Protein

The invention discloses a ginseng protein extraction and separation method, which belongs to the technical field of protein separation and purification. Ginseng protein was extracted from the root of ginseng, with organic solvent in the process of impurity removal, two near neutral buffer solution, combined with two extracts of the supernatant to get ginseng protein powder. The method of the invention has high extraction efficiency and high extraction rate, and the preparation method is simple and convenient, and is suitable for industrial production and for the development of functional food.

【技术实现步骤摘要】
一种人参蛋白的提取分离方法
本专利技术属于蛋白质分离纯化的
，涉及一种人参蛋白的提取方法，具体是一种采用有机溶剂除杂、缓冲液浸提、真空冷冻干燥相结合的人参蛋白分离纯化技术。
技术介绍
人参属于五加科人参属，为多年生宿根草本植物，是一种特别重要的中药植物，主要产于我国东北地区，关东三宝之一。作为一种珍贵的中药植物，人参具有明目益智，安定精神，增强体质，延年益寿的作用，被称之为“百草之王”。人参，包括根、茎、叶，全身是中药之宝，但其药用部位主要位于根部。人参含有许多有效药用成分，包括人参多糖、皂苷、脂肪酸、甾醇、维生素、挥发油、蛋白质、多肽等多种成分。近年来，人们对于人参成分的分离纯化进行了很多的研究，并取得了很大的进展，但是对于人参中蛋白质的研究涉及较少。蛋白质在生命活动的过程中起着十分重要的作用，存在于所有的动植物中。目前通过二维电泳技术已经发现了300多种人参蛋白，但是已经鉴定出种类的人参蛋白，还不到其中的五分之一。侯元等(人参蛋白的等电聚焦电泳分析[J].人参研究,1992(4):34-36.)采用薄层等电聚焦技术，分离鉴定人参水溶性蛋白，发现24条电泳谱带。张巍等(人参水溶性蛋白的纯化工艺研究[J].吉林农业大学学报,2008,30(1):36-39.)利用生物化学方法从人参中提取纯化出5种水溶性人参蛋白。与本专利技术接近的现有技术是长春中医药大学中医药与生物工程研发中心幺宝金等发表在中药材杂志第32卷第2期(2009年2月)的文章“人参总蛋白的提取工艺研究”。最优的过程是称取人参粉，按料液比(w/v)1∶15加入pH7.0缓冲溶液，浸提，提取温度4℃，浸提次数为2次,每次为18h。提取率最高为3.072％
技术实现思路
本专利技术的目的是开发一种新的简便的、提取率高的提取人参蛋白的方法：以人参根部为原料，通过有机溶剂除杂、缓冲液浸提、真空冷冻干燥等方法提取人参蛋白。本专利技术的具体技术方案如下。一种人参蛋白的提取方法，以人参根部为原料提取人参蛋白，有除杂过程、蛋白提取过程和后处理过程；所述的除杂过程，是将人参根部粉末加入到有机溶剂中，搅拌3～5小时，过滤保留滤渣，其中人参根部粉末与有机溶剂的质量体积比(g/mL)为1:5～20；所述的有机溶剂，是丙酮或无水乙醇；所述的蛋白提取过程，是将滤渣加入到近中性缓冲液中浸提5～10小时，离心得到上清液和沉淀，其中滤渣与近中性缓冲液的质量体积比(g/mL)为1:10～20；再将沉淀加入到近中性缓冲液中浸提5～10小时，离心收集上清液，其中沉淀与近中性缓冲液的质量体积比(g/mL)为1:10～20；合并两次上清液即为人参总蛋白溶液；所述的近中性缓冲液，是pH＝7.4～8.0的磷酸盐缓冲液或碳酸氢铵缓冲液；所述的后处理过程，是将得到的人参总蛋白溶液在-80～-20℃下预冷2～5小时，再进行真空冷冻干燥，得到人参蛋白粉。上述的磷酸盐缓冲液，可以是商品的1XPBS缓冲液，也可以自行配制。在除杂过程中，优选的人参根部粉末与有机溶剂的质量体积比(g/mL)为1:10～15。在提取过程中，优选每次浸提10小时；所述的近中性缓冲液，优选pH＝7.4～7.8的磷酸盐缓冲液。本专利技术开发了一种新的人参总蛋白的提取方法，经过BCA蛋白定量分析，结果表明该方法的提取效率较高，提取率为4％左右。利用本专利技术可以高效率的得到人参蛋白；并且制备方法简化了工艺流程，操作简便，减少生产成本，适用于工业化生产，用于功能食品的开发。附图说明图1为本专利技术实施例1中制备的人参蛋白SDS-PAGE图谱。图1中，M为Marker；1为实施例1的图谱；2为实施例2的图谱；3为实施例3的图谱；4为实施例4的图谱。具体实施方式实施例11)将干燥的人参清洗后利用粉碎机粉碎得到人参粉末；2)按照1:10的质量体积比加入丙酮，在室温下搅拌3小时，过滤得到滤液和第一次滤渣；3)收集第一次滤渣，按照1:10的质量体积比加入pH＝7.4～7.8的1XPBS缓冲液，在室温下浸提10小时，离心得到上清液和第一次沉淀；收集第一次沉淀，按照1:10的比例加入pH＝7.4～7.8的1XPBS缓冲液，进行二次浸提10小时，合并两次的浸提液即为人参总蛋白溶液；4)得到的人参蛋白溶液先在-20℃下预冷5小时，然后进行真空冷冻干燥即可得到人参蛋白粉。对于此方法提取的人参蛋白溶液进行BCA蛋白定量分析，结果表明人参蛋白的提取率为4.12％。实施例21)将干燥的人参清洗后利用粉碎机粉碎得到人参粉末；2)按照1:15的比例加入丙酮，在室温下搅拌3小时，过滤得到滤液和第一次滤渣；3)收集第一次滤渣，按照1:15的比例加入pH＝7.6～8.0的10mmol/L的碳酸氢铵缓冲液，在室温下浸提5小时，离心得到上清液和第一次沉淀；收集第一次沉淀，按照1:10的比例加入pH＝7.6～8.0的10mmol/L碳酸氢铵缓冲液，进行二次浸提10小时，合并两次的上清液即为人参总蛋白溶液；4)得到的人参蛋白溶液先在-80℃下预冷2～5小时，然后进行真空冷冻干燥即可得到人参蛋白粉。对于此方法提取的人参蛋白溶液进行BCA蛋白定量分析，结果表明人参蛋白的提取率为3.97％。实施例31)将干燥的人参清洗后利用粉碎机粉碎得到人参粉末；2)按照1:10的比例加入无水乙醇，在室温下搅拌3小时，过滤得到滤液和第一次滤渣；3)收集第一次滤渣，按照1:10的比例加入pH＝7.4～7.8的1XPBS缓冲液，在室温下浸提10小时，离心得到上清液和第一次沉淀；收集第一次沉淀，按照1:10的比例加入pH＝7.4～7.8的1XPBS缓冲液，进行二次浸提10小时，合并两次的上清液即为人参总蛋白溶液；4)得到的人参蛋白溶液先在-20℃下预冷5小时，然后进行真空冷冻干燥即可得到人参蛋白粉。对于此方法提取的人参蛋白溶液进行BCA蛋白定量分析，结果表明人参蛋白的提取率为3.76％。实施例41)将干燥的人参清洗后利用粉碎机粉碎得到人参粉末；2)按照1:20的比例加入无水乙醇，在室温下搅拌3小时，过滤得到滤液和第一次滤渣；3)收集第一次滤渣，按照1:10的比例加入pH＝7.6～8.0的10mmol/L碳酸氢铵缓冲液，在室温下浸提10小时，离心得到上清液和第一次沉淀；收集第一次沉淀，按照1:10的比例加入pH＝7.6～8.0的10mmol/L碳酸氢铵缓冲液，进行二次浸提5小时，合并两次的上清液即为人参总蛋白溶液；4)得到的人参蛋白溶液先在-80℃下预冷2～5小时，然后进行真空冷冻干燥即可得到人参蛋白粉。对于此方法提取的人参蛋白溶液进行BCA蛋白定量分析，结果表明人参蛋白的提取率为3.66％。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人参蛋白的提取分离方法，以人参根部为原料提取人参蛋白，有除杂过程、蛋白提取过程和后处理过程；所述的除杂过程，是将人参根部粉末加入到有机溶剂中，搅拌3～5小时，过滤保留滤渣，其中人参根部粉末与有机溶剂的质量体积比为1:5～20；所述的有机溶剂，是丙酮或无水乙醇；所述的蛋白提取过程，是将滤渣加入到近中性缓冲液中浸提5～10小时，离心得到上清液和沉淀，其中滤渣与近中性缓冲液的质量体积比为1:10～20；再将沉淀加入到近中性缓冲液中浸提5～10小时，离心收集上清液，其中沉淀与近中性缓冲液的质量体积比为1:10～20；合并两次上清液即为人参总蛋白溶液；所述的近中性缓冲液，是pH＝7.4～8.0的磷酸盐缓冲液或碳酸氢铵缓冲液；所述的后处理过程，是将得到的人参总蛋白溶液在‑80～‑20℃下预冷2～5小时，再进行真空冷冻干燥，得到人参蛋白粉。

【技术特征摘要】
1.一种人参蛋白的提取分离方法，以人参根部为原料提取人参蛋白，有除杂过程、蛋白提取过程和后处理过程；所述的除杂过程，是将人参根部粉末加入到有机溶剂中，搅拌3～5小时，过滤保留滤渣，其中人参根部粉末与有机溶剂的质量体积比为1:5～20；所述的有机溶剂，是丙酮或无水乙醇；所述的蛋白提取过程，是将滤渣加入到近中性缓冲液中浸提5～10小时，离心得到上清液和沉淀，其中滤渣与近中性缓冲液的质量体积比为1:10～20；再将沉淀加入到近中性缓冲液中浸提5～10小时，离心收集上清液，其中沉淀与近中性缓冲液的质量体积比为1:1...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡良海，张贵元，李潇影，杨晓敏，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22