dsDNA免疫磁性微球体系、其制备方法和应用以及保存液技术

本发明专利技术公开了一种dsDNA免疫磁性微球体系及其制备方法和保存液、抗dsDNA抗体检测试剂和试剂盒以及系统。本发明专利技术dsDNA免疫磁性微球体系包括磁性微球本体和含氨基聚合物基团以及dsDNA抗原，所述含氨基聚合物基团修饰所述磁性微球本体，所述dsDNA抗原与所述含氨基聚合物基团偶联。保存液用于dsDNA免疫磁性微球体系的保存。抗dsDNA抗体检测试剂和试剂盒以及系统包括dsDNA免疫磁性微球体系。本发明专利技术dsDNA免疫磁性微球体系结构稳定，dsDNA抗原的包被量高，空间位阻效应低，与抗体的结合效率和结合量高，提高了抗体检测灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
dsDNA免疫磁性微球体系、其制备方法和应用以及保存液
本专利技术属于医疗试剂
，具体涉及一种抗dsDNA抗体检测试剂及其制备方法、抗dsDNA抗体检测试剂盒、抗dsDNA抗体检测系统和他们的应用。
技术介绍
系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus/SLE)是一种累及多器官、多系统的小血管及结缔组织的系统性自身免疫性疾病。在欧洲，SLE每年的新增发病率约为25/10万，而北美地区发病率更高。SLE易发于年轻女性，病程中往往复发与缓解交替出现。患者体内可产生针对核酸、核蛋白和组蛋白的抗核抗体及其他自身抗体，这些自身抗体与相应抗原结合形成免疫复合物，可沉积在心血管结缔组织、肾小球基底膜、浆膜、关节滑膜和多种脏器小血管壁上，免疫复合物在局部激活补体，吸引中性粒细胞浸润，造成局部组织的慢性炎性损伤。故SLE患者常患有多系统、多器官的损害。根据损害的器官不同，患者可出现发热、皮疹、关节痛、肾损害，心血管病变、浆膜炎、贫血、精神症状等多种临床表现。美国风湿协会与1997年修订了关于SLE诊断的11项ARA标准(ARA，美国风湿病协会)。该11项标准分别为：1.蝶形红斑；2.身体其他部位出现红色、鳞屑状、局限的、隆起的皮肤疹；3.光敏现象；4.口腔粘膜疼痛或溃疡；5.关节疼痛或关节渗出；6.浆膜炎；7.肾脏疾病；8.神经系统疾病；9.血液系统症状如伴网状细胞增多、白细胞减少、淋巴细胞减少的出血性贫血；10.免疫学方法检出抗dsDNA抗体、Sm抗体、抗心磷脂抗体；11.间接免疫荧光法检出ANA。若11项标准中出现4项，诊断SLE的可能性超过80％。抗dsDNA抗体是SLE患者的特征性标志抗体，该抗体阳性为SLE的重要诊断标准之一。抗dsDNA抗体效价与疾病的活动程度有相关性，抗体效价的动态测定为监控治疗提供了有效的实验室手段。抗dsDNA抗体在SLE的发病机制中起重要作用，SLE并发的狼疮性肾炎是由该抗体介导的免疫复合物，抗dsDNA抗体可形成多种冷沉淀而致血管炎，SLE肾炎及典型的蝶形红斑均与该抗体有关。抗dsDNA抗体与细胞核的反应位点主要位于DNA(外围区)脱氧核糖核苷酸框架上，抗dsDNA抗体诊断SLE的特异性高达95％以上。目前临床上检测抗dsDNA抗体常用的方法主要有间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法、放射免疫分析法和化学发光法。其中，最为特异性和敏感性的方法是应用马疫锥虫或绿蝇短膜虫作为抗原进行间接免疫荧光检测。由于该类虫体的动基体由纯净的环状DNA构成，除此之外基本不含有其他细胞核抗原，能与动基体起反应的自身抗体只有抗dsDNA抗体，因而具有高度特异性。但该方法无法实现定量检测且操作繁琐复杂，需要配备昂贵的荧光显微镜，无法在基层医院推广。放射免疫分析法由于示踪物存在放射性，对环境和操作人员均存在污染风险。酶联免疫吸附法需要人工操作，耗时耗力，且准确度和精密度较差，难以获得可靠的结果。在上述现有的检测方法存在缺陷的基础上，化学发光分析法具有灵敏度高，线性范围宽，特异性好，仪器设备操作简单等优点，已成功应用于生命科学、食品科学、临床医学以及环境检测等领域，成为现代分析领域中一种有效的微量及痕量分析技术。然而，化学发光免疫分析法为均相反应体系，dsDNA抗原包被磁球并悬浮于均相体系中，dsDNA抗原易受到交联工艺以及体系环境等诸多因素造成不稳定情况，严重影响试验结果的判断，从而限制该项目在化学发光免疫分析方法上的应用。例如目前公开的一种以金磁微粒为载体，运用间接ELISA法、免疫荧光法或化学发光法检测抗双链DNA抗体的方法。该方法包括以下步骤：(1)将金磁微粒与双链DNA相混合，在一定条件下双链DNA固定在金磁微粒表面或运用金磁微粒从人全血、唾液、精液或质粒中提取DNA并固定在金磁微粒表面；(2)运用间接ELISA法、免疫荧光法或化学发光法检测待测样品中存在的抗双链DNA抗体。其中该现有技术采用物理吸附的方法将双链DNA固定在金磁微粒表面。但在临床使用过程中发现，该方法中双链DNA固定金磁微粒表方式为物理吸附，即通过磁性微球表面与dsDNA抗原之间的静电力相结合，然而，dsDNA分子在均相体系中易受到酶等诸多不确定因素的影响而被破坏，因此通过物理吸附固定dsDNA的磁性微球的稳定性难以保障，固定后的产物在存储和运输过程中易脱落，对试剂灵敏度和稳定性造成影响。在当前公开的另一相关现有技术中，其涉及以酶标板为固相载体，运用化学发光法检测抗双链DNA抗体的方法。该方法包括以下步骤：(1)将人工合成的双链DNA固定在固相载体的表面；(2)运用化学发光法检测待测样品中存在的抗双链DNA抗体。但是该方法依然是将dsDNA抗原通过物理吸附的方式固定在酶标板上，即通过磁性微球表面与dsDNA抗原之间的静电力相结合，但是由于酶标板固定dsDNA抗原的载量有限，在免疫学反应进行过程中，酶标板上固定的dsDNA抗原与样本中的目标抗体反应接触面积有限，易造成空间位阻，因此反应结合效率(抗原包被载体的结合效率、包被抗原与待测抗体反应结合的效率)会受到限制。在现有相关技术中，由于磁球表面的功能基团数量有限，能有效结合dsDNA抗原的数量也同样有限，同时由于dsDNA抗原与磁球的刚性界面直接接触，会对抗原的活性造成一定的影响，且容易掩盖活性位点，导致在检测过程中无法有效结合待测抗体，因此反应结合效率(包被抗原与待测抗体反应结合的效率)会受到限制。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种dsDNA免疫磁性微球体系及其制备方法，以克服现有将dsDNA抗原采用物理吸附即依靠静电力相结合在磁性微球上，而导致的dsDNA结合不稳定和存在空间位阻等不良现象的技术问题。本专利技术的另一目的在于提供一种dsDNA免疫磁性微球保存液，以解决本申请dsDNA免疫磁性微球采用现有保存液保存不稳定的技术问题。本专利技术的又一目的在于提供一种抗dsDNA抗体检测试剂、试剂盒和检测系统，以解决现有相关制剂用于检测抗dsDNA抗体准确性不高的技术问题。为了实现上述专利技术目的，本专利技术的一方面，提供了一种dsDNA免疫磁性微球体系。所述dsDNA免疫磁性微球体系包括磁性微球本体，还包括含氨基聚合物基团和dsDNA抗原，且所述含氨基聚合物基团修饰所述磁性微球本体，所述dsDNA抗原与所述含氨基聚合物基团化学键连接。本专利技术的另一方面，提供了一种dsDNA免疫磁性微球体系的制备方法。所述制备方法包括如下步骤：将经活化处理的磁性微球与氨基聚合物进行反应，然后将反应产物与封闭剂进行处理，获得含氨基聚合物基团修饰的磁性微球；将所述含氨基聚合物基团修饰的磁性微球与dsDNA抗原在活化剂作用下进行反应。本专利技术的又一方面，提供了一种dsDNA免疫磁性微球保存液。所述dsDNA免疫磁性微球保存液包含如下组分：本专利技术的又一方面，提供了一种抗dsDNA抗体检测试剂。所述抗dsDNA抗体检测试剂包括dsDNA免疫磁性微球和所述dsDNA免疫磁性微球的保存液，所述dsDNA免疫磁性微球分散于所述保存液中；且所述dsDNA免疫磁性微球为本专利技术dsDNA免疫磁性微球或由本专利技术制备方法制备的dsDNA免疫磁性微球，所述保存液为本专利技术dsDNA免疫磁性微本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种dsDNA免疫磁性微球体系，包括磁性微球本体，其特征在于，还包括含氨基聚合物基团和dsDNA抗原，且所述含氨基聚合物基团修饰所述磁性微球本体，所述dsDNA抗原与所述含氨基聚合物基团化学键连接。

【技术特征摘要】
1.一种dsDNA免疫磁性微球体系，包括磁性微球本体，其特征在于，还包括含氨基聚合物基团和dsDNA抗原，且所述含氨基聚合物基团修饰所述磁性微球本体，所述dsDNA抗原与所述含氨基聚合物基团化学键连接。2.根据权利要求1所述的dsDNA免疫磁性微球体系，其特征在于：所述含氨基聚合物基团偶联所述dsDNA抗原。3.根据权利要求1或2所述的dsDNA免疫磁性微球体系，其特征在于：所述含氨基聚合物基团由聚乙烯亚胺、聚酰胺、聚丙烯酰胺、聚邻苯二胺中的至少任一种提供；和/或所述磁性微球本体与含氨基聚合物基团的质量比为1：(1-10)；所述含氨基聚合物基团与所述dsDNA抗原质量比为(50-2000)：1。4.一种dsDNA免疫磁性微球体系的制备方法，包括如下步骤：将经活化处理的磁性微球与氨基聚合物进行反应，然后将反应产物与封闭剂进行处理，获得含氨基聚合物基团修饰的磁性微球；将所述含氨基聚合物基团修饰的磁性微球和dsDNA抗原在活化剂作用下进行反应。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：在所述磁性微球与氨基聚合物反应体系中，所述磁性微球与所述氨基聚合物的质量比为1：(1-10)；和/或所述磁性微球与所述封闭剂的质量比为(1-50):1；和/或所述磁性微球的浓度为10mg/mL-20mg/mL；和/或所述氨基聚合物为聚乙烯亚胺、聚酰胺、聚丙烯酰胺、聚邻苯二胺中的至少一种；和/或所述封闭剂为酪蛋白、BSA、明胶中的至少一种。6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于：在所述磁性微球与所述dsDNA抗原反应体系中，所述磁性微球与所述dsDNA抗原的质量比为(50-200)：1；和/或所述磁性微球与所述活化剂的质量比为(2-4):1；和/或所述活化剂选用N,N'-二异丙基碳二亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、二环己基碳二亚胺中的任一种。7.一种dsDNA免疫磁性微球保存液，其特征在于，包含如下组分：8.根据权利要求7所述的dsDNA免疫磁性微球保存液，其特征在于：所述DNA酶抑制剂为胰脱氧核酸酶、DNA拓扑异构酶抑制剂、偏端霉素A中的至少一种；和/或所述多聚物保护剂为海藻糖、蔗糖、果糖、乳糖中的至少一种；和/或所述位点封闭剂为牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶中的至少一种；和/或所...

【专利技术属性】
技术研发人员：饶微，刘坤，袁锦云，刘来壮，李婷华，卢东林，
申请(专利权)人：深圳市新产业生物医学工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44