一种玻璃酸钠分子量和分子量分布的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种玻璃酸钠分子量和分子量分布的检测方法，包括如下步骤：(1)称取玻璃酸钠供试品，用流动相将其稀释成玻璃酸钠浓度为1g/L的溶液，作为供试品溶液；(2)取聚苯乙烯磺酸钠系列对照品PSS 140K、PSS 280K、PSS 1M和PSS 2M，用流动相稀释成浓度为1g/L的溶液，作为对照品溶液；流动相为100mol/L的醋酸铵水溶液；(3)采用液相色谱系统，取对照品溶液100μL进样，用电喷雾检测器进行检测，记录色谱图I；再取所述供试品溶液100μL进样，同法检测，记录色谱图II，用GPC软件绘制校正曲线，计算结果，得到分子量和分子量分布系数；相较于示差检测器具有更高的检测稳定性和重复性。

【技术实现步骤摘要】
一种玻璃酸钠分子量和分子量分布的检测方法
本专利技术涉及化学分析
，具体涉及一种玻璃酸钠分子量和分子量分布的检测方法。
技术介绍
玻璃酸钠(Sodiumhyaluronate,SH)是由(1y4)-O-B-D-葡糖醛酸-(1y3)-2-乙酰氨基-2脱氧-B-D-葡萄糖双糖单位重复连接构成的糖胺聚糖的钠盐，为酸性粘多糖。SH可用做眼科的保护剂及关节腔内注射剂，具有较高的临床价值，SH还用于软组织修复和作为药物载体等，特别是在预防和减少外科术后粘连中取得了较大进展。SH的上述各功能与其相对分子质量大小密切相关。SH的临床疗效与其分子质量紧密相关，不同用途具有不同的分子量范围，用于滴眼剂、骨科、眼科手术和药用辅料的重均分子量及分子量分布分别有不同的规定。所以分子量控制就成为SH质控的重要指标，也是难点和重点。用于玻璃酸钠分子量测定的方法主要有特性黏度法，体积排阻色谱法(SEC法)，激光散射-凝胶渗透色谱联用法(SEC-MALLS法)。SEC法是国内外药典普遍采用的分子质量控制方法，目前局限于采用示差检测器(RID)，用0.2mol/L氯化钠溶液为流动相，示差检测器(RID)受环境影响较大，数据采集比较苛刻，检测分子量存在结果稳定性差和重复性差的缺陷。应用多角度激光光散射仪比较昂贵，难以普及使用。CN105548420A公开了一种MOPS(3-(N-吗啉)丙磺酸，3-(N-Morpholino)propane-sulfonicacid)的的检测方法，该方法以高效液相色谱法进行检测，采用线性归一法对MOPS进行定量，色谱柱为AcclaimTrinityP1，虽然此高效液相色谱法也采用电喷雾检测器，但是其是一种检测微量MOPS的方法，目的是克服现有技术不能检测微量MOPS残留的缺陷，能够检测出HPV疫苗成品中MOPS残留量，提高检测精密度、检测灵敏度和准确性。CN106290614A公开了一种医用透明质酸钠凝胶中透明质酸钠重均分子量和分子量分布系数的检测方法。首先，精密量取药物制剂溶液适量，加流动相稀释成所需浓度的供试液，摇匀，进样，记录色谱图。另取聚苯乙烯磺酸钠对照品，同法测定，用GPC软件绘制校准曲线，使用普适校正法即得。行业标准中采用激光散射-凝胶渗透色谱联用法测定医用透明质酸钠凝胶中透明质酸钠重均分子量和分子量分布系数，因多角度激光光散射仪比较昂贵，难以普及使用。利用此方法检测，使用的仪器普遍性强，测定成本低，结果准确、可靠、稳定性良好。但其使用的仍然是示差检测器(RID)数据采集比较苛刻，检测分子量存在结果稳定性差和重复性差的缺陷。
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题，本专利技术的目的之一是提供一种可以对玻璃酸钠分子量及分子量分布进行有效分析的方法，具有良好的结果稳定性和检测重复性。可以克服示差检测器(RID)受环境影响较大的缺点，为玻璃酸钠分子量及分子量分布检测方法提供依据。为达此目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供一种玻璃酸钠分子量和分子量分布的检测方法，包括如下步骤：(1)制备供试品溶液：称取玻璃酸钠供试品，用流动相将其稀释成玻璃酸钠浓度为0.9-1.1g/L的溶液，作为供试品溶液；(2)制备对照品溶液：取聚苯乙烯磺酸钠系列对照品PSS140K、PSS280K、PSS1M和PSS2M，用流动相将其稀释成浓度为0.9-1.1g/L的溶液，作为对照品溶液；(3)采用液相色谱系统，取所述对照品溶液90-110μL进样，例如90μL、92μL、95μL、98μL、100μL、102μL、105μL、108μL或110μL等，用电喷雾检测器进行检测，记录色谱图I；再取所述供试品溶液90-110μL进样，例如90μL、92μL、95μL、98μL、100μL、102μL、105μL、108μL或110μL等，用电喷雾检测器进行检测，记录色谱图II，用GPC软件绘制校正曲线，使用普适校正法，对照品的K值为0.0018，α值为0.65；玻璃酸钠的K值为.00057，α值为0.75；计算结果，得到玻璃酸钠的分子量和分子量分布系数；所述流动相为90-110mol/L的醋酸铵水溶液，例如mol/L、9mol/L、95mol/L、98mol/L、100mol/L、102mol/L、105mol/L、108mol/L或110mol/L等。本专利技术采用了电喷雾检测器(CAD)测定玻璃酸钠分子量及分子量分布的方法，对玻璃酸钠分子量及分子量分布进行有效分析，供试品溶液和对照品溶液的浓度均为1g/L，具有良好的检测稳定性和重复性。解决了示差检测器(RID)受环境影响较大，平衡时间长，检验效率低的问题。为获得玻璃酸钠分子量及分子量分布准确的结果提供有效检测分析技术手段。现有技术中上没有公开过用电喷雾检测器代替示差检测器进行玻璃酸钠分子量及分子量分布的技术方案，例如CN105548420A公开了一种MOPS(3-(N-吗啉)丙磺酸，3-(N-Morpholino)propane-sulfonicacid)的的检测方法，该方法以高效液相色谱法进行检测，采用线性归一法对MOPS进行定量，色谱柱为AcclaimTrinityP1，虽然此高效液相色谱法也采用电喷雾检测器，但是其是一种检测微量MOPS的方法，目的是克服现有技术不能检测微量MOPS残留的缺陷，能够检测出HPV疫苗成品中MOPS残留量，提高检测精密度、检测灵敏度和准确性。本申请不是对含量的测定，而是针对玻璃酸钠分子量和分子量分布的检测方法，针对的待测物是玻璃酸钠，与上述MOPS的含量检测属于完全不同的技术问题。由于玻璃酸钠属于糖类，既无紫外吸收又不产生荧光，故现有检测玻璃酸钠分子量及分子量分布的技术目前局限于采用示差检测器，没有公开过用电喷雾检测器代替示差检测器进行玻璃酸钠分子量及分子量分布的技术方案。优选地，所述液相色谱系统中的色谱柱为Shodex8.0mm×300mm凝胶色谱柱。为进一步提高准确度，优选地，所述供试品溶液中玻璃酸钠的浓度为0.98-1.02g/L，例如0.98g/L、0.99g/L、1.00g/L、1.01g/L或1.02g/L等。优选地，所述对照品溶液的浓度为0.98-1.02g/L，例如0.98g/L、0.99g/L、1.00g/L、1.01g/L或1.02g/L等。优选地，所述对照品溶液和供试品溶液的进样量各自独立地为95-105μL。为进一步提高样品的分离效果，优选地，所述流动相为98-102mol/L的醋酸铵水溶液。优选地，所述液相色谱系统中的蒸发管温度为50℃。优选地，所述液相色谱系统的液相采集频率在4-5Hz，例如4Hz、4.2Hz、4.5Hz、4.8Hz或5Hz等。优选地，所述液相色谱系统中的液相流速为0.5mL/min。优选地，所述液相色谱系统中的柱温为35℃。优选地，步骤(1)所述供试品溶液在1-5℃下震荡8-12h，充分溶解。作为本专利技术优选的技术方案，所述的玻璃酸钠分子量和分子量分布的检测方法包括如下步骤：(1)制备供试品溶液：称取玻璃酸钠供试品用流动相稀释成玻璃酸钠浓度为1g/L的溶液，在1-5℃下震荡8-12h，作为供试品溶液；(2)制备对照品溶液：取聚苯乙烯磺酸钠系列对照品PSS140K、PSS280K、PSS1M和PS本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种玻璃酸钠分子量和分子量分布的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备供试品溶液：称取玻璃酸钠供试品，用流动相将其稀释成玻璃酸钠浓度为0.9‑1.1g/L的溶液，作为供试品溶液；(2)制备对照品溶液：取聚苯乙烯磺酸钠系列对照品PSS 140K、PSS 280K、PSS 1M和PSS 2M，用流动相将其稀释成浓度为0.9‑1.1g/L的溶液，作为对照品溶液；(3)采用液相色谱系统，取所述对照品溶液90‑110μL进样，用电喷雾检测器进行检测，记录色谱图I；再取所述供试品溶液90‑110μL进样，用电喷雾检测器进行检测，记录色谱图II，用GPC软件绘制校正曲线，使用普适校正法，对照品的K值为0.0018，α值为0.65；玻璃酸钠的K值为.00057，α值为0.75；计算结果，得到玻璃酸钠的分子量和分子量分布系数；所述流动相为90‑110mol/L的醋酸铵水溶液。

【技术特征摘要】
1.一种玻璃酸钠分子量和分子量分布的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备供试品溶液：称取玻璃酸钠供试品，用流动相将其稀释成玻璃酸钠浓度为0.9-1.1g/L的溶液，作为供试品溶液；(2)制备对照品溶液：取聚苯乙烯磺酸钠系列对照品PSS140K、PSS280K、PSS1M和PSS2M，用流动相将其稀释成浓度为0.9-1.1g/L的溶液，作为对照品溶液；(3)采用液相色谱系统，取所述对照品溶液90-110μL进样，用电喷雾检测器进行检测，记录色谱图I；再取所述供试品溶液90-110μL进样，用电喷雾检测器进行检测，记录色谱图II，用GPC软件绘制校正曲线，使用普适校正法，对照品的K值为0.0018，α值为0.65；玻璃酸钠的K值为.00057，α值为0.75；计算结果，得到玻璃酸钠的分子量和分子量分布系数；所述流动相为90-110mol/L的醋酸铵水溶液。2.如权利要求1所述的玻璃酸钠分子量和分子量分布的检测方法，其特征在于，所述液相色谱系统中的色谱柱为Shodex8.0mm×300mm凝胶色谱柱。3.如权利要求1或2所述的玻璃酸钠分子量和分子量分布的检测方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴春宙，薛亮，钱正祥，
申请(专利权)人：上海景峰制药有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31