一种脂肪干细胞在生物组织修复中的应用制造技术

本发明专利技术属于组织工程领域，具体公开了一种脂肪干细胞在生物组织修复中的应用，本发明专利技术利用诱导分化后的脂肪干细胞脂肪在三维生物材料支架上进行增值以加速受损皮肤愈合，缩短愈合时间，使创面更加平整，减少皮肤褶皱，达到美化皮肤痊愈后效果的目的，为皮肤的生长恢复提供了一个较好的愈合条件，为干细胞用于临床治疗皮肤创伤提供参考。

Application of an Adipose Stem Cell in Bioremediation

The invention belongs to the field of tissue engineering, and specifically discloses the application of a fat stem cell in the repair of biological tissue. The invention uses the induced adipose stem cell fat to add value on the three-dimensional biomaterial scaffold to accelerate the healing of damaged skin, shorten the healing time, make the wound more smooth and reduce the skin folds. The purpose of beautifying the skin healing effect is to provide a better healing condition for the recovery of skin growth, and provide reference for the use of stem cells in the clinical treatment of skin trauma.

【技术实现步骤摘要】
一种脂肪干细胞在生物组织修复中的应用
本专利技术涉及组织工程领域，具体地，涉及一种脂肪干细胞在生物组织修复中的应用。
技术介绍
细胞培养技术指的是细胞在体外条件下的生长，在培养的过程中细胞不再形成组织(动物)。细胞培养技术作为一种培养细胞的技术方法在生物学领域已被深入广泛的应用于观察活细胞的形态结构和生命活动和细胞学、遗传学、免疫学、实验医学和肿瘤学等多种学科研究，无论对临床还是基础研究均具有重要意义。皮肤损伤是现代疾病损伤的重要原因之一，许多原因都会导致皮肤受损，例如烧伤、烫伤、外部意外创伤以及皮肤疾病等多种因素均可导致皮肤受损。现在皮肤受损的治疗方式主要通过自体皮片移植、异体皮移植等治疗方式进行，临床上治疗主要是以自体皮片为主，但是，通过自体皮片移植方法治疗皮肤损伤存在着供体皮肤有限和皮肤愈合时间较长以及愈后存在疤痕等问题，给患者生活造成了一定程度的影响，造成治疗的效果不尽理想。
技术实现思路
为克服现有技术的不足，本专利技术提供一种脂肪干细胞在生物组织修复中的应用，对受损的皮肤组织的修复有促进作用。需要说明的是，本专利技术是基于专利技术人的下列发现而完成的：干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为"万用细胞"。基于干细胞具有的强大分化潜能，近年来，随着组织工程学的不断发展，干细胞被越来越多的利用来与生物材料基质进行结合用来促进生物组织修复和疾病的治疗。近年来，干细胞已被用于辅助皮肤伤口愈合和其它一些组织修复以及疾病治疗的研究，其中，相关研究已表明骨髓间充质干细胞在皮肤伤口愈合的过程中起到重要作用和具有积极意义。但是，骨髓间充质干细胞自身也存在一些限制，例如，骨髓间充质干细胞的产量相对较低，而且，要取得骨髓血需要较大的创面，可能会造成相关的后续问题出现。脂肪干细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞，它还具有取材容易、少量组织即可获取大量干细胞，适宜大规模培养，对机体损伤小等优点，而且其来源广泛，体内储备量大，与骨髓间充质干细胞相比更适宜用于自体移植。为实现上述目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种脂肪干细胞在生物组织修复中的应用，所述的干细胞在生物组织修复的应用，包括如下步骤：脂肪干细胞前处理、培养和诱导分化完成后，转移到生物支架上进行增值，以促进皮肤组织修复。优选地，所述的生物支架为三维立体支架。更优选地，所述的三维立体支架材料为聚糖-聚己内酯和壳聚糖-聚丙交酯中的一种。更优选地，所述的三维立体支架材料为壳聚糖-聚丙交酯。更优选地，所述的三维立体支架的结构为孔隙率高的多孔单层方形立体结构。更优选地，所述的三维立体支架的结构为孔隙率高的多孔单层长方形立体结构。优选地，所述的脂肪干细胞前处理过程为所述的脂肪干细胞的前处理为取小白鼠的脂肪，将其剪碎，随后加适量0.16％Ⅱ型胶原酶并搅拌，35℃左右消化35min。更优选地，所述的小白鼠的脂肪为取自小鼠皮下股沟处脂肪组织。优选地，所述的干细胞的培养为将前处理后的脂肪组织离心5min，并加入培养液，在5％CO2浓度，37℃条件下进行培养。更优选地，所述的脂肪组织的离心速度为2000rpm。优选地，所述的干细胞诱导为为取融合度达到85％的第2代的脂肪干细胞，加入诱导培养液对脂肪干细胞进行诱导，在5％CO2浓度，37℃条件下进行培养，期间每2天换液1次，诱导培养时间为2～3个星期。更优选地，所述的干细胞诱导为双系诱导，分别对脂肪干细胞进行成骨诱导分化和成脂诱导分化。更优选地，所述的成骨诱导分化培养时间为3周，成脂诱导分化培养时间为4周。优选地，所述的生物组织为生物受损的皮肤组织。更优选地，所述的生物组织修复为修复生物受损的表皮组织。优选地，所述的生物组织修复为：首先，环境条件为35℃，5％CO2浓度条件下，对脂肪干细胞待细胞融合达到90％时，进行传代；其次，取第3代脂肪干细胞分别进行成骨诱导分化和成脂诱导分化；制备壳聚糖-聚丙交酯支架；随后，将脂肪干细胞与壳聚糖-聚丙交酯支架共同培养，进行受损皮肤组织。根据本专利技术的另一方面，本专利技术提供了一种脂肪干细胞在生物组织修复中的应用。该专利技术利用前面所述的干细胞对生物受损皮肤组织进行修复。专利技术人惊奇的发现，采用本方法培养干细胞，显示该培养液与干细胞有良好的兼容性，有利于细胞活性的保持，与肝素相比，干细胞的神经分化能力更强，干细胞往神经方向分化率更高。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供了本专利技术提供了一种脂肪干细胞在生物组织修复中的应用，能够促进受损皮肤组织的修复，有利于缩短受损皮肤的愈合时间，使创面愈后更加平整，减少皮肤褶皱，起到美化皮肤痊愈额效果，而且脂肪干细胞具有取材容易、少量组织即可获取大量干细胞，适宜大规模培养，对机体损伤小等优点，而且其来源广泛，体内储备量大，与骨髓干细胞等其它干细胞相比更适宜用于自体移植。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。实施例1：本实施例中，以壳聚糖-聚丙交酯为材料上制作成的三维多孔支架为桥梁；为脂肪干细胞的增值、新陈代谢等提供相应的空间和场所，最后通过检查受损皮肤的修复效果，通过与脂肪干细胞组、多孔支架组、空白组(自体修复)进行对比、分析判断脂肪干细胞对于受损皮肤组织修复的作用和效果。具体如下：1、脂肪干细胞的分离和培养1.1细胞的分离和培养(1)小鼠脂肪干细胞细胞分离和培养取死亡后的小鼠皮下股沟处脂肪组织，并用Hanks液冲洗，再用剪刀将脂肪组织剪碎，随后加适量0.16％Ⅱ型胶原酶并搅拌，35℃左右消化35min。随后在并将液体进行离心(2000rpm，5min)，并往里加入细胞培养液，并在环境条件为35℃，5％CO2浓度条件下进行培养，待细胞融合达到90％时，进行传代，图像流式对脂肪干细胞进行检测，并参照文献的所述的方法进行。(2)脂肪干细胞的诱导分化(1)脂肪干细胞成骨诱导分化取第3代的脂肪干细胞，先用蛋白酶对脂肪干细胞进行消化，之后再进行接种，待细胞贴壁后，分别往里加入成骨诱导液(标准培养基添加5％血清、5μmol/L氢化可的松、0.1mol/LFF地塞米松、50μg/mL抗坏血酸+10mmol/Lβ-甘油磷酸钠)，需每隔2天换一次培养液，3周末时用茜素红检查成骨分化情况，培养4周。(2)脂肪干细胞成脂诱导分化取第3代的脂肪干细胞，先用蛋白酶对脂肪干细胞进行消化，之后再进行接种，待细胞贴壁后，分别往里加入成骨诱导液(标准培养基添加1mol/L地塞米松、1μmol/L吲哚美辛、5μg/mL胰岛素和0.1mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤)，需每隔2天换一次培养液，2周末时用油红O染色法检查其成脂情况，培养4周。2、壳聚糖-聚丙交酯支架的制备纳米支架由聚丙交酯和壳聚糖按质量比70～85:15～30组成，先取一定量的聚丙交酯溶于氯仿中，配成浓度为15％～25％的溶液，待其全部溶解后，加入壳本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脂肪干细胞在生物组织修复中的应用，其特征在于，所述的脂肪干细胞在生物组织修复的应用，包括如下步骤：脂肪干细胞前处理、培养和诱导分化完成后，转移到生物支架上进行增值，以促进皮肤组织修复。

【技术特征摘要】
1.一种脂肪干细胞在生物组织修复中的应用，其特征在于，所述的脂肪干细胞在生物组织修复的应用，包括如下步骤：脂肪干细胞前处理、培养和诱导分化完成后，转移到生物支架上进行增值，以促进皮肤组织修复。2.根据权利要求1所述的脂肪干细胞在生物组织修复中的应用，其特征在于，所述的生物支架为三维立体支架。3.根据权利要求2所述的脂肪干细胞在生物组织修复中的应用，其特征在于，所述的生物支架的材料为壳聚糖-聚己内酯和壳聚糖-聚丙交酯中的一种。4.根据权利要求2所述的脂肪干细胞在生物组织修复中的应用，其特征在于，所述的生物支架的结构为孔隙率高的多孔单层方形立体结构。5.根据权利要求1所述的脂肪干细胞在生物组织修复中的应用，其特征在于，所述的脂肪干细胞的前处理为取小白鼠的脂肪，将其剪碎，随后加适量0.16％Ⅱ型胶原酶并搅拌，35℃消化35min。6.根据权利要求1所述的脂肪干细胞在生物组织修复中的应用，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨金源，
申请(专利权)人：深圳万智联合科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44