本发明专利技术涉及miR‑146a在制备治疗难治性癫痫的药物中的应用。本发明专利技术利用难治性癫痫动物模型，通过一系列研究发现miR‑146a可以减少难治性癫痫大鼠脑内的与耐药相关的多药转运体—P糖蛋白(PGP)表达，提高难治性癫痫大鼠海马细胞外液中抗癫痫药物(AEDs)的药物浓度，协助AEDs改善耐药大鼠的电生理活动，并能改善脑内炎症反应，这提示miR‑146a可改善难治性癫痫的耐药。miR‑146a在制备治疗难治性癫痫的药物中具有潜在的应用前景，为难治性癫痫的治疗提供了一种有效途径。
Application of miR-146a in the preparation of drugs for intractable epilepsy
The invention relates to the application of miR 146a in the preparation of drugs for treating intractable epilepsy. Using a model of intractable epilepsy, the present invention has found that miR 146a can reduce the expression of multidrug transporter P glycoprotein (PGP) in the brain of intractable epileptic rats and improve the drug concentration of antiepileptic drugs (AEDs) in the extracellular fluid of intractable epileptic rats and assist AEDs in improving drug resistant rats. The electrophysiological activity can also improve the inflammatory reaction in the brain, suggesting that miR 146a can improve the drug resistance of intractable epilepsy. MiR 146a has potential application in the preparation of drugs for treating intractable epilepsy. It provides an effective way for the treatment of intractable epilepsy.
【技术实现步骤摘要】
miR-146a在制备治疗难治性癫痫的药物中的应用
本专利技术涉及生物医药
，具体地说，涉及miR-146a在制备治疗难治性癫痫的药物中的应用。
技术介绍
大约30％左右的癫痫患者对抗癫痫药(antiepilepticdrugs，AEDs)不敏感，出现难以被控制的反复发作，称之为药物难治性癫痫。难治性癫痫最突出的特征就是对有不同化学结构、不同作用机制的各类AEDs有明显的耐药性。多药转运体P-糖蛋白(P-glycoprotein，PGP)介导的难治性癫痫耐药已被国内外公认(参见文献1：Borstp,EversR,KoolM,etal.Afamilyofdrugtransporters:themultidrugresistance-associatedproteins[J].JNatlCancerInst.2000,92(16):1295-1302.；文献2：PotschkaH,FedrowitzM,LoscherW.P-glycoproteinandmultidrugresistance-associatedproteinareinvolvedintheregulationofextracellularlevelsofthemajorantiepilepticdrugcarbamazepineinthebrain[J].Neuroreport.2001,12(16):3557-3560.)。PGP是最早发现参与脑内药物转运的转运体，也是研究最为广泛的多药转运体(参见文献1：LeeJC,LaydonJT,McDonnel,etal.Aproteinkinaseinvolvesintheregulationofinflammatorycytokinebiosynthesis[J].Nature.1994,372:739；文献2：LavoieJN,LambertH,HickeyE,etal.Modulationofcellularthermoresistanceandactinfilamentstabilityaccompaniesphospharylationinducedchangesintheoligomericstructureofheatshockprotein27[J].MolCellBiol.1995,15:505-508.)。PGP是一种分子量为170kD的跨膜糖蛋白，完整的糖蛋白是由1281个氨基酸组成的两个完全相同的单体构成，每个单体均有6个跨膜区和1个三磷酸腺苷(ATP)结合点。跨膜区作为膜通道有利于药物转运，而ATP结合点与能量供应有关，这种PGP跨膜结构具有能量依赖性“药泵”的功能，它能将药物和其它疏水性化合物主动转运出细胞。在人体血脑屏障部位，PGP位于毛细血管近血管腔的一侧和毛细血管外星形胶质细胞足突上，参与构成了血脑屏障。因其能识别多种不同作用机制的AEDs，主动将药物泵出血脑屏障，引起脑内药物浓度下降，从而导致耐药。MicroRNA(miRNA)是一类长度约为18-25个核苷酸的非蛋白编码的内源性小分子RNA，其通过碱基互补配对可以特异的结合mRNA的3’端非翻译区，抑制靶mRNAs的降解或者翻译而负性调节转录后的基因表达，是天然存在的基因调控小分子。生物信息学预测显示，30％的人类基因受microRNA调控。根据前期的大量研究发现，miRNA通过调控各种基因的表达，广泛参与细胞增殖、分化、凋亡、炎症、免疫应答、肿瘤形成等疾病过程。《中南大学》2013年学位论文“MicroRNAs与内侧颞叶癫痫发生发展机制的相关性研究”，通过运用逆转录聚合酶链反应、蛋白质印迹和实时荧光定量PCR等方法，检测了MTLE急性期、潜伏期和慢性自发发作期(分别为氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫持续状态后的2h、3w和8w)海马组织中IL-1β及miR-146a的表达情况，结果IL-1β和miR-146a在儿童和幼大鼠MTLE的不同时期表达不同，IL-1β和miR146a表达均明显增加，但呈负相关；IL-1β在MTLE急性期海马组织中表达最高，而此时miR-146a的表达最低；在miR-146a表达最高的潜伏期，IL-1β表达则最低；在慢性自发发作期两者的表达均增加，但增加的幅度低于急性期和潜伏期。证实IL-1β和miR-146a在儿童和幼大鼠MTLE模型海马组织中表达均增加。期刊《中国神经精神疾病杂志》2013年第39卷第8期刊出的论文“微小核糖核酸miR-146a-5p、miR-23a-3p在儿童耐药性癫痫血清中的表达”，探讨了miR-146a-5p、miR-23a-3p在耐药性癫痫患儿血清中的表达水平及其临床意义，通过收集68例耐药性癫痫患儿、64例非耐药性癫痫患儿及55例体检健康者静脉血标本，用Hiseq测序法对血清miRNA测序并测定表达量，用RT-qPCR验证耐药性癫痫患儿血清差异性表达的miR-146a-5p、miR-23a-3p，结果表明耐药性癫痫患儿miR-146a-5p和miR-23a-3p表达水平均显著升高(P<0.05)，而且与非耐药性癫痫用药前比较，二者在耐药性癫痫用药前血清中表达已经上升。期刊《海南医学院学报》2016年第22卷第6期刊出的论文“癫痫患者脑脊液和血清中miRNAs含量检测及其对相关细胞因子的调控作用”，研究了癫痫患者脑脊液和血清中miRNAs的含量及其对相关细胞因子的调控作用，通过采集癫痫组和非癫痫组患者的血清和脑脊液，检测miR-146a、miR-221、miR-222、miR-21、miR-34a以及炎性因子、凋亡分子的含量，结果表明癫痫组脑脊液中miR-146a、miR-221、miR-222、miR-21的含量显著低于非癫痫组，血清中miR-146a、miR-221、miR-222、miR-21的含量显著高于非癫痫组。由此可见，miR-146a在不同种类癫痫及不同组织甚至癫痫不同阶段的表达都有所不同，现有技术中也存在大量相反的结论。因此miR-146a是否能用于治疗癫痫目前还不明朗。目前还未见到将小分子miR-146a输送到大鼠体内，通过基因治疗的方法实现对PGP表达的抑制，以治疗难治性癫痫的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种miR-146a新用途。第一方面，提供了miR-146a在制备治疗难治性癫痫的药物中的应用。所述的难治性癫痫对丙戊酸钠、苯巴比妥和/或苯妥英钠具有耐药性。所述的药物用于改善或预防难治性癫痫对抗癫痫药的耐药性。所述的难治性癫痫为哺乳动物所患难治性癫痫，如人、兔、狗、大鼠、小鼠等，如大鼠所患的级别在IV级以上的难治性癫痫。第二方面，提供了miR-146a在制备药物中的应用，所述的药物用于：a)降低海马和大脑皮层PGP的表达；b)提高海马细胞外液中抗癫痫药的药物浓度；或c)降低癫痫发作分级。第三方面，提供了miR-146a在制备苯巴比妥和/或苯妥英钠的增效剂中的应用。第四方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物含有：a)miR-146a；和b)苯巴比妥和/或苯妥英钠。所述的药物组合物的剂型为注射剂。所述的药物组合物还包含常规的药学辅料。本专利技术优点在于：本专利技术在难治性癫痫动物模本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.miR‑146a在制备治疗难治性癫痫的药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.miR-146a在制备治疗难治性癫痫的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的难治性癫痫对丙戊酸钠、苯巴比妥和/或苯妥英钠具有耐药性。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物用于改善或预防难治性癫痫对抗癫痫药的耐药性。4.miR-146a在制备药物中的应用，其特征在于，所述的药物用于：a)降低海马和大脑皮层PGP的表达；b)提高海马细胞外液中...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈英辉，邵一叶，谢阳梅，邓小琳，汪铭，
申请(专利权)人：复旦大学附属金山医院，
类型：发明
国别省市：上海,31
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