三萜类化合物及其制备与应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，具体涉及从桦褐孔菌中提取分离得到两个新的三萜类化合物及其制备与应用。本发明专利技术提供的三萜类化合物结构如式(1)和(2)所示。经体外活性试验评价，本发明专利技术的化合物能显著抑制α‑葡萄糖苷酶的活性，活性优于临床用药阿卡波糖，表明其具有降血糖的活性。因此，可用于制备新的降血糖药物。本发明专利技术为研发新型的糖尿病治疗药物提供了新的来源。

Three terpenoids and their preparation and Application

The invention relates to the field of biomedicine, in particular to extracting and separating two new three terpenes from inhperoborus obliquus and their preparation and application. The three terpenoid compounds provided by the invention are shown in formula (1) and (2). The activity of alpha glucosidase was significantly inhibited by the compound in vitro, and its activity was better than the clinical use of acarbose, indicating that it had hypoglycemic activity. Therefore, it can be used for the preparation of new hypoglycemic drugs. The invention provides a new source for the development of new diabetes treatment drugs.

【技术实现步骤摘要】
三萜类化合物及其制备与应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体的涉及一种从桦褐孔菌(Inonotusobliquus)中分离得到的新的三萜类化合物及其制备方法和其在作用于α-葡萄糖苷酶方面的应用。
技术介绍
糖尿病是一种由多基因遗传与环境因素共同作用所引发的、以持续高血糖为特征的代谢紊乱综合症。其病理特征表现为胰岛素分泌不足或者胰岛素抵抗，导致体内糖、脂肪、蛋白质、水、电解质代谢紊乱。调查表明，糖尿病可引发心、脑、肝、肺、肾、神经等急性或慢性并发症，是继心脑血管疾病、癌症之后危害人类身体健康的第三大疾病。糖尿病的高发病率、高致残率及其终身性对人类健康的危害十分严重，给个人和社会带来沉重的经济负担。为此，关于糖尿病的防治己引起国内外学者和政府的高度重视。α-葡萄糖苷酶抑制剂是20世纪70年代开发的一类新型口服降血糖药物，能竞争性抑制小肠内α-葡萄糖苷酶的活性，延缓或抑制葡萄糖在肠道内的吸收，有效降低餐后高血糖，已被广泛用于糖尿病的治疗。目前，市场以α-葡萄糖苷酶为靶点的糖尿病治疗药物主要有阿卡波糖与米格列醇。阿卡波糖是第一个上市的α-葡萄糖苷酶抑制剂，其副作用小，但活性不强，日服用量大，且药品价格较高，病人经济负担较大。米格列醇的活性较阿卡波糖强，但应用时胃肠道不良反应发生率高，市场反应并不好。新型α-葡萄糖苷酶抑制剂的发现，是糖尿病治疗药物研发的重要方向之一。桦褐孔菌(Inonotusobliquus)属于真菌门、担子菌亚门、层菌纲、非褐菌目、多孔菌科、褐卧孔菌属，主要生长于白桦树、银桦、榆树、赤杨等的树皮下或树木砍伐后的枯干上，能够引起树木的白腐。桦褐孔菌的化学成分结构类型丰富多样，主要包括多酚、甾体、生物碱和萜类等。其中，羊毛脂烷型四环三萜类化合物和多酚类化合物是其发挥各类生物学活性的物质基础。
技术实现思路
本专利技术提供两种新型三萜类化合物及其制备方法和应用，采用以下结束方案：如式(1)或式(2)所示的三萜类化合物，其结构式为：本专利技术还提供一种如所述的式(1)或式(2)所示的三萜类化合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：将桦褐孔菌粉碎，异丙醇浸泡提取，将提取液减压浓缩，得粗提物经纯化分离得式(1)和式(2)所示的化合物。进一步，本专利技术所述纯化分离为：利用硅胶柱层析对粗提物进行初步分离，以石油醚/乙酸乙酯体积比为10:1-1:1的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，以薄层层析为指导，展开剂采用体积比2:1的石油醚/乙酸乙酯混合液，合并Rf值相近的组分，取Rf值为0.6-0.7的洗脱部位，进行反向柱层析分离，以甲醇/水体积比为60:40-90:10的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，以薄层层析为指导，展开剂采用体积比2:1的石油醚/乙酸乙酯混合液，合并Rf值为0.63-0.67的组分，得式(1)所示化合物，剩余部分合并后经硅胶柱层析分离，以氯仿/甲醇体积比为30:1的混合液为洗脱剂进行洗脱，以薄层层析为指导，展开剂采用体积比18:1的氯仿/甲醇混合液，合并Rf值为0.45-0.5的组分得式(2)所示的化合物。更进一步，本专利技术所述纯化分离具体为：利用硅胶柱层析对粗提物进行初步分离，以石油醚/乙酸乙酯体积比为10:1、8:1、6:1、4:1、2:1、1:1的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，以薄层层析为指导，展开剂采用体积比2:1的石油醚/乙酸乙酯混合液，合并Rf值相近的组分，取Rf值为0.6-0.7的洗脱部位，进行反向柱层析分离，以甲醇/水体积比为60:40、70:30、80:20、90:10的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，以薄层层析为指导，展开剂采用体积比2:1的石油醚/乙酸乙酯混合液，合并Rf值为0.63-0.67的组分，得式(1)所示化合物，剩余部分合并后经硅胶柱层析分离，以氯仿/甲醇体积比为30:1的混合液为洗脱剂进行洗脱，以薄层层析为指导，展开剂采用体积比18:1的氯仿/甲醇混合液，合并Rf值为0.45-0.5的组分得式(2)所示的化合物。此外，本专利技术所述的式(1)或式(2)所示的三萜类化合物可应用于抑制α-葡萄糖苷酶活性。进一步，本专利技术所述的式(1)或式(2)所示的三萜类化合物可应用于制备糖尿病治疗药物。以下将式(1)所示化合物和式(2)所示化合物简称为化合物1和化合物2。本专利技术的有益效果在于：(1)通过有机溶剂浸提和色谱柱分离等系列流程得到化合物，制备方法具有简单、快速、获得的化合物纯度高等优点。(2)化合物具有显著的体外α-葡萄糖苷酶抑制活性，优于临床用药阿卡波糖，可以在糖尿病治疗药物研发中获得应用。以此类化合物为先导物，开展结构优化，对于新型糖尿病治疗药物研发具有重要意义。附图说明图1是化合物1的氢谱。图2是化合物1的碳谱。图3是化合物1的HSQC谱。图4是化合物1的1H-1HCOSY谱。图5是化合物1的HMBC谱。图6是化合物1的NOESY谱。图7是化合物2的氢谱。图8是化合物2的碳谱。图9是化合物2的HSQC谱。图10是化合物2的1H-1HCOSY谱。图11是化合物2的HMBC谱。图12是化合物2的NOESY谱。图13：(a)化合物1的结构；(b)主要的1H-1HCOSY和HMBC相关；(c)主要的NOE相关；(d)X-ray单晶衍射结果。图14：(a)化合物2的结构；(b)主要的1H-1HCOSY和HMBC相关；(c)主要的NOE相关；具体实施方式本专利技术结合附图和实施例，对本专利技术的上述内容做进一步的详细说明，但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于下述的实例，凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。实施例1(1)粗提物的制备桦褐孔菌10公斤，粉碎得菌粉，菌粉用异丙醇20L浸提4次(每次7天)，合并提取液，减压浓缩，得到桦褐孔菌粗提物(177g)。(2)分离纯化利用硅胶柱层析对该提取物进行初步分离，以石油醚/乙酸乙酯的体积比为10:1、8:1、6:1、4:1、2:1、1:1的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，以薄层层析(展开剂为体积比2:1的石油醚/乙酸乙酯混合液)为指导，合并Rf值相近的组分，得到七个洗脱部位，记为Fr.A→G；取Rf值为0.6-0.7的Fr.D经ODSC18柱层析分离，以甲醇/水的体积比为60:40、70:30、80:20、90:10的混合液为洗脱剂梯度洗脱，以薄层层析(展开剂为体积比2:1的石油醚/乙酸乙酯混合液)为指导，合并Rf值0.63-0.67的组分，得化合物1(110mg)，剩余部分合并记为Fr.D1A；将Fr.D1A再经硅胶柱层析分离，以体积比30:1的氯仿/甲醇混合液为洗脱剂洗脱，以薄层层析(展开剂为体积比18:1的氯仿/甲醇混合液)为指导，合并Rf值0.45-0.5的组分得化合物2(3mg)。实施例2式(1)所示化合物的结构鉴定化合物1为白色无定型粉末，高分辨质谱给出准分子离子峰m/z527.3683([M+H]+,C31H52NaO5+；Calcd.527.3707)，结合氢谱、碳谱如图1,2，确定其分子式为C31H52O5，不饱和度为六。旋光[α]25D＝-4.0(c0.1,CHCl3)。红外光谱于1680和3516cm-1处的吸收峰分别提示化合物存在羰基和羟基。1H-NMR谱显示七组单峰甲基质子信号(δH0.69,3H,s；δH0.92,3H,s本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.如式(1)或式(2)所示的三萜类化合物，其结构式为：

【技术特征摘要】
1.如式(1)或式(2)所示的三萜类化合物，其结构式为：2.如权利要求1所述的式(1)或式(2)所示的三萜类化合物的制备方法，其特征在于所述制备方法包括以下步骤：将桦褐孔菌粉碎，异丙醇浸泡提取，将提取液减压浓缩，得粗提物经纯化分离得式(1)和式(2)所示的化合物。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述纯化分离：利用硅胶柱层析对粗提物进行初步分离，以石油醚/乙酸乙酯体积比为10:1-1:1的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，以薄层层析为指导，展开剂采用体积比2:1的石油醚/乙酸乙酯混合液，合并Rf值相近的组分，取Rf值为0.6-0.7的洗脱部位，进行反向柱层析分离，以甲醇/水体积比为60:40-90:10的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，以薄层层析为指导，展开剂采用体积比2:1的石油醚/乙酸乙酯混合液，合并Rf值为0.63-0.67的组分，得式(1)所示化合物，剩余部分合并后经硅胶柱层析分离，以氯仿/甲醇体积比为30:1的混合液为洗脱剂进行洗脱，以薄层层析为指导，展开剂采用体积比18:1的氯仿/甲醇混合液，合并Rf值为0.45-0.5的组分得式(2...

【专利技术属性】
技术研发人员：应优敏，单伟光，占扎君，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33