一种酶法制备脂肪代谢调节剂组合物的方法技术

本发明专利技术提供了一种酶法制备脂肪代谢调节剂组合物的方法，它将金针菇柄水溶液‑乙醇的混合液用果胶酶、蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶处理。本发明专利技术用酶法制取的调节剂组合物包括提取自金针菇柄的可溶性多糖(FVSP)和倍半萜(FVST)。其酶解多糖纯度高，安全性好，尤其适合于医药、食品、绿色养殖领域中的运用。本发明专利技术还提供了获得调节剂组合物的水‑乙醇含几丁质酶的复合酶解工艺、真空浓缩方法、色谱分离及喷雾干燥技术。本发明专利技术获得的调节剂组合物可调节实验动物和禽类的脂肪代谢，提高胴体瘦肉率。

Method for preparing fat metabolism regulator composition by enzyme method

The invention provides a method for the preparation of a fat metabolism regulator composition by an enzyme method, which is treated with a pectinase, protease, cellulase and chitinase by the mixture of ethanol in a water solution of a golden needle mushroom handle. The regulator composition prepared by enzyme method comprises soluble polysaccharide (FVSP) extracted from Flammulina velutipes handle and sesquiterpene (FVST). It has high purity and good safety. It is especially suitable for application in the fields of medicine, food and green culture. The invention also provides a compound enzymatic hydrolysis process for the aqueous ethanol containing chitinase, a vacuum concentration method, a chromatographic separation and a spray drying technology. The modifier composition obtained by the invention can adjust the fat metabolism of experimental animals and poultry, and improve the lean meat rate of carcass.

【技术实现步骤摘要】
一种酶法制备脂肪代谢调节剂组合物的方法
本专利技术涉及农产品加工领域，更具体地涉及应用酶工程技术自金针菇柄中提取分离脂肪代谢调节剂组合物的方法。
技术介绍
随着人们生活水平的提高，对畜禽肉品的品质要求也越来越高，无公害且胴体瘦肉率高是目标所在。这就要求在养殖过程中既不能添加诸如瘦肉精之类的化学品，又要调节脂肪代谢，提高瘦肉占比，因此促使人们在不用大幅提高养殖成本的前提下从天然产物中筛选提取。金针菇学名毛柄金钱菌，又称毛柄小火菇、构菌、朴菇、冬菇、冻菌、金菇、智力菇等，植物学名为Flammulinavelutipes(Fr.)。我国是世界上金针菇等食用菌类的主要生产和消费国之一，金针菇采收时，紧邻培养基的菇柄部分会被切除，产生大量的废弃物，约占原料的20％-30％。其通常直接作为饲料加以利用，使用价值很低，其中含有的蛋白质、多糖、萜类、矿质元素等生物活性成分没有得到充分利用，因此，将菇柄进行生物酶处理，可以增加动物机体的吸收利用，提高其附加值，促进金针菇的综合利用。已有大量研究表明，金针菇多糖和萜类物质具有提高免疫和降血脂的功能，其提取方法多采用热水提取法，也有采用酶法提取多糖。前者能耗较高，且不能同时提取萜类物质；后者大多采用单一酶，提取效率低，尤其是没有根据食用菌细胞壁的组成特点采用几丁质酶，因而提取效率差。此外，由于种种原因，本领域尚没有在水-乙醇体系中酶法同时生产金针菇柄多糖和萜类的工艺。综上所述，本领域迫切需要开发对环境友好的、有效的利用金针菇柄的深加工技术。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种对环境友好的、有效的利用金针菇柄生产多糖和萜类组合物的方法。本专利技术的技术方案为：一种酶法制备脂肪代谢调节剂组合物的方法，包括步骤：(a)将金针菇柄水溶液-乙醇的混合液用果胶酶处理，获得经果胶酶处理的第一酶解液；(b)将所述的第一酶解液用蛋白酶处理，获得经蛋白酶处理的第二酶解液；(c)将所述的第二酶解液用纤维素酶处理，获得经纤维素酶处理的第三酶解液；(d)将所述的第三酶解液用几丁质酶处理，获得经几丁质酶处理的第四酶解液；(e)从所述的第四酶解液中进行过滤，分离出脂肪代谢调节剂组合物溶液。所述的制备脂肪代谢调节剂组合物的方法还包括步骤：(f)对步骤(e)获得的组合物溶液进行脱色、浓缩从而制得浓缩液；(g)对所述的浓缩液进行干燥。本专利技术应用所述的制备方法制备一种脂肪代谢调节剂组合物，所述的调节剂组合物组分的组成为金针菇柄可溶性多糖和倍半萜，其中多糖分子量在10万～100万道尔顿，其多糖组成包括：葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖和岩藻糖；其倍半萜结构为2，3，4，5-四氢-2，7-二羟基-5，8，10，10-四甲基-2，5-亚甲基-1-苯并氧杂分子量248，薄层层析位移值＝0.35，紫外最大吸收峰225nm和5-甲基-2(3-氧-1，2，2-三甲基环戊基)苯醌分子量246，Rf＝0.68，紫外最大吸收峰242nm。所述的脂肪代谢调节剂组合物被作为添加剂用于食品或饲料；其脂肪代谢调节剂组合物的功能在于调节脂肪代谢和提高畜禽瘦肉率。本专利技术的主要优点在于：(1)本专利技术采用复合酶解法，尤其是几丁质酶的首次应用于金针菇炳的降解，由于具有特异性，可选择性地酶解切断特定链，酶解过程可控，提高酶解效率，从而得到高收率的金针菇多糖，而且反应条件温和，没有强酸强碱，减少了环境污染，可实现清洁生产。其酶解多糖纯度高，安全性好，尤其适合于医药、食品、绿色养殖领域中的运用。(2)本专利技术首次采用水-乙醇体系进行金针菇柄的复合酶解，可一次性提取多糖和倍半萜类功效成分，降低生产成本，提高金针菇柄的综合利用价值。(3)本专利技术制备的组合物具有调节脂肪代谢，提高胴体瘦肉率的作用。具体实施方式本专利技术人经过广泛而深入的研究，首次采用含有几丁质酶的复合酶工程方法对金针菇柄中的多糖和倍半萜类组合物成功地进行了提取分离，获得了有功能的脂肪代谢调节组合物。它们可作为添加剂用于食品和畜禽养殖加工过程。在此基础上完成了本专利技术。本专利技术中的名词说明1、金针菇柄术语“金针菇柄”包括干金针菇柄以及湿金针菇柄。可用于本专利技术的金针菇柄没有特别限制，此外，应理解，术语“金针菇柄”不仅包括纯的金针菇柄，还可包括完整的金针菇。2、酶文中所用“复合酶”指用于的本专利技术酶法的4种酶的总称，即果胶酶、蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶。所述的果胶酶、纤蛋白酶、维素酶和几丁质酶的用量没有特别限制，只要各种酶能够发挥其酶解功能即可。果胶酶、蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶都是可以通过市售方式购买或者通过现有技术中已知的方法进行制备。根据所采用酶的种类，可以在其最适pH值或其附近范围、最适温度或其附近范围下进行酶解。本专利技术第一方面提供了一种酶法制备脂肪代谢调节剂组合物的方法，在本专利技术的酶工程制备方法中，包括原料金针菇柄水溶液的预处理制备步骤：将金针菇柄原料在水中浸泡1-12小时，金针菇柄原料(g)与水(ml)的比例选择在1∶10-1∶2之间，调溶液pH到1-7，100℃-121℃灭菌10-50分钟，后冷却到35℃-55℃，制成金针菇柄水溶液。所述的酶法制备脂肪代谢调节剂组合物的方法包括步骤：(a)将金针菇柄水溶液-乙醇的混合液用果胶酶处理，获得经果胶酶处理的第一酶解液；(b)将所述的第一酶解液用蛋白酶处理，获得经蛋白酶处理的第二酶解液；(c)将所述的第二酶解液用纤维素酶处理，获得经纤维素酶处理的第三酶解液；(d)将所述的第三酶解液用几丁质酶处理，获得经几丁质酶处理的第四酶解液；(e)从所述的第四酶解液中进行过滤，分离出脂肪代谢调节剂组合物溶液。在优选例中，步骤(a)中所述的金针菇柄水溶液-乙醇的混合液，金针菇柄水溶液∶乙醇的体积比值范围为99∶1至85∶15之间。在优选例中，对于1克金针菇柄干重，所述的果胶酶、蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶4种酶的总用量10-1000IU。果胶酶、蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶的用量之间的重量比例为：0.5-5∶0.2-1∶0.5-5∶0.5-2。在步骤(a)中，用果胶酶进行处理的条件为：在温度25℃-65℃，pH1.0-pH9.0，10转-150转/分钟搅拌，35℃-55℃的条件下酶解1-24小时(较佳4-16小时)。在步骤(b)至(d)中，用酶进行处理的条件为：将前一步骤获得的酶解液温度调至100℃保温8-15分钟，然后降温至温度25℃-65℃，加入相应酶，再调整pH值1.0-pH9.0，在10转-150转/分钟搅拌，35℃-55℃的条件下酶解1-24小时(较佳4-16小时)。在步骤(a)-(d)中，对于处理后获得的酶解液还要进行酶灭活处理。所述的酶灭活处理是在70-100℃下放置1-20分钟。在优选例中，步骤(b)中所述的蛋白酶是酸性蛋白酶。本专利技术中，当使用果胶酶和酸性蛋白酶时，可用酸酸化溶液。其中，采用的酸没有特别限制，可以是盐酸，硫酸等无机酸或乙酸等有机酸，较佳地是盐酸，其浓度通常2-8N。通常将pH调节为1-5.5，较佳的pH2.5-3.5即可。当需要中和酸或调节PH时，可使用碱。其中，采用的碱没有特别限制，可以是氢氧化钠，氢氧化钾、碳酸钠等无机碱，也可使用常规的有机碱，较佳地是氢氧化钠，其浓度通常2-8N。使用纤维素酶或几丁质酶时，通常可用碱将酸性溶液的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酶法制备脂肪代谢调节剂组合物的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：(a)将金针菇柄水溶液‑乙醇的混合液用果胶酶处理，获得经果胶酶处理的第一酶解液；(b)将所述的第一酶解液用蛋白酶处理，获得经蛋白酶处理的第二酶解液；(c)将所述的第二酶解液用纤维素酶处理，获得经纤维素酶处理的第三酶解液；(d)将所述的第三酶解液用几丁质酶处理，获得经几丁质酶处理的第四酶解液；(e)从所述的第四酶解液中进行过滤，分离出脂肪代谢调节剂组合物溶液。

【技术特征摘要】
1.一种酶法制备脂肪代谢调节剂组合物的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：(a)将金针菇柄水溶液-乙醇的混合液用果胶酶处理，获得经果胶酶处理的第一酶解液；(b)将所述的第一酶解液用蛋白酶处理，获得经蛋白酶处理的第二酶解液；(c)将所述的第二酶解液用纤维素酶处理，获得经纤维素酶处理的第三酶解液；(d)将所述的第三酶解液用几丁质酶处理，获得经几丁质酶处理的第四酶解液；(e)从所述的第四酶解液中进行过滤，分离出脂肪代谢调节剂组合物溶液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(a)中所述的金针菇柄水溶液的制备步骤是：将金针菇柄原料在水中浸泡1-12小时，金针菇柄原料(g)与水(m1)的比例选择在1∶10-1∶2之间，调溶液pH到1-7，100℃-121℃灭菌10-50分钟，后冷却到35℃-55℃，制成金针菇柄水溶液。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(a)中所述的金针菇柄水溶液-乙醇的混合液中，金针菇柄水溶液∶乙醇的体积比值范围为99∶1至85∶15之间。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：对于1克金针菇柄干重，所述的果胶酶、蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶4种酶的总用量10-1000IU；果胶酶、蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶的用量之间的重量比例为：0.5-5∶0.2-1∶0.5-5∶0.5-2。5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于：在步骤(a)中，用果胶酶进行处理的条件为：在温度25℃-65℃，pH1.0-pH9.0，10转-150转/分钟搅拌，35℃-55℃的条件下酶解1-24小时；在步骤(b)至(d)中，用酶进行处理的条件为：将前一步骤获得的酶解液温度调至100℃保温8-15分钟，然后降温至温度25℃-65℃，加入相应酶，再调整pH值1.0-pH9.0，在10转-150转/分钟搅拌，35℃-55℃的条件下酶解1-24小时。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(a)-(d)中，对于处理后获得的酶解液还要进行酶灭活处理，所述的酶灭活处理是在70-100℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：李平作，程湛，胡观志，徐泽敏，曾庆友，朱称俊，韩毅成，
申请(专利权)人：安徽省旌芝源畜业有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34