乳腺丝抑蛋白的新用途制造技术

本发明专利技术公开了乳腺丝抑蛋白的新用途，即乳腺丝抑蛋白（maspin）能结合到雄激素受体（AR）基因转录启动子区域，负向调节AR基因转录，抑制AR的表达，从而降低AR的水平和活性。因为AR的高表达及其介导的细胞信号通路的异常激活是前列腺肿瘤的发生、发展以及治疗预后不佳的主要原因。因此，可利用或基于此发明专利技术（利用maspin抑制AR表达的生物学功能），将maspin作为抗AR药物的协同分子，设计出抗肿瘤路径和开发基于该发明专利技术的预防性和治疗性药物；设计基于提高maspin表达的临床应用路径，协同和促进AR拮抗剂类药物的临床治疗药效。

New use of mammary gland silk protein

The invention discloses a new use of mammary gland protein inhibiting protein, that is, Maspin can bind to the transcription promoter region of the androgen receptor (AR) gene, regulate the transcription of AR gene, inhibit the expression of AR, and thus reduce the level and activity of AR. Because the high expression of AR and its abnormal activation of cell signaling pathways are the main reasons for the occurrence, development and poor prognosis of prostate cancer. Therefore, using or based on this invention (using Maspin to inhibit the biological function of AR expression), Maspin can be used as a synergistic molecule for anti AR drugs, to design antitumor pathways and to develop preventive and therapeutic drugs based on the invention; to design a clinical application path based on the enhancement of maspin expression and to cooperate and promote the class of AR antagonists. The efficacy of the drug in the clinical treatment.

【技术实现步骤摘要】
乳腺丝抑蛋白的新用途
本专利技术属于分子生物学检测
，具体涉及乳腺丝抑蛋白的新用途。
技术介绍
乳腺丝抑蛋白(mammaryserineproteaseinhibitor,Maspin)人类MASPIN由SERPINB5基因编码。该基因位于18q21.3，表达产物具有375个氨基酸。MASPIN与serpin超家族的Ser蛋白激酶抑制物有重要同源性，与卵清蛋白也有31％的同源性。MASPIN在前列腺、乳腺等上皮细胞中广泛表达，是上皮细胞的看家基因和标志物分子。但它在恶性肿瘤细胞及浸润性肿瘤中表达降低，转移灶中不表达。MASPIN广泛分布在细胞内、外基质中，与不同的分子结合而发挥相对应的生物学活性[8]。我们的研究显示：MASPIN是目前唯一被发现的内在的组蛋白去乙酰化酶HDAC1的抑制因子，并参与肿瘤的抑制和诱导肿瘤细胞的再分化；同时它可结合热休克蛋白Hsp90和谷胱甘肽S转移酶，发挥各种不同的生物学功能。其在细胞内的胞质和细胞核中的表达具有不同的临床意义。作为肿瘤抑制因子，MASPIN的抗肿瘤活性已被广泛证实。根据肿瘤种类的不同或同一肿瘤的不同发展阶段，其表现也不尽相同。主要表现有抑制肿瘤细胞生长、浸润和转移，增强药物诱导的肿瘤细胞凋亡，增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性；帮助体细胞抵抗缺氧诱导的应急反应所引起的损伤以维护机体自稳和平衡；等。一般认为肿瘤细胞表达胞核MASPIN较之在细胞质中表达具有较好的预后判断作用。但maspin抗肿瘤活性的具体机制不明确。雄激素受体(AndrogenReceptor,AR)：表达及活性与前列腺肿瘤的发展雄激素受体是由位于Xq11.2-12的AR基因编码，表达约918氨基酸(910AA—920AA)大核受体蛋白，分子量约为98.5kd，属于一种配体(如体内主要为睾酮testosterone,双氢睾酮dihydrotestosterone，DHT)结合诱导型转录因子。AR经结合配体后从细胞质转移到胞核发挥转录因子作用，调控目标基因(如PSA，NKx3.1)表达。AR表达于前列腺上皮和基质细胞，其信号通路广泛参与调节正常和肿瘤细胞的生长和分化。研究发现，AR基因的异常表达与激活仍然是前列腺肿瘤发生与发展的主要原因。因此内分泌疗法包括去势治疗(如Androgendeprivationtherapy，ADT)和抑制A/AR信号通路活性(雄激素拮抗剂，雄激素受体拮抗剂)仍然是治疗肿瘤复发和转移的系统性方法。研究显示，正常的AR的表达与转录活性受表观遗传调节，特别是组蛋白乙酰化修饰作用的调节。同样的乙酰化组蛋白在抑制依赖AR的肿瘤生长和预防肿瘤进一步恶化中起重要作用。值得关注的是：化疗药物docetaxel(多西他赛)处理的22RV1CaP细胞也表现出了抑制AR的活性。专利申请号为200410068196，雄激素依赖/非依赖性前列腺癌中高表达的人蛋白在前列腺肿瘤诊断、治疗预后中的新用途，该专利技术公开了十六种在雄激素非依赖性前列腺肿瘤组织中高表达的人蛋白及其编码序列在雄激素依赖性前列腺肿瘤组织预后、监测,诊断、治疗雄激素非依赖性前列腺肿瘤组织方面的新用途。该专利技术还公开了七种在雄激素依赖性前列腺肿瘤组织中高表达的人蛋白及其编码序列在雄激素依赖性前列腺肿瘤组织预后、监测,诊断、治疗雄激素非依赖性前列腺肿瘤组织方面的新用途，但是该专利技术并没有公开Maspin应用于调控AR表达，也没有将Maspin蛋白应用于前列腺肿瘤及相关疾病的预防或者治疗中。贺美兰、张建业等在山东大学学报(医学版)发表的“雄激素及其受体对maspin启动子的抑制作用”的研究，通过分别构建表达maspin启动子和表达人AR(hAR)的载体，然后共同转染PC-3M细胞，利用荧光素酶报告基因方法发现hAR抑制maspin表达，得出结论为maspin基因启动子区域可能含有与雄激素受体结合的负性调控元件。但该报道没有发现Maspin结合到AR启动子区，也没有发现Maspin抑制AR的转录和表达。白庆、刘晟等人在中国现代医生发表了Maspin基因与肿瘤关系的研究，通过对Maspin基因在肿瘤方面的研究现状及其与相关基因关系的综述,为恶性肿瘤的诊断和治疗提供一种新的有效的途径。Maspin基因对肿瘤细胞的抑制作用表现在:(1)诱导细胞凋亡；(2)抑制肿瘤新生血管的生成；(3)抑制肿瘤细胞的侵袭与转移。但是该专利技术并没有确定maspin蛋白是否能结合到AR启动子区域(核酸序列)，从而调节AR的转录和表达。
技术实现思路
针对上述现有技术存在的问题，本专利技术提供乳腺丝抑蛋白(maspin)的新用途。Maspin和AR表达在正常的上皮组织中，在维持上皮组织和细胞生理平衡中起重要的作用。一旦这种平衡被破坏，就可能引起组织、细胞的恶性转化并最终成为肿瘤。研究发现maspin在前列腺肿瘤中通常不表达或者表达降低，而AR的表达及活性普遍升高；反之，maspin在PC3肿瘤细胞中高表达，但该细胞不表达AR分子；同时恶性程度较低的LNCaP细胞既表达maspin，也表达AR，且二者表达水平与生物学活性均处于可控水平。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：本专利技术提供乳腺丝抑蛋白(maspin)在调控雄激素受体表达中的应用(用于调控AR表达)，调控用于非治疗目的。优选的是，调控方法包括肿瘤分子乳腺丝抑蛋白(maspin)结合到雄激素受体(AR)基因转录启动子区域，负向调节AR基因转录，抑制AR的表达。上述任一方案优选的是，调控方法包括体外转染并表达maspin基因后抑制AR的表达。上述任一方案优选的是，调控方法包括利用siRNA抑制maspin表达后能促进AR的表达。上述任一方案优选的是，调控方法包括采用药物升高或诱导maspin表达后，下调或抑制AR表达。药物包括抑制剂类药、表观遗传调控药物、HDAC抑制剂类药物、抑制DNA甲基化药物。上述任一方案优选的是，调控方法包括利用抑制剂类药物升高maspin表达后下调AR表达。优选的是，抑制剂类药物为蛋白水解酶抑制剂类药物。上述任一方案优选的是，调控方法包括采用表观遗传调控药物升高maspin表达后，抑制AR的表达。优选的是，表观遗传调控药物包括Entinostat。上述任一方案优选的是，调控方法包括利用HDAC抑制剂类药物诱导maspin表达后，抑制AR的表达。优选的是，HDAC抑制剂类药物包括Entinostat。上述任一方案优选的是，调控方法包括利用抑制DNA甲基化药物诱导maspin表达后下调AR表达。本专利技术还提供乳腺丝抑蛋白maspin在制备治疗或预防肿瘤疾病的药物中的应用。优选的是，所述肿瘤是由于AR的转录和/或表达过量引起的。上述任一方案优选的是，所述肿瘤包括前列腺肿瘤、乳腺癌、子宫内膜癌、鼻咽癌等肿瘤。本专利技术还提供编码乳腺丝抑蛋白的基因。本专利技术还提供含有编码乳腺丝抑蛋白的基因的工程菌或转基因细胞系。上述任一方案优选的是，所述AR的转录和/或表达能够通过maspin蛋白结合到AR启动子区域调节。本专利技术还提供乳腺丝抑蛋白maspin在抑制雄激素受体AR基因转录，负向调节AR的表达的药物中的应用。本专利技术还提供乳腺丝抑蛋白maspin在制备协同和/或促进雄激素受体AR拮抗剂类药物中的应用。本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.乳腺丝抑蛋白在调控雄激素受体表达中的应用，调控用于非治疗目的。

【技术特征摘要】
1.乳腺丝抑蛋白在调控雄激素受体表达中的应用，调控用于非治疗目的。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，调控方法包括将乳腺丝抑蛋白结合到雄激素受体基因转录启动子区域，负向调节AR基因转录，抑制AR的表达。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，调控方法包括利用体外转染并表达maspin基因后抑制AR的表达。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，调控方法包括利用siRNA抑制maspin表达后促进AR的表达。5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓华，连雪琪，汤思洁，江佳佳，程慧颖，郭佳倩，
申请(专利权)人：张家港澳洋医院有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32