一种基于试剂盒的针对人组织中高分子量基因组DNA的提取方法技术
【技术实现步骤摘要】
一种基于试剂盒的针对人组织中高分子量基因组DNA的提取方法
本专利技术涉及高通量DNA测序
，特别涉及一种基于试剂盒的针对人组织中高分子量基因组DNA的提取方法。
技术介绍
随着高通量测序技术的发展，Long-read(长读长)测序技术愈发受到科学界的青睐，许多Long-read测序平台如PacBio公司的sequel系统、Oxfordnanopore公司的MinION和GridION系统均在最前沿的基因测序领域如基因组denovo、变异检测、转录组、表观遗传、临床应用中均扮演了重要的角色。而这些Long-read测序平台因为测序读长长的原因，也对基因组DNA提取提出了更高的要求。研究人员不仅要保证基因组DNA的得率和纯度，还需要获得更完整的高分子量的基因组DNA以满足下游Long-read测序技术的需求，从而在基础科研及医学应用上获得更可靠的技术支持。目前针对人组织样本基因组DNA提取主要分为试剂盒提取和传统的酚氯仿抽提。前者虽然提取便捷，但很难获得高分子量的DNA，所提取出来的DNA分子通常在20kb左右，在Long-read测序应用中差强人意。而传统的...
【技术保护点】
1.一种基于试剂盒的针对人组织中高分子量基因组DNA的提取方法，具体提取方法如下：步骤一：组织样本：取适量的人或动物组织样本，并且用剪刀剪碎，转移至一个干净的1.5ml离心管，加入30ul Proteinase K(蛋白酶K)和300ul Buffer ATL(缓冲液ATL)，剧烈震荡10秒使之混匀，再执行步骤二；步骤二：消化：在步骤一执行之后，温浴30‑60分钟，温浴后，如果还有未消化完全的样本，用吸头将其挑出丢弃，并且加入300ul AL，迅速震荡混匀，再执行步骤三；步骤三：细胞裂解：在步骤二执行之后，将制得的样本放到掌式离心机上短离1秒，温浴10分钟，然后加入600u...
【技术特征摘要】
1.一种基于试剂盒的针对人组织中高分子量基因组DNA的提取方法，具体提取方法如下：步骤一：组织样本：取适量的人或动物组织样本，并且用剪刀剪碎，转移至一个干净的1.5ml离心管，加入30ulProteinaseK(蛋白酶K)和300ulBufferATL(缓冲液ATL)，剧烈震荡10秒使之混匀，再执行步骤二；步骤二：消化：在步骤一执行之后，温浴30-60分钟，温浴后，如果还有未消化完全的样本，用吸头将其挑出丢弃，并且加入300ulAL，迅速震荡混匀，再执行步骤三；步骤三：细胞裂解：在步骤二执行之后，将制得的样本放到掌式离心机上短离1秒，温浴10分钟，然后加入600ulBufferBD(缓冲液BD)和30ulMagBindParticle(粒子)，轻轻缓慢地180°颠倒混匀20-30次，室温静置3分钟，期间轻轻地颠倒混匀数次，然后再将离心管短离0.5秒，再执行步骤四；步骤四：磁珠结合：在步骤三执行之后，将离心管放到磁力架上，吸附5分钟，然后将废液完全吸净弃掉，再执行步骤五；步骤五：高盐溶液洗涤：在步骤四执行之后，加入800ul的BW1Buffer(缓冲器BW1)，盖上盖子，轻轻的180°颠倒磁力架使BW1Buffer(缓冲器BW1)完全清洗离心管的内部，180°颠倒清洗1分钟后再静置1分钟，然后放到磁力架上吸附3分钟后吸掉废液，在吸掉废液的时候保持离心管在磁力架上，并尽量洗干净离心管内部的所有废液，包括管底、管盖及管壁上的废液，再执行步骤六；步骤六：乙醇洗涤：在步骤五执行之后，加入800ul的75％乙醇，盖上盖子，轻轻地180°颠倒磁力架使75％乙醇完全清洗离心管的内部，颠倒清洗1分钟后，然后放到磁力架上吸附3分钟后吸掉废液，在吸掉废液的时候保持离心管在磁力架上，并尽量吸干净离心管内部的所有废液，包括管底、管盖及管壁上的废液，再执行步骤七；步骤七：DNA回溶：在步骤六执行之后，将离心管从磁力架上取下，盖上盖子，短离3次，每次0.5秒，再将离心管放到磁力架上开盖吸附2分钟，吸掉管底的残留液体，然后开盖晾干5-10分钟，再将离心管从磁力架上取下，每管加入32ul的EB，用移液器轻轻地将吹打磁珠，使之从管壁上剥落至液体里，然后盖上管盖，轻弹混匀，放到6...
【专利技术属性】
技术研发人员：张哲，傅延，张慧，徐子静，
申请(专利权)人：安徽微分基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34
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