长链非编码RNA LINC00842作为生物标志物在制备肺腺癌预后检测制剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了长链非编码RNA LINC00842作为生物标志物在制备肺腺癌预后检测制剂中的应用。可以检测长链非编码RNA LINC00842在肺腺癌患者中的表达水平，为肺腺癌患者预后预测提供了强有力的分子生物学基础，具有深远的临床意义和推广性。

【技术实现步骤摘要】
长链非编码RNALINC00842作为生物标志物在制备肺腺癌预后检测制剂中的应用
本专利技术属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及长链非编码RNALINC00842作为生物标志物在制备肺腺癌预后检测试剂中的应用。
技术介绍
近年来，肺癌的发病率越来越高，根据世界癌症研究基金会的统计，世界范围内每年新诊断出的肺癌病例占癌症总数的12.5％。全球因肺癌每年夺去100万人生命，在中国肺癌已经连续几年居各种癌症死亡率首位。肺癌根据组织学类型不同主要分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌，其中肺腺癌是非小细胞肺癌中最常见的类型。尽管随着诊疗技术的进步，特别是靶向药物的应用，改善了肺腺癌的生存期，但其5年生存率仍然很低。肺腺癌多起源于小支气管，为周围型肺癌，故早期临床症状较轻，但肺腺癌细胞增殖转移能力强，部分早期即发生血行转移，故多数患者就诊时已处于中晚期，是造成其生存率低预后差的主要原因。因此，提高肺腺癌的诊断和预后判定是降低其死亡率的主要手段。目前，对肺腺癌患者的预后判定没有参考标准，也没有特异性的指标，远远不能适应对肺腺癌患者进行预后判定的需求。因此，对肺腺癌患者预后进行判定，以便选择最佳治疗方案，显著提高患者生存率，成为胸外科领域亟待解决的重要课题。长链非编码RNA是一类长度超过200个核苷酸残基，由RNA聚合酶Ⅱ转录，不能编码蛋白质的RNA分子。最初的研究认为它是转录组的"噪音"，但近十年来的生命科学研究发现，它们参与了多项生物调控过程。研究表明长链非编码RNA能够广泛地参与基因组调节，与包括肿瘤在内的许多疾病有密切联系。近年来，长链非编码RNA作为一类重要的调控分子及其在临床诊断、化疗敏感性和预后评价等方面的应用价值，已经逐渐得到研究者的重视。有研究表明HOTAIR在原发乳腺肿瘤和转移瘤中的表达都会增加，原发肿瘤中HOTAIR的表达水平可以用来有效预测癌转移和死亡。长链非编码RNAPCA3在前列腺癌中高度过表达，这种长链非编码RNA是在尿液中发现的，相当便于临床检测。长链非编码RNALALR1通过激活Wnt/β-catenin信号，加速了细胞周期进程，促进了肝细胞增殖。采用药物靶干预长链非编码RNALALR1诱导肝脏再生，有可能有益于肝衰竭和肝移植治疗。由此可见，长链非编码RNA作为诊断、预后和治疗的分子标志物具有巨大潜力。目前，对肺腺癌患者的预后判定没有参考标准，也没有特异性的指标，远远不能适应对肺腺癌患者进行预后判定的需求。因此，对肺腺癌患者预后进行判定，以便选择最佳治疗方案，显著提高患者生存率，成为胸外科领域亟待解决的重要课题。
技术实现思路
本专利技术旨在克服现有技术的不足，提供长链非编码RNALINC00842作为生物标志物在制备肺腺癌预后检测制剂中的应用。长链非编码RNALINC00842定位于染色体10q11.22，GeneBank登录号：NR-033957.2(长链非编码RNALINC00842序列见SEQNO:1)。在前期研究工作中，专利技术人在肺腺癌组织中提取RNA，逆转录后进行实时荧光定量PCR分析长链非编码RNALINC00842的表达，发现：长链非编码RNALINC00842在肺腺癌组织中表达下调，与正常人肺组织中的表达差异显著(P<0.0001)(图1)。且长链非编码RNALINC00842表达水平不同的肺腺癌患者中预后存在明显差异，经Kaplan-Meier生存分析发现长链非编码RNALINC00842低表达的肺腺癌患者生存率明显低于高表达的患者(P＝0.0467)(图2)，比率风险模型预后分析发现长链非编码RNALINC00842的风险率>1(HR＝2.7160)，表明长链非编码RNALINC00842低表达的患者预后较高表达的患者预后差，长链非编码RNALINC00842的低表达是肺腺癌患者预后风险预测的独立危险因素。因此，长链非编码RNALINC00842能作为肺腺癌预后的判断标准，作为生物标志物用于制备肺腺癌患者的预后制剂，更进一步能够提供一种性价比高，易于推广应用的肺腺癌预后预测试剂盒。所述肺腺癌预后检测试剂盒中包括长链非编码RNALINC00842实时荧光定量PCR特异性引物：正向引物：5′-CTGCCCAGTTAAGGCACAACTCTC-3′(SEQIDNO.2)；反向引物：5′-AGCGCTGCGGAGAGGCAGTCT-3′(SEQIDNO.3)。优选地，所述试剂盒中还包括GAPDH内参实时荧光定量PCR特异性引物：正向引物：5′-GTGGATATTGTTGCCATCAATGAC-3′(SEQIDNO.4)；反向引物：5′-GACGGTGCCATGGAATTTGCCATG-3′(SEQIDNO.5)。将长链非编码RNALINC00842用于肺腺癌患者预后的检测方法如下：(1)收集待测个体术后切除的肺腺癌组织，抽提总RNA；(2)以总RNA为模板将长链非编码RNALINC00842逆转录为cDNA；(3)用长链非编码RNALINC00842特异性引物进行实时荧光定量PCR扩增，获得相对表达量2ΔΔCT，当2ΔΔCT<0.10时提示长链非编码RNALINC00842为低表达。综上，利用本专利技术的检测制剂可以检测长链非编码RNALINC00842在肺腺癌患者中的表达水平，为肺腺癌患者预后预测提供了强有力的分子生物学基础，具有深远的临床意义和推广性。附图说明图1为实时荧光定量PCR分析长链非编码RNALINC00842在肺腺癌组织与正常肺组织中的表达差异；图2为长链非编码RNALINC00842与35例肺腺癌患者预后的关系。具体实施方式实施例1制备长链非编码RNALINC00842用于肺腺癌预后检测试剂盒(50次反应)1.RNA稳定溶液50ml2.异丙醇100ml3.三氯甲烷100ml4.Trizol50ml5.无酶水10ml6.1μM随机逆转录引物50ul7.5×逆转录缓冲液200ml8.10mM三磷酸碱基脱氧核苷酸100ul9.40U/μlRNA酶抑制剂500ul10.200U/μlMMLV逆转录酶50ul11.PremixExTaq50ul12.10μM长链非编码RNALINC00842实时荧光定量PCR特异性引物：正向引物5′-CTGCCCAGTTAAGGCACAACTCTC-3′(SEQIDNO.2)，反向引物5′-AGCGCTGCGGAGAGGCAGTCT-3′(SEQIDNO.3)，13.10μM内参GAPDH实时荧光定量PCR特异性引物：正向引物为5′-GTGGATATTGTTGCCATCAATGAC-3′(SEQIDNO.4)，反向引物为5′-GACGGTGCCATGGAATTTGCCATG-3′(SEQIDNO.5)。实施例2肺腺癌组织中长链非编码RNALINC00842检测1、肺腺癌组织的保存：收集待测肺腺癌组织存放于盛有RNA稳定溶液的冻存管中，放至-80℃冰箱备用。2、组织中RNA的抽提：取适量标本于经180℃烘烤6-8h后的研钵中加入液氮研磨标本，研磨至粉末状后于研钵中加入1mlTrizol研钵标本，研磨成液体状后用移至离心管管，加氯仿200μl/ml于离心管中，用手震荡15-30s，冰上放置5min，4℃12本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.长链非编码RNA LINC00842作为生物标志物在制备肺腺癌预后检测制剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.长链非编码RNALINC00842作为生物标志物在制备肺腺癌预后检测制剂中的应用。2.长链非编码RNALINC00842作为生物标志物在制备肺腺癌预后检测试剂盒中的应用。3.一种肺腺癌预后检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括长链非编码RNALINC00842实时荧光定量PCR特异性引物：正向引物：5′-CTGCCCAGTTAAGG...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶永光，毛超，王敏，刘双，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，毛超，
类型：发明
国别省市：湖南,43