3-甲基腺嘌呤在制备治疗视网膜下纤维化的药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及3‑甲基腺嘌呤在制备治疗视网膜下纤维化(SRF)的药物中的应用。首先建立视网膜下纤维化动物模型，验证该模型的成功建立；其次通过全身注射巨噬细胞清除剂氯磷酸二钠脂质体证明巨噬细胞在SRF中的关键作用；然后结合前期发现眼球组织自噬活性升高的结果，将自噬激活定位到巨噬细胞，再应用3‑MA腹腔注射，观察分析3‑MA对巨噬细胞自噬活性、数量、极化分型的影响；最后探索3‑MA对巨噬细胞及纤维化发挥作用的相关信号通路。实验结果显示3‑MA腹腔注射可明显抑制视网膜下纤维化，其通过抑制巨噬细胞自噬活性，减少巨噬细胞数量，调节巨噬细胞亚型，抑制巨噬细胞促纤维化信号通路的激活发挥抗纤维化作用。 1

Application of 3- methyladenine in the preparation of drugs for subretinal fibrosis

The invention relates to the application of 3 - methyladenine in the preparation of drugs for treating subretinal fibrosis (SRF). First, an animal model of subretinal fibrosis was established to verify the successful establishment of the model. Secondly, the key role of macrophage in SRF was proved by the whole body injection of macrophage scavenger two sodium chlorphosphoric acid sodium liposome, and then the autophagy activation was located to the macrophage by combining the early discovery of the increase of the autophagic activity of the eyeball tissue. The effects of 3 MA on the autophagic activity, quantity and polarization of macrophages were observed and analyzed by intraperitoneal injection of 3 MA. Finally, the signal pathway of the role of 3 macrophages and fibrosis was explored. The experimental results showed that intraperitoneal injection of 3 MA could significantly inhibit subretinal fibrosis, which could inhibit fibrosis by inhibiting macrophage autophagy, reducing the number of macrophages, regulating macrophage subtypes, and inhibiting the activation of macrophage fibrotic signaling pathway. One

【技术实现步骤摘要】
3-甲基腺嘌呤在制备治疗视网膜下纤维化的药物中的应用
本专利技术涉及生物医药
，具体地说，是3-甲基腺嘌呤在制备治疗视网膜下纤维化的药物中的应用。
技术介绍
年龄相关性黄斑变性(age-relatedmaculardegeneration，AMD)，又称老年黄斑变性，是50岁以上成年人致盲的主要原因之一。近年来，AMD发病率呈逐年增高之势。在发展中国家，AMD的发病率约为7％，在发达国家，预计到2020年AMD患者将增加50％，接近23％患者视力完全丧失。临床上将AMD分为干性(dryAMD)和湿性(wetAMD,wAMD)，前者占AMD患者的80％-90％，后者占10％-15％。虽然湿性AMD占患者总比例较少，但约90％的AMD相关的视力丧失与湿性AMD有关。wAMD患者的视力预后较差，随着脉络膜新生血管(choroidalneovascularization,CNV)和随后的视网膜下纤维化(subretinalfibrosis,SRF)的形成，病情发展迅速。虽然常用的抗血管内皮生长因子(anti-vascularendothelialgrowthfactor，anti-VEGF)药物治疗可以提高wAMD患者的视力，但研究表明在2年内大约有一半的抗VEGF治疗的眼睛会形成视网膜纤维瘢痕。SRF的发生导致视网膜光感受器细胞、视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium，RPE)及脉络膜血管的不可逆损伤，从而导致视力的永久性丧失，因此迫切需要加强对SRF的研究，研发一种能有效预防和干预SRF的药物以保障抗VEGF疗效，提高wAMD患者视力预后。目前，临床上并没有针对SRF进行有效预防和干预的手段。基础研究表明SRF可能是由于过度的损伤愈合反应导致的，而持续的损伤或炎症状态可能是导致过度损伤愈合反应的前提。有研究发现，在AMD患者尸眼的视网膜下纤维膜中可见大量巨噬细胞浸润，且在动物模型中也发现了巨噬细胞浸润在CNV区域，说明巨噬细胞参与的免疫炎症反应可能与视网膜下纤维化的形成有关。近年来肝脏、肺脏组织的纤维化研究也指向纤维化的发病与炎症反应的参与、上皮间质转化、氧化应激和相关信号通路活化等有关。因此，从SRF的发病机制出发，找到抗纤维化发生的关键靶点并进行有效干预是亟待解决的关键问题。自噬是真核生物进化中高度保守的对细胞内物质进行降解再利用的过程，在多种生理和病理过程中发挥重要作用，近年来大量研究显示自噬参与纤维化的发生和发展。本专利技术在动物体内进行腹腔注射常用的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine，3-MA)，发现3-MA明显的抑制了视网膜下纤维化。我们通过体内和体外实验进一步研究了3-MA抑制SRF的机制。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是针对现有技术中的不足，提供3-甲基腺嘌呤在制备治疗视网膜下纤维的药物中的应用。本专利技术的第二个目的是针对现有技术中的不足，提供3-甲基腺嘌呤在制备治疗老年黄斑变性的药物中的应用。本专利技术的第三个目的是针对现有技术中的不足，提供3-甲基腺嘌呤在制备试剂中的应用。本专利技术的第四个目的是针对现有技术中的不足，提供一种抗视网膜下纤维化的药物组合物。为实现上述第一个目的，本专利技术采取的技术方案是：3-甲基腺嘌呤在制备药物中的应用，所述的药物用于治疗视网膜下纤维化。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述视网膜下纤维化是指老年黄斑变性相关的视网膜下纤维化。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述药物抑制视网膜下纤维化的形成。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述药物通过抑制巨噬细胞自噬活性，减少巨噬细胞数量，调节巨噬细胞亚型，抑制巨噬细胞促纤维化信号通路的激活发挥抗纤维化作用。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述药物的给药方式为注射给药。为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是：3-甲基腺嘌呤在制备治疗老年黄斑变性的药物中的应用，所述药物抑制视网膜下纤维化的形成。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述老年黄斑变性是指湿性AMD。为实现上述第三个目的，本专利技术采取的技术方案是：3-甲基腺嘌呤在制备试剂中的应用，所述试剂用于调节巨噬细胞表型。为实现上述第四个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种抗视网膜下纤维化的药物组合物，所述药物组合物包含3-甲基腺嘌呤、以及药学上可接受的载体或辅料，所述视网膜下纤维化是指老年黄斑变性相关的视网膜下纤维化，所述药物组合物抑制视网膜下纤维化的形成。本专利技术首先建立视网膜下纤维化动物模型，验证该模型的成功建立(图1)，其次通过全身注射巨噬细胞清除剂氯磷酸二钠脂质体证明巨噬细胞在SRF中的关键作用(图2)，然后结合前期发现眼球组织自噬活性升高的结果，首先将自噬激活定位到巨噬细胞(图3)，再应用3-MA腹腔注射，观察分析3-MA对巨噬细胞自噬活性(图3)、数量(图4)、极化分型(图5)的影响，最后探索3-MA对巨噬细胞及纤维化发挥作用的相关信号通路(图6)。本专利技术优点在于：1、本专利技术首次发现3-MA腹腔注射可明显抑制视网膜下纤维化。2、3-MA通过抑制巨噬细胞自噬活性，减少巨噬细胞数量，调节巨噬细胞亚型，抑制巨噬细胞促纤维化信号通路的激活发挥抗纤维化作用。3、发现全身应用3-MA无明显毒副作用。附图说明附图1为激光损伤模型CNV及SRF的时间变化趋势结果，激光损伤后35天脉络膜新生血管消退而视网膜下纤维化生成显著。附图2为巨噬细胞清除实验结果，巨噬细胞清除减少了SRF的形成。附图3为3-MA腹腔注射对巨噬细胞活性的影响，显示3-MA可明显抑制巨噬细胞自噬活性。附图4为3-MA腹腔注射对巨噬细胞数量的影响，显示3-MA明显减少了SRF及周围巨噬细胞数量却并未影响脾脏巨噬细胞数量。附图5为3-MA腹腔注射对巨噬细胞极化分型的影响，显示SRF周围以M2型巨噬细胞募集为主，3-MA调控巨噬细胞极化分型。附图6为3-MA对巨噬细胞及纤维化发挥作用的相关信号通路，显示3-MA通过抑制巨噬细胞STAT3/TGF-β2信号通路抑制视网膜下纤维化。具体实施方式下面结合具体实施方式，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术记载的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。药物组合物依据本专利技术的方法，3-甲基腺嘌呤可以制备抗视网膜下纤维化形成的药物组合物，所述的药物组合物可由药物活性成分3-甲基腺嘌呤和药学上可接受的载体组成。所述的药物组合物可采用医学领域常规的方法，将3-甲基腺嘌呤作为活性成分，与药学上可接受的辅料制成各种剂型。当用于口服时，可将其制备成常规的固体制剂如片剂、粉剂或胶囊剂等；用于注射时，可将其制备成注射剂。在各种制剂中，活性成分的重量含量为0.01％～99.9％。所述的药物组合物可以用于治疗视网膜下纤维化的疾病。例如可以按剂型通过口服、腹腔注射、皮下注射、静脉注射、肌肉注射、粘膜用药等途径应用于需要治疗的个体，所述个体可以是人或动物。本专利技术中，所述“药学上可接受”这里指一种物质，如载体或稀释液，不会使3-甲基腺嘌呤的生物活性或性质消失，且相对无毒。例如加入某物质，不会引起不想要的生物影响或以有害的方式与3-甲基腺嘌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.3‑甲基腺嘌呤在制备药物中的应用，其特征在于，所述的药物用于治疗视网膜下纤

【技术特征摘要】
1.3-甲基腺嘌呤在制备药物中的应用，其特征在于，所述的药物用于治疗视网膜下纤维化。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述视网膜下纤维化是指老年黄斑变性相关的视网膜下纤维化。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物抑制视网膜下纤维化的形成。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物通过抑制巨噬细胞自噬活性，减少巨噬细胞数量，调节巨噬细胞亚型，抑制巨噬细胞促纤维化信号通路的激活发挥抗纤维化作用。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的给药方式为...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙晓东，薄其玉，沈梦溪，
申请(专利权)人：上海市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：上海,31