用于快速检测沙门氏菌血清变种D1的组合物和方法技术

本发明专利技术特征在于用于检测沙门氏菌(例如，在食品，环境样品，生物样品或其他材料中)的快速和准确的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于快速检测沙门氏菌血清变种D1的组合物和方法相关申请的交叉引用本申请要求2015年7月20日提交的美国专利临时申请62/194,640号的优先权。本申请的全部内容通过引用纳入本文。
技术介绍
沙门氏菌是全世界食物携带疾病最常见的病原体之一。它引起人类和动物的大量感染。事实上，每年沙门氏菌导致全世界约9380万人感染和155,000人死亡。沙门氏菌感染与食用受动物或人粪便污染的食物，例如肉、蛋和新鲜农产品(produce)等有关。沙门氏菌病的主要原因是禽类和蛋。认识到防止沙门氏菌传播的重要性，2014年美国FDA敦促美国科学家开发改进的沙门氏菌检测方法。目前用于检测食品中沙门氏菌的方法困难，昂贵和耗时。迫切需要快速准确的检测方法，以防止受沙门氏菌污染的食品进入动物或人类食物链。
技术实现思路
如下所述，本专利技术特征在于用于检测沙门氏菌(例如，在食品，环境样品，生物样品或其他材料中)的快速和准确的方法。在一个方面，本专利技术的特征在于检测样品中的沙门氏菌的方法。该方法涉及使样品在存在切口酶，dNTP，可检测探针和聚合酶的情况下与正向和反向引物接触，所述正向和反向引物在允许核酸分子等温扩增的条件本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测样品中沙门氏菌血清变种D1的方法，所述方法包括使样品在存在切口酶，dNTP，可检测探针和聚合酶的情况下与正向和反向引物接触，所述正向和反向引物在允许核酸分子等温扩增的条件下与沙门氏菌核酸分子特异性结合，并且检测样品中源自沙门氏菌的扩增子，其中所述方法检测以下靶序列：5’–TATTGCAGGTAAAGGGGCTTCGGTATCTGGTGGTGTAGCCACTGT‑3’。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.20 US 62/194,6401.一种检测样品中沙门氏菌血清变种D1的方法，所述方法包括使样品在存在切口酶，dNTP，可检测探针和聚合酶的情况下与正向和反向引物接触，所述正向和反向引物在允许核酸分子等温扩增的条件下与沙门氏菌核酸分子特异性结合，并且检测样品中源自沙门氏菌的扩增子，其中所述方法检测以下靶序列：5’–TATTGCAGGTAAAGGGGCTTCGGTATCTGGTGGTGTAGCCACTGT-3’。2.如权利要求1所述的方法，其中所述样品包括食品，环境样品，生物样品或其他材料。3.如权利要求2所述的方法，其中所述食品旨在用于动物或人类消耗。4.如权利要求3所述的方法，其中所述食物产品是意图由陪伴动物消耗的宠物食物。5.如权利要求3所述的方法，其中所述食品是或来源于农产品、家禽、鱼或牛肉。6.如权利要求2所述的方法，其中所述环境样品是水、土壤、污水或表面拭子样品。7.如权利要求2所述的方法，其中所述生物样品是粪便或血液样品。8.如权利要求2所述的方法，其中，所述样品是培养基。9.如权利要求6所述的方法，其中所述表面拭子样品是靴子拭样，手柄的拭样，设备或机器的拭样，禽舍内表面的拭样，或蛋传送带表面、降低自动扶梯、风扇或走道的拭样。10.如权利要求1所述的方法，其中所述样品是蛋或蛋制品。11.如权利要求10所述的方法，其中所述蛋制品是蛋清和/或蛋黄。12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述沙门氏菌是血清变种D1。13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述沙门氏菌选自：肠炎沙门氏菌(Senteriditis)，伤寒沙门氏菌(Styphi)，白痢沙门氏菌(Spullorum)，都柏林沙门氏菌(Sdublin)，加氏沙门氏菌(Sgallinarum)和仙台沙门氏菌(Ssendai)。14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述正向和反向引物选自正向引物：5’-GACTCGATATCGAGTCATCTATTGCAGGTAAmAmGmGmGmG-3’5’-GACTCGATATCGAGTCATCTATTGCAGGTAmAmAmGmGmG-3’5’-GACTCGATATCGAGTCTATCTATTGCAGGTAmAmAmGmGmG-3’5’-GACTCGATATCGAGTCGTATCTATTGCAGGTmAmAmGmGmG-3’5’-GACTCGATATCGAGTCAGTATCTATTGCAGGTmAmAmAmGmG-3’5’-GACTCGATATCGAGTCGTATCTATTGCAGGTAmAmAmGmGmG-3’和反向引物：5’-GACTCGATATCGAGTCGGACAGTGGCTACAmCmCmAmCmC-3’5’-GACTCGATATCGAGTCGGGACAGTGGCTACAmCmCmAmCmC-3’5’-GACTCGATATCGAGTCCGGGACAGTGGCTACmAmCmCmAmC-3’5’-GACTCGATATCGAGTCCGGGACAGTGGCTAmCmAmCmCmA-3’5’-GACTCGATATCGAGTCCGGGACAGTGGCTmAmCmAmCmC-3’5’-GACTCGATATCGAGTCACGGGACAGTGGCmTmAmCmAmC-3’,其中“m”表示修饰位置。15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述扩增子用包含以下序列之一的探针进行检测：5’-GCTTCGACCAGATACCGAAGC-3’5’-CGCTTACCAGATACCGAAGCG-3’5’-CGCTTCCACCAGATACCGAAGCG-3’或5’-CGCTCCACCAGATACCGAAGCG-3’。16.如权利要求15所述的方法，其中所述探针包含荧光部分和猝灭剂。17.如权利要求16所述的方法，其中所述荧光部分选自：FAM，TET，HEX，TAMRA，JOE，ROX，CalRed610nm，VIC，Cy5和Cy3，并且所述猝灭剂选自：5’IowaRQ(5IabRQ)，dabcyl，dabsyl和BlackHoleQuencher2(BHQ2)。18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述正向和反向引物分别包含以下序列：5’GACTCGATATCGAGTCTATCTATTGCAGGTAmAmAmGmGmG3’5’GACTCGATATCGAGTCCGGGACAGTGGCTmAmCmAmCmC3’和包含以下序列的探针：5’CGCTCCACCAGATACCGAAGCG3’。19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述切口酶选自：N.Bst9I，N.BstSEI，Nb.BbvCI(NEB公司)，Nb.Bpul10I(法尔曼塔公司)，Nb.BsmI(NEB公司)，Nb.BsrDI(NEB公司)，Nb.BtsI(NEB公司)，Nt.AlwI(NEB公司)，Nt.BbvCI(NEB公司)，Nt.Bpu10I(法尔曼塔公司)，Nt.BsmAI，Nt.BspD6I，Nt.BspQI(NEB公司)，Nt.BstNBI(NEB公司)和Nt.CviPII(NEB公司)。20.如权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述聚合酶选自：BstDNA聚合酶I，GstDNA聚合酶I，GkaDNA聚合酶I，SDDNA聚合酶，及其衍生物或突变体。21.一种用于检测样品中沙门氏菌的方法，所述方法包括使所述样品与分别包含以下序列的正向和反向引物接触：5’GACTCGATATCGAGTCTATCTATTGCAGGTAmAmAmGmGmG3’5’GACTCGATATCGAGTCCGGGACAGTGGCTmAmCmAmCmC3’在存在Nt.BstNBI(NEB公司)切口酶，dNTP，BstDNA聚合酶I和包含以下序列的可检测探针的情况下：5’CGCTCCACCAGATACCGAAGCG3’；和检测是否存在沙门氏菌扩增子，其中沙门氏菌扩增子的存在鉴定样品中的沙门氏菌。22.如权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述方法被周期性地用于监测选自田地、农作物、畜群、食品加工设施和食品处理设施的位置中的沙门氏菌的存在。23.如权利要求2...

【专利技术属性】
技术研发人员：V·杜塔，B·O·帕克，L·E·彼得斯，T·奎雷特，
申请(专利权)人：一龙公司，
类型：发明
国别省市：美国,US