一种ASE-HPLC法测定威灵仙中齐墩果酸含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种ASE‑HPLC法测定威灵仙中齐墩果酸含量的方法，该方法提取时间短、重复性好，且检测精度高。属于化学检测领域。该方法采用ASE法萃取威灵仙粉末，并收集甲醇萃取液；采用HPLC法测定甲醇萃取液中的齐墩果酸的含量；其中，步骤1所述的萃取依次包括用乙酸乙酯在76℃下去脂，在120℃下乙醇提取。本发明专利技术可以代替药典方法对威灵仙中齐墩果酸进行提取以及含量测定。

A ASE-HPLC method for determination of oleanolic acid in Clematis chinensis

The invention discloses a method for determining oleanolic acid content in Clematis chinensis by ASE HPLC method. The method has the advantages of short extraction time, good repeatability and high detection accuracy. It belongs to the field of chemical testing. The ASE method was used to extract the powder of Clematis and collect the methanol extract, and the content of oleanolic acid in the methanol extraction solution was determined by HPLC. The extraction of ethyl acetate in step 1 included ethyl acetate at 76 centigrade and ethanol at 120. The invention can be used for extracting oleanolic acid from Clematis chinensis and its content determination instead of Pharmacopoeia.

【技术实现步骤摘要】
一种ASE-HPLC法测定威灵仙中齐墩果酸含量的方法
本专利技术属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定威灵仙中齐墩果酸含量的方法。
技术介绍
2015年版药典方法：取本品粉末(过四号筛)约4g，精密称定，置索氏提取器中，加乙酸乙酯适量，加热回流3小时，弃去乙酸乙酯液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒转移至锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置水浴上蒸干，残渣加2mol/L盐酸溶液30ml使溶解，加热回流2小时。立即冷却，移入分液漏斗中，用水10ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中。加乙酸乙酯振摇提取3次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，70℃以下浓缩至近干，加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。该方法提取时间长，且对技术人员的专业水平要求较高。
技术实现思路
针对上述不足，本专利技术旨在提供一种ASE-HPLC法测定威灵仙中齐墩果酸含量的方法，该方法提取时间短、重复性好，且检测精度高。为了实现上述技术效果，本专利技术提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定威灵仙中的齐墩果酸含量的方法，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE法萃取威灵仙粉末，并收集甲醇萃取液；步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中的齐墩果酸的含量；其中，步骤1所述的萃取依次包括用乙酸乙酯在76℃下去脂，在120℃下乙醇提取。优选地，所述的步骤1包括下述子步骤：步骤S1：将威灵仙粉碎，过三号筛，取1g与1g硅藻土混合；步骤S2：将混合物装于放有滤膜、1g硅藻土的ASE萃取池中，加石英砂至与池口平行；步骤S3：用乙酸乙酯去脂，再用甲醇提取；步骤S4：蒸干，将沉淀用30ml盐酸溶解，加热回流2h；步骤S5：冷却，移入分液漏斗中，加45ml乙酸乙酯提取，浓缩；步骤S6：将步骤S5所得的浓缩物加甲醇溶解，并加甲醇定容至10ml，离心，取上清液。优选地，步骤S3所述的去脂参数为：压力为1500psi，温度为80℃，萃取时间为3min，循环次数为2次，冲洗体积为100％，吹扫时间为60s。优选地，步骤S3所述的提取参数为：压力为1500psi，温度为120℃，萃取时间为5min，循环次数为3次，冲洗体积为100％，吹扫时间为60s。优选地，步骤S4所述的盐酸浓度为2mol/L。优选地，所述的步骤5具体为：冷却，移入分液漏斗中，提取加乙酸乙酯提取3次，每次15ml，收集3次提取液，浓缩。优选地，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为ThermoAcclaimC30；柱温为20℃；流速为0.5mL/min；流动相为乙腈-水；检测波长为205nm。优选地，所述的色谱柱的规格为2.1*150mm，3μm。优选地，所述的流动相为体积比等于62：38的乙腈-水。本专利技术与传统方法相比，具有以下优点：本专利技术曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用乙酸乙酯除杂，采用稀乙醇提取齐墩果酸结合物再水解成齐墩果酸，杂质较少，故对使用乙酸乙酯、正己烷作为除杂溶剂，甲醇、稀乙醇、乙醇作为提取溶剂进行了溶剂考察，结果显示乙酸乙酯除杂，稀乙醇提取齐墩果酸后采用2mol/L盐酸水解后的含量与2015年版《中国药典》含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂。期间我们试采用乙酸乙酯除杂，采用5％氨水稀乙醇、3％磷酸稀乙醇作为提取和水解溶液作为仪器的萃取罐内进行水解提取，提取效果不佳，故单独采用药典的2mol/L盐酸溶液杂仪器外进行水解。在除杂过程中，药典方法加入乙酸乙酯回流3h，时间相对较长，我们采用了多次萃取除杂的方式，发现80℃，提取3min，2次即可达到除去大部分杂质，再多的提取时间和次数已经无明显影响，而相对高的温度会是齐墩果酸结果降低，故最终确定最佳除杂工艺组合为提取温度80℃，提取时间3min，提取次数2次。提取过程中采用120℃。提取5min，提取3次即可达到与药典含量接近，更多的提取时间、温度、次数对结果已经无明显影响。最终确定最佳提取工艺组合为提取温度120℃，提取时间5min，提取次数3次。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何在本专利技术权利要求保护范围内所做的有限次修改，仍在本专利技术的权利要求保护范围内。实施例11、仪器设备及试剂1.1仪器：电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、ThermoU3000UHPLC液相色谱仪1.2试剂：水：符合GB/T6682规定的一级水；甲醇(CH4O)：色谱纯；乙醇(C2H60)、乙酸乙酯(C4H8O2)：分析纯；石英砂：2mm。2、方法2.1对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含1mg的溶液，即得。2.2供试品溶液的制备2.2.12015年版药典方法取本品粉末(过四号筛)约4g，精密称定，置索氏提取器中，加乙酸乙酯适量，加热回流3小时，弃去乙酸乙酯液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒转移至锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置水浴上蒸干，残渣加2mol/L盐酸溶液30ml使溶解，加热回流2小时。立即冷却，移入分液漏斗中，用水10ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中。加乙酸乙酯振摇提取3次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，70℃以下浓缩至近干，加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2.2.2快速溶剂萃取法(ASE)制备供试品方法样品经粉碎机粉碎，过三号筛，约1g，精密称定，与适量石英砂混合均匀，待用，在预先放好过滤膜的10ml萃取池中先加入1g硅藻土，后加入混合均匀的样品，再加入适量石英砂，轻轻振摇使之与池口在同一水平线下2mm处，拧紧萃取池上盖。萃取(包括除杂和提取2步，见ASE条件方法)结束后，置水浴上蒸干，残渣加2mol/L盐酸溶液30ml使溶解，加热回流2小时。立即冷却，移入分液漏斗中，用水10ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中。加乙酸乙酯振摇提取3次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，70℃以下浓缩至近干，加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，在15000r/min下离心3min，取上清液，进入LC测定即得。2.2.3对照品溶液的制备取威灵仙对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含1mg的溶液，即得。2.3ASE萃取条件去脂参数为：压力为1500psi，温度为80℃，萃取时间为3min，循环次数为2次，冲洗体积为100％，吹扫时间为60s。提取参数为：压力为1500psi，温度为120℃，萃取时间为5min，循环次数为3次，冲洗体积为100％，吹扫时间为60s。2.4色谱条件与系统适用性试验a)仪器：Thermo双三元液相(U-3000)；b)色谱柱：ThermoAcclaimC30，2.1*150mm，3μmc)柱温：20℃；d)流速：0.5mL/min；e)流动相：乙腈-水(62：38)；f)检测波长：205nm；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；理论板数按齐墩果酸峰计算应不低于3000。2.5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ASE‑HPLC法测定威灵仙中的齐墩果酸含量的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE法萃取威灵仙粉末，并收集甲醇萃取液；步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中的齐墩果酸的含量；其中，步骤1所述的萃取依次包括用乙酸乙酯在76℃下去脂，在120℃下乙醇提取。

【技术特征摘要】
1.一种ASE-HPLC法测定威灵仙中的齐墩果酸含量的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE法萃取威灵仙粉末，并收集甲醇萃取液；步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中的齐墩果酸的含量；其中，步骤1所述的萃取依次包括用乙酸乙酯在76℃下去脂，在120℃下乙醇提取。2.根据权利要求1所述的一种ASE-HPLC法测定威灵仙中的齐墩果酸含量的方法，其特征在于，所述的步骤1包括下述子步骤：步骤S1：将威灵仙粉碎，过三号筛，取1g与1g硅藻土混合；步骤S2：将混合物装于放有滤膜、1g硅藻土的ASE萃取池中，加石英砂至与池口平行；步骤S3：用乙酸乙酯去脂，再用甲醇提取；步骤S4：蒸干，将沉淀用30ml盐酸溶解，加热回流2h；步骤S5：冷却，移入分液漏斗中，加45ml乙酸乙酯提取，浓缩；步骤S6：将步骤S5所得的浓缩物加甲醇溶解，并加甲醇定容至10ml，离心，取上清液。3.根据权利要求2所述的一种ASE-HPLC法测定威灵仙中的齐墩果酸含量的方法，其特征在于，步骤S3所述的去脂参数为：压力为1500psi，温度为80℃，萃取时间为3min，循环次数为2次，冲洗体积为100％，吹扫时间为60s。4.根据权利要求2所述的一种ASE‐...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈学松，韦日伟，欧妮，
申请(专利权)人：广西壮族自治区梧州食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：广西,45