一种硫巯化翻译后修饰肽段的定性与定量方法技术

本发明专利技术涉及一种硫巯化翻译后修饰肽段的定性与定量方法。所述的方法分为两条路线：路线A和路线B。其中，路线A是把蛋白酶解产生的肽段与碘乙酰胺的小球孵育，对巯基肽段和硫巯基肽段进行富集后；通过还原剂将硫巯基肽段的二硫键还原释放，进而用可断裂的同位素亲和标签标记释放下来的硫巯基肽段，最后使用裂解液将可断裂的同位素亲和标签的连接臂断裂。路线B是用可断裂的同位素亲和标签标记含巯基和硫巯基的蛋白、蛋白酶解、亲和富集巯基肽段和硫巯基肽段；最后用裂解液将连接在巯基肽段和硫巯基肽段上的可断裂的同位素亲和标签的连接臂断裂。该方法具有选择性好、假阳性低等优点，可实现复杂蛋白质组样品中规模化硫巯化肽段的定性与定量。

【技术实现步骤摘要】
一种硫巯化翻译后修饰肽段的定性与定量方法
本专利技术涉及一种硫巯化翻译后修饰肽段的定性与定量方法及其在细胞、组织及体液等蛋白质组样品中规模化硫巯化肽段分析中的应用。
技术介绍
20世纪90年代后期,H2S被证实是存在于体内的第3种新型的内源性气体分子，广泛参与机体多种生理与病理过程。目前研究表明，蛋白质的硫巯化翻译后修饰(将活性R-SH转化为R-SSH)是H2S信号传导的一个重要生物学途径之一。蛋白的硫巯化修饰在体内是普遍存在的，一些重要的蛋白质已被确认发生了硫巯化修饰，如：生理条件发生的Parkin-SSH能增强其泛素化活性，有利于帕金森疾病的治疗(Nat.Commun,2013,4,1-6)；抗凋亡转录因子(NF-κB)亚单元p65-SSH可以诱导抗凋亡基因的转录(Antioxid.Redox.Signal.,2014,21,2531-2541)。在组学水平大规模分析鉴定硫巯化蛋白/肽段有助于H2S信号通路的深入研究。然而，作为亲核试剂,R-SSH的性质与R-SH类似；作为亲电试剂，R-SSH的性质与R-SS-R类似；加之R-SSH的内在不稳定性导致富集鉴定存在较大的困难。目前，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种硫巯化翻译后修饰肽段的定性与定量方法，其特征在于：分为路线A和路线B；其中，路线A是把蛋白酶解产生的肽段与碘乙酰胺的小球进行孵育，对巯基肽段和硫巯基肽段进行富集；通过还原剂将硫巯基肽段的二硫键还原释放，进而用可断裂的同位素亲和标签标记释放下来的硫巯基肽段，最后使用裂解液将可断裂的同位素亲和标签的连接臂断裂；路线B是用可断裂的同位素亲和标签标记含巯基和硫巯基的蛋白、蛋白酶解、亲和富集巯基肽段和硫巯基肽段，最后使用裂解液将连接在巯基肽段和硫巯基肽段上的可断裂的同位素亲和标签的连接臂断裂；将路线A得到的肽段进行质谱鉴定,鉴定得到的肽段二级质谱信息生成参考库；利用质谱的离子监测技术PRM(para...

【技术特征摘要】
1.一种硫巯化翻译后修饰肽段的定性与定量方法，其特征在于：分为路线A和路线B；其中，路线A是把蛋白酶解产生的肽段与碘乙酰胺的小球进行孵育，对巯基肽段和硫巯基肽段进行富集；通过还原剂将硫巯基肽段的二硫键还原释放，进而用可断裂的同位素亲和标签标记释放下来的硫巯基肽段，最后使用裂解液将可断裂的同位素亲和标签的连接臂断裂；路线B是用可断裂的同位素亲和标签标记含巯基和硫巯基的蛋白、蛋白酶解、亲和富集巯基肽段和硫巯基肽段，最后使用裂解液将连接在巯基肽段和硫巯基肽段上的可断裂的同位素亲和标签的连接臂断裂；将路线A得到的肽段进行质谱鉴定,鉴定得到的肽段二级质谱信息生成参考库；利用质谱的离子监测技术PRM(parallelreactionmonitoring)对路线B得到的肽段进行质谱鉴定，将路线B鉴定得到的肽段二级质谱信息与路线A生成的参考库中的肽段二级质谱信息进行比对，从而实现对硫巯化肽段的定性与定量。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的碘乙酰胺的小球的制备过程为，将碘乙酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯通过共价反应固载到带氨基的小球上，避光振荡3-12h；小球的基质为硅球、聚合物微球、四氧化三铁磁性纳米颗粒；小球粒径在100纳米-10微米之间。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的通过还原剂将硫巯基肽段的二硫键还原释放的过程为，使用还原剂三(2-羧乙基)膦/二硫苏糖醇(1-100mM)在pH＝5-8，25-56℃下孵育30-120min，以切除硫巯基肽段的二硫键，进而释...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽华，吴琼，袁辉明，杨开广，张玉奎，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁,21