利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法技术

本发明专利技术的发明专利技术名称为利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，它是使用高效液相色谱分析仪和DAD检测器对标准溶液进行标定，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，取待测血液样品，在该待检测血液经过处理后，同样使用高效液相色谱分析仪和DAD检测器对待测的样品进行检测，得到待测血液y值，将待测血液y代入标准曲线方程中，通过计算得到待检测血液中的卡马西平药物浓度，该方法准确、快速、特异性强，具有较高的分离度和灵敏度，为临床上卡马西平的血药浓度监测提供了可靠的实验数据，更便于医生为患者及时提供准确的卡马西平给药方案。

Online detection of C Masi Bing's drug content in blood by dual three element pump

The invention of the invention is the method of on-line detection of C Masi Bing drug content in blood by using a double three element pump. It uses high performance liquid chromatography analyzer and DAD detector to calibrate the standard solution. The standard curve equation is y = a*x+b, and the blood sample is measured. Samples were detected by high performance liquid chromatography analyzer and DAD detector. The y value of the measured blood was obtained. The measured blood y was replaced by the standard curve equation. The concentration of carbamazepine in the blood was calculated. The method was accurate, rapid and specific, with high degree of separation and sensitivity. It provides reliable experimental data for the clinical C Masi Bing blood concentration monitoring, and it is more convenient for doctors to provide timely and accurate C Masi Bing drug delivery scheme for patients.

【技术实现步骤摘要】
利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法
本专利技术涉及一种精神类药物的药物浓度监测
，尤其涉及一种检测血液中药物卡马西平浓度的方法。
技术介绍
卡马西平(Carbamazepine，CBZ)，分子式C15H12N2O，其化学结构为5H-二苯并[b，f]氮杂卓-5-甲酰胺，具体结构如图1所示。CBZ常用于对抗癫痫发作，是简单部分性发作尤其是复杂部分性癫痫的首选药物，对大发作、局限性发作和混合型癫痫亦有疗效。此外，另有临床精神疾病研究指出，其可用于治疗精神分裂症和双相型障碍等。该药物有效浓度为4-12mg/L，具有安全范围小、体内代谢个体差异大、毒性较强等特点，且其疗效和不良反应与血液中药物浓度密切相关，故有必要对其进行药物浓度监测。目前，卡马西平药物浓度监测的常见方法有：紫外分光光度法、荧光偏振免疫法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法等。在众多的方法中，液相色谱法为测定卡马西平的最准确的方法。以往方法存在前处理复杂、不能重现结果，干扰因素多、分析时间长、灵敏度不高、定性定量不够准确等问题。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术目的是提供利用在线固相萃取技术检测血液中卡马西平药物浓度的方法，该方法前处理方法简单高效，定量准确快速，特异性强，大大缩短了整体分析时间，更利于进行大通量样本的分析。本专利技术采用以下技术方案：本专利技术的一种利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其中：它包括以下步骤：(一)标准溶液的标定首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL和90μL的由1∶1的甲醇和水组成的稀释液分别置于1.5mL离心管中混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为g00-1200rpm下涡旋混匀1-2min后，用高效液相色谱分析仪和DAD检测器对上述至少三种标准溶液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的卡马西平色谱图，以上述至少三个标准溶液的卡马西平峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有卡马西平的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为含有卡马西平的溶液；(a)标准工作液的配制：精确称取卡马西平标准品15mg置于10mL容量瓶，用甲醇进行溶解，并定容于10mL，得到标准储备液，将标准储备液用含水量为20％-60％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有5-400mg/L卡马西平的范围内配置出各标准工作液，并在-80℃条件下保存；(二)检测血液的离心取待检测血液至少5mL，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆，上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；(三)待测样品处理(b)用一次性无菌注射器吸取步骤(二)中的血清或血浆350μL，然后将上述无菌注射器前端连接针孔滤膜，将上述血清或血浆进行过滤后，将其移入1.5mL管中，得到待测样品；(四)待测样品的检测使用高效液相色谱分析仪和DAD检测器对上述步骤(b)待测样品100μL进行检测，得出上述待测样品的卡马西平色谱图，将上述色谱图中的卡马西平峰面积y代入上述步骤(一)的标准曲线方程中，通过计算得到待检测样品中目标物浓度x，即为待检测血液中的卡马西平药物浓度；高效液相色谱分析仪包括：双三元泵、在线过滤器、SPE柱和色谱柱；标准工作液和待测样品分别通过双三元泵依次进入在线过滤器、SPE柱和色谱柱；本专利技术的一种利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其中：在步骤(一)中使用七种不同浓度的标准工作液，七种不同浓度的标准工作液分别为含有5.00、10.00、20.00、40.00、80.00、160.00、320.00mg/L浓度的卡马西平溶液；本专利技术的一种利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其中：在步骤(a)中用由1∶1的水和甲醇组成的稀释液进行稀释；本专利技术的一种利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其中：所述SPE柱为资生堂公司的C18MGS-3；本专利技术的一种利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其中：所述色谱柱为AgiLent公司的Extend-C18，在线过滤器为AgiLent1290InfinityinLinefiLter；本专利技术的一种利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其中：所述高效液相色谱仪设置的柱温为30℃；本专利技术的一种利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其中：所述高效液相色谱仪所使用流动相为甲醇-水，并且双三元泵采用梯度洗脱，流速为1mL/min，进样量为10uL；本专利技术的一种利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其中：所述DAD检测器的检测波长为318nm，采集频率为5Hz，响应常数为1s；本专利技术的一种利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其中：所述含水量为体积比的含水量。本专利技术有益效果：本专利技术所述的检测血液中卡马西平浓度的方法，准确、快速、特异性强，具有较高的分离度和灵敏度，为临床上卡马西平的血药浓度监测提供了可靠的实验数据，更便于医生为患者及时提供准确的卡马西平给药方案。附图说明图1为卡马西平化学结构式；图2为实施例中标准溶液中卡马西平色谱图，其中标号1为卡马西平；图3为实施例中加标血清或血浆样本中卡马西平色谱图，其中标号1为卡马西平；下面将结合具体实施例和附图对本专利技术作进一步说明。具体实施方式本专利技术利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方包括以下步骤：(一)标准溶液的标定首先将七种不同浓度的标准工作液10μL和90μL的由1∶1的甲醇和水组成的稀释液分别置于1.5mL离心管中混合制成七种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为1200rpm下涡旋混匀1min后，用高效液相色谱分析仪和DAD检测器对上述七种标准溶液进行检测，得出上述七种标准溶液的卡马西平色谱图，以上述至少三个标准溶液的卡马西平峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有卡马西平的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为含有卡马西平的溶液；(a)标准工作液的配制：精确称取卡马西平标准品15mg置于10mL容量瓶，用甲醇进行溶解，并定容于10mL，得到标准储备液，将标准储备液用含水量为50％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，配置出含有5.00、10.00、20.00、40.00、80.00、160.00、320.00mg/L浓度卡马西平溶液的标准工作液，并在-80℃条件下保存；(二)检测血液的离心取待检测血液至少5mL，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上消液得血清或血浆，上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；(三)待测样品处理(b)用一次性无菌注射器吸取步骤(二)中的血清或血浆350μL，然后将上述无菌注射器前端连接针孔滤膜，将上述血清或血浆进行过滤后，将其移入1.5mL管中，得到待测样品；(四)待测样品的检测使用高效液相色谱分析仪和DAD检测器对上述步骤(b)待测样品100μL进行检测，得出上述待测样品的卡马西平色谱图，将上述色谱图中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其特征在于：它包括以下步骤：(一)标准溶液的标定首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL和90μL的由1∶1的甲醇和水组成的稀释液分别置于1.5mL离心管中混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为800‑1200rpm下涡旋混匀1‑2min后，用高效液相色谱分析仪和DAD检测器对上述至少三种标准溶液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的卡马西平色谱图，以上述至少三个标准溶液的卡马西平峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有卡马西平的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为含有卡马西平的溶液；(a)标准工作液的配制：精确称取卡马西平标准品15mg置于10mL容量瓶，用甲醇进行溶解，并定容于10mL，得到标准储备液，将标准储备液用含水量为20％‑60％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有5‑400mg/L卡马西平的范围内配置出各标准工作液，并在‑80℃条件下保存；(二)检测血液的离心取待检测血液至少5mL，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆，上述血清或血浆置于‑20℃冷冻下保存至分析前备用；(三)待测样品处理(b)用一次性无菌注射器吸取步骤(二)中的血清或血浆350μL，然后将上述无菌注射器前端连接针孔滤膜，将上述血清或血浆进行过滤后，将其移入1.5mL管中，得到待测样品；(四)待测样品的检测使用高效液相色谱分析仪和DAD检测器对上述步骤(b)待测样品100μL进行检测，得出上述待测样品的卡马西平色谱图，将上述色谱图中的卡马西平峰面积y代入上述步骤(一)的标准曲线方程中，通过计算得到待检测样品中目标物浓度x，即为待检测血液中的卡马西平药物浓度；高效液相色谱分析仪包括：双三元泵、在线过滤器、SPE柱和色谱柱；标准工作液和待测样品分别通过双三元泵依次进入在线过滤器、SPE柱和色谱柱。...

【技术特征摘要】
1.一种利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其特征在于：它包括以下步骤：(一)标准溶液的标定首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL和90μL的由1∶1的甲醇和水组成的稀释液分别置于1.5mL离心管中混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为800-1200rpm下涡旋混匀1-2min后，用高效液相色谱分析仪和DAD检测器对上述至少三种标准溶液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的卡马西平色谱图，以上述至少三个标准溶液的卡马西平峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有卡马西平的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为含有卡马西平的溶液；(a)标准工作液的配制：精确称取卡马西平标准品15mg置于10mL容量瓶，用甲醇进行溶解，并定容于10mL，得到标准储备液，将标准储备液用含水量为20％-60％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有5-400mg/L卡马西平的范围内配置出各标准工作液，并在-80℃条件下保存；(二)检测血液的离心取待检测血液至少5mL，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆，上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；(三)待测样品处理(b)用一次性无菌注射器吸取步骤(二)中的血清或血浆350μL，然后将上述无菌注射器前端连接针孔滤膜，将上述血清或血浆进行过滤后，将其移入1.5mL管中，得到待测样品；(四)待测样品的检测使用高效液相色谱分析仪和DAD检测器对上述步骤(b)待测样品100μL进行检测，得出上述待测样品的卡马西平色谱图，将上述色谱图中的卡马西平峰面积y代入上述步骤(一)的标准曲线方程中，通过计算得到待检测样品中...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏斌，贾永娟，倪君君，
申请(专利权)人：北京和合医学诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11