一种利用玻璃拉针挑取多能干细胞克隆的方法技术

本发明专利技术提供了一种无需用到解剖显微镜，只需在普通的倒置显微镜配合玻璃拉针和枪头即可进行多能干细胞克隆挑取的方法。该方法主要包括如下步骤：挑取多能干细胞克隆的玻璃拉针的制备；挑取多能干细胞克隆前的细胞换液和对克隆位置的标记；利用玻璃拉针从其他细胞和培养板中剥离出多能干细胞和利用200μL枪头吸取多能干细胞克隆。该方法简便易行，对于普通实验室可以节省购买解剖显微镜的成本。同时本发明专利技术提供的方法也适用于胚胎干细胞克隆的挑取和去除干细胞中分化的或者不纯的细胞，能作为一种纯化干细胞株，建立均一的、高纯度和高品质的干细胞株的方法。

A method of picking up pluripotent stem cell clones using glass pulling needles

The invention provides a method for picking up the pluripotent stem cell clones without the need of an anatomical microscope, which only needs a common inverted microscope with a glass drawing needle and a gun head. The method mainly includes the following steps: preparation of glass drawing needles from multipotent stem cell clones, picking up cell fluid before cloning of pluripotent stem cells and marking the location of clones; stripping multipotent stem cells from other cells and culture plates by using glass drawing needles and drawing pluripotent stem cell clones using 200 mu L gun head. This method is simple and convenient, and it can save the cost of buying dissecting microscope for general laboratories. At the same time, the method can also be used to pick up and remove the differentiated or impure cells from stem cell clones, and to establish a homogeneous, high purity and high quality stem cell line as a purification stem cell strain.

【技术实现步骤摘要】
一种利用玻璃拉针挑取多能干细胞克隆的方法
本专利技术涉及干细胞生物学与再生医学领域，具体地涉及一种利用玻璃拉针挑取多能干细胞克隆的方法及其应用。
技术介绍
成熟的体细胞可以通过异位表达关键的转录因子在称为诱导多能性的过程中重编程为多能状态。所产生的诱导多能干细胞(iPSCs)具有无限的增殖潜力，同时保持着能分化成任何细胞类型的潜能。这些多能性特征使iPS细胞能用于建立许多人类疾病的体外模型，用于发现治疗人类疾病的药物，并且有用作再生医学的无限细胞来源的潜在可能性。iPSCs在新药筛选，体外疾病模型的建立，细胞替代性治疗以及再生医学方面具有广泛的应用前景。在诱导体细胞形成诱导多能干细胞克隆后，需要挑取多能干细胞的单克隆，以建立稳定的多能干细胞株。目前挑取iPSCs克隆的方法主要是通过在解剖显微镜下挑取克隆的。本专利技术提供了一种无需用到解剖显微镜，只需在普通的倒置显微镜配合玻璃拉针和枪头即可进行多能干细胞克隆的挑取，该方法简便易行，对于普通实验室可以节省购买解剖显微镜的成本。同时本专利技术提供的方法也适用于胚胎干细胞克隆的挑取和去除干细胞中的分化细胞或者饲养层细胞，能作为一种纯化干细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用玻璃拉针的挑取多能干细胞克隆的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤:(1)挑取克隆所用的玻璃拉针的制备：将玻璃巴氏吸管一端置于酒精灯上灼烧后拉伸至末端断裂，将末端烧结封闭，并将玻璃巴氏吸管加热向下弯曲至30～90°，制备成玻璃拉针；(2)挑取多能干细胞克隆前的准备：在挑取克隆前需要先更换细胞的培养基，并对所需挑取的克隆在显微镜下进行拍照和标记；(3)进行多能干细胞单克隆挑取时，首先利用步骤(1)中制备的玻璃拉针在显微镜下剥离干细胞克隆，使整个克隆脱离培养板底部，然后再利用200μL的枪头吸取克隆进行消化和传代。

【技术特征摘要】
1.一种利用玻璃拉针的挑取多能干细胞克隆的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤:(1)挑取克隆所用的玻璃拉针的制备：将玻璃巴氏吸管一端置于酒精灯上灼烧后拉伸至末端断裂，将末端烧结封闭，并将玻璃巴氏吸管加热向下弯曲至30～90°，制备成玻璃拉针；(2)挑取多能干细胞克隆前的准备：在挑取克隆前需要先更换细胞的培养基，并对所需挑取的克隆在显微镜下进行拍照和标记；(3)进行多能干细胞单克隆挑取时，首先利用步骤(1)中制备的玻璃拉针在显微镜下剥离干细胞克隆，使整个克隆脱离培养板底部，然后再利用200μL的枪头吸取克隆进行消化和传代。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述步骤(1)中，所述玻璃巴氏吸管分为管主体部分和圆锥管部分，管主体部分直径为6～8mm，长度为10～15cm，圆锥管部分直径为1～2mm，长度为10～15cm。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述步骤(1)中，玻璃巴氏吸管加热位置为距离巴氏吸管圆锥管一端的1～2cm处，所述巴氏吸管的圆椎管的拉伸长度为2～3cm。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述步骤(1)中，巴氏吸管圆椎管拉断的末端在酒精灯上烧结成细小的圆球状。5.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡亚雄，陈勇，彭特，刘樱，于云飞，乔志平，
申请(专利权)人：广东艾时代生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：广东,44