一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物、检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物、检测方法及试剂盒。本发明专利技术提供的试剂盒根据石斑鱼肿大细胞病毒属虹彩病毒(GIV‑M)和石斑鱼蛙病毒属虹彩病毒(GIV‑R)的主衣壳蛋白(MCP)基因序列设计双重PCR引物，建立了单管、同步检测石斑鱼肿大细胞虹彩病毒和蛙虹彩病毒的方法，并对扩增体系和方法进行优化，最终实现了对石斑鱼肿大细胞虹彩病毒和蛙虹彩病毒的高特异、高灵敏、快速同步检测。

Double PCR primer, detection method and kit for Epinephelus iridus iridus virus

The invention provides a dual PCR primer, a detection method and a kit for Epinephelus iridus iridus virus. The kit provides a double PCR primer based on the sequence of the main capsid protein (MCP) gene of the Epinephelus iridovirus (GIV M) and the iridovirus (GIV R) virus of the grouper frog virus (GIV R). The method of single tube and synchronous detection of the siphon virus and the frog iridovirus in the swell cells of the grouper is established and the amplification system is also established. And the method was optimized to achieve high specificity, high sensitivity and rapid simultaneous detection of the large cell iridescent virus and frog iridescent virus in grouper.

【技术实现步骤摘要】
一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物、检测方法及试剂盒
本专利技术涉及PCR
，具体涉及一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物、检测方法及试剂盒。
技术介绍
石斑鱼是全球分布的名贵海洋鱼类，具有重要的经济价值。中国是世界上石斑鱼的主产国，自2014年以来的年总产量稳定在10万吨左右(2016年中国渔业统计年鉴)，占世界石斑鱼总产量约60％，产值超过100亿元人民币。但是，随着石斑鱼养殖业的快速发展，病害发生日益频繁，其中，病毒性病害尤为严重，成为限制石斑鱼产业健康发展的瓶颈之一。石斑鱼虹彩病毒(grouperiridovirus，GIV)是石斑鱼养殖中危害严重的一类病原，能够感染30多种石斑鱼，导致严重致死，在过去十年对东南亚各国造成了严重的经济损失。虹彩病毒科共包括五个病毒属，其中对石斑鱼危害较大的主要是肿大细胞病毒属(genusMegalocytivirus)和蛙病毒属(genusRanavirus)，分别简称GIV-M和GIV-R(Maetal.,2012)。GIV-M/R可危害各种规格的石斑鱼，致死率皆可达70％以上(Huangetal.,2011)。2002年，广东惠东的网本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物，其特征在于，所述引物根据石斑鱼肿大细胞病毒属虹彩病毒和石斑鱼蛙病毒属虹彩病毒的主衣壳蛋白基因序列设计，其中，石斑鱼肿大细胞病毒属虹彩病毒的检测引物，由SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的正向引物和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的反向引物组成，检测石斑鱼蛙病毒属虹彩病毒的检测引物，由SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列的正向引物和SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列的反向引物组成。

【技术特征摘要】
1.一种检测石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物，其特征在于，所述引物根据石斑鱼肿大细胞病毒属虹彩病毒和石斑鱼蛙病毒属虹彩病毒的主衣壳蛋白基因序列设计，其中，石斑鱼肿大细胞病毒属虹彩病毒的检测引物，由SEQIDNO：1所示的核苷酸序列的正向引物和SEQIDNO：2所示的核苷酸序列的反向引物组成，检测石斑鱼蛙病毒属虹彩病毒的检测引物，由SEQIDNO：7所示的核苷酸序列的正向引物和SEQIDNO：8所示的核苷酸序列的反向引物组成。2.如权利要求1所述的检测石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物在制备检测石斑鱼虹彩病毒的制品中的应用。3.一种检测石斑鱼虹彩病毒的双重PCR检测方法，包括以下步骤：1)从待检样品制备基因组总DNA；2)以制备的基因组DNA为模板，利用如权利要求1所述的双重PCR引物，在同一反应体系中进行双重PCR扩增，得到扩增产物；3)扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，获得检测结果。4.如权利要求3所述的检测石斑鱼虹彩病毒的双重PCR检测方法，其特征在于，所述样品中基因组总DNA的浓度不低于9pg/ml。5.如权利要求3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：马红玲，郭志勋，程长洪，冯娟，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院南海水产研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44