一种通过NKG2D活化NK细胞的中药方剂及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种通过NKG2D活化NK细胞的中药方剂及其制备方法和用途，该中药方剂包含以下中药原材料：红参、茯苓、白术和炙甘草；所述的红参、茯苓、白术和炙甘草的重量比为2：3：3：1。本发明专利技术的中药方剂通过增加NKG2D以活化NK细胞，NK细胞接触肿瘤细胞以后，通过活化受体NKG2D识别肿瘤细胞，启动细胞内活化性信号的转导，产生细胞毒作用，进而杀伤肿瘤细胞。

Chinese medicine prescription for activating NK cells through NKG2D and preparation method and use thereof

The invention discloses a traditional Chinese medicine prescription for activating NK cells through NKG2D and its preparation method and use. The herbal prescription contains the following raw materials: red ginseng, Poria cocos, Atractylodes macrocephala and Radix Glycyrrhizae; the weight ratio of the red ginseng, Poria cocos, Atractylodes macrocephala and Radix Glycyrrhizae is 2:3:3:1. By increasing NKG2D to activate NK cells and contact with tumor cells by NK cells, the traditional Chinese medicine prescriptions of the present invention recognize tumor cells by activating receptor NKG2D, initiate the transduction of activated signal in cells, produce cytotoxic effects, and then kill tumor cells.

【技术实现步骤摘要】
一种通过NKG2D活化NK细胞的中药方剂及其制备方法和用途
本专利技术涉及一种活化NK细胞的中药方剂，具体涉及一种通过NKG2D活化NK细胞的中药方剂及其制备方法和用途。
技术介绍
近年来随着社会、经济发展和人口老龄化，中国大多数恶性肿瘤的发病率和死亡率均呈上升趋势。对恶性肿瘤的治疗，目前以外科手术根治为主，化疗或放化疗综合治疗，中医药辅助西药治疗。手术、化疗或放疗等治疗措施，在杀伤肿瘤组织的同时，也对机体的正常细胞造成程度不一的损害，其中包括对免疫细胞的抑制和杀伤。虽然，中医药对肿瘤细胞的直接杀伤作用不及化疗药，但是其有效降低术后复发和转移，缓解放疗、化疗的毒副作用，提高放化疗的疗效，提高免疫力，延长生存期等方面具有明显优势。中医药提高患者免疫功能的现象虽然初步得到证实，但其中蕴含的机制仍待进一步研究。自然杀伤细胞(Naturalkillercell，简称NK细胞)是机体固有免疫系统的重要效应细胞，是除了T、B淋巴细胞外的第三大淋巴细胞，担负着机体抗病毒，抗肿瘤和抗异源移植物的重任，这群细胞可以在不受外界“致敏”的情况下自发杀死机体“不想要”的异常细胞，例如肿瘤细胞，是肿瘤免疫监视的重要组成。研究显示，原发性肝癌术后患者，服用益气健脾方可以提高患者生存率，降低肿瘤复发率，可能与机体中增加的NK细胞数目有关。益气健脾化积方治疗胃癌术后患者，能显著提高NK细胞数目，以及免疫因子干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量，黄芪制剂可以逆转由肿瘤细胞所导致的NK细胞杀伤功能抑制。只有活化的NK细胞才能扩散、浸润至肿瘤组织中发挥抗肿瘤作用。NK细胞功能的发挥，依赖于表面受体传递抑制或激活的信号，活化受体包括：C型凝集素受体中的NKG2D、CD226(ClusterofDifferentiation226)；自然细胞毒性受体(NCR)，其中主要有NKp46、NKp44、NKp30；细胞因子受体，如IL-2R、IL-15R、IL-18R、IL-21等。NKG2D是NK细胞表面最有效的活化受体之一，能识别大量的配体，NK细胞接触肿瘤细胞以后，通过活化受体NKG2D识别肿瘤细胞，启动细胞内活化性信号的转导，产生细胞毒作用，进而杀伤肿瘤细胞，在体内形成免疫监视。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种通过NKG2D活化NK细胞的中药方剂及其制备方法和用途，该中药方剂通过增加NKG2D以活化NK细胞，进而增强NK识别肿瘤细胞，产生细胞毒作用，进而杀伤肿瘤细胞。为了达到上述目的，本专利技术提供了一种通过NKG2D活化NK细胞的中药方剂，该中药方剂包含以下中药原材料：红参、茯苓、白术和炙甘草；所述的红参、茯苓、白术和炙甘草的重量比为2：3：3：1。该中药方剂包含以下中药原材料：红参6克、茯苓9克、白术9克、炙甘草3克。该中药方剂通过将红参、茯苓、白术和炙甘草加入水浸泡，加热回流提取，获得提取液，过滤，减压，蒸发至浸膏，减压干燥成干粉而制备获得。所述的水加入体积为中药原材料的重量的6倍。所述的加热的温度为90℃。本专利技术还提供了一种通过NKG2D活化NK细胞的中药方剂的制备方法，该方法包含：将红参、茯苓、白术和炙甘草加入水浸泡，加热回流提取，获得提取液，过滤，减压，蒸发至浸膏，减压干燥成干粉，得到中药方剂；所述的红参、茯苓、白术和炙甘草的重量比为2：3：3：1。所述的水加入体积为中药原材料的重量的6倍；所述的加热的温度为90℃。所述的加热回流提取的次数为三次，将三次的提取液合并一起进行过滤。本专利技术还提供了一种根据所述的中药方剂在活化NK细胞中的用途。本专利技术还提供了一种根据所述的中药方剂在制备肿瘤免疫治疗的药物中的用途。优选地，所述的中药方剂在制备结肠癌免疫治疗的药物中的用途。NKG2D是NK细胞表面最有效的活化受体之一，能识别大量的配体，NK细胞接触肿瘤细胞以后，通过活化受体NKG2D识别肿瘤细胞，启动细胞内活化性信号的转导，产生细胞毒作用，进而杀伤肿瘤细胞，在体内形成免疫监视。所述的肿瘤为结肠癌。本专利技术的通过NKG2D活化NK细胞的中药方剂及其制备方法和用途，其具有以下优点：本专利技术的中药方剂通过增加NKG2D以活化NK细胞，NK细胞接触肿瘤细胞以后，通过活化受体NKG2D识别肿瘤细胞，启动细胞内活化性信号的转导，产生细胞毒作用，进而杀伤肿瘤细胞，在体内形成免疫监视；本专利技术的中药方剂能够显著的增加表达NKG2D的NK细胞，Ca2+浓度和CD107a+表达均会增加，表明NK细胞活化，且具有浓度依懒性；本专利技术的中药方剂对结肠癌具有显著的作用，能显著增加NK细胞对结肠癌LOVO细胞的杀伤作用。附图说明图1为本专利技术的中药方剂对人原代NK细胞表达NKG2D的影响图。图2为本专利技术的中药方剂对人原代NK细胞胞内Ca2+浓度的影响图。图3为本专利技术的中药方剂对人原代NK细胞中CD107a+NK细胞数目比例的影响图。图4为本专利技术的中药方剂对人原代NK细胞杀伤结肠癌细胞的影响图。具体实施方式以下结合附图和实施例对本专利技术的技术方案做进一步的说明。一种通过NKG2D活化NK细胞的中药方剂，该中药方剂包含以下中药原材料：红参、茯苓、白术和炙甘草，所述的红参、茯苓、白术和炙甘草的重量比为2：3：3：1。上述中药制剂在临床上的使用剂量为：红参6克、茯苓9克、白术9克、炙甘草3克。该中药方剂的炮制方法，具体如下：按上述重量份取红参6克、茯苓9克、白术9克、炙甘草3克，加入6倍体积的水浸泡，回流提取，90℃加热回流3次，第1次回流提取2h，第2次和第3次，每次回流提取1h。合并3次提取液，过滤，减压，蒸发至浸膏，减压干燥成干粉，每1克生药得到0.32克提取物。此制备方法得到的中药方剂的可以活化NK细胞。将上述制备的中药方剂，定量称取，紫外线照射灭菌，无菌蒸馏水溶解，4℃冰箱保存备用，以进行下述相关中药方剂效果实验。1、中药方剂对NK细胞受体活化的影响将人原代NK细胞按照10×104个/mL浓度的细胞，每孔2mL，接种于6孔板中，放入37℃，5％CO2培养箱中培养24h后，加入不同浓度的SJZ(为本专利技术的中药方剂的编号)(0.5mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL)，作用24h后，0.25％胰蛋白酶消化收集细胞，1000rpm离心5min，弃培养基，加入1mLPBS轻吹，在1000rpm转速下离心5min，使用NK细胞表面活化受体FITC-NKG2D抗体(lifetechnologies，货号：521927)，通过FCM流式细胞术检测NK细胞表面活化受体NKG2D的表达情况。如图1所示，为本专利技术的中药方剂对人原代NK细胞表达NKG2D的影响图，图中CTRL代表对照组，即加入与SJZ等体积的生理盐水。从图1可以看出，中药方剂能活化受体NKG2D，且随着中药方剂浓度的增加，促进作用愈发显著，在中药方剂2.5mg/mL浓度下，人原代NK细胞表达NKG2D的细胞占41.86％，是对照组的3.46倍。2、中药方剂对NK细胞胞内Ca2+浓度的影响将人原代NK细胞按照10×104个/mL浓度的细胞，每孔2mL，接种于6孔板中，37℃，5％CO2培养箱中培养24h后，加入不同浓度的SJZ(0.5mg/mL、1mg/mL、1.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过NKG2D活化NK细胞的中药方剂，其特征在于，该中药方剂包含以下中药原材料：红参、茯苓、白术和炙甘草；所述的红参、茯苓、白术和炙甘草的重量比为2：3：3：1。

【技术特征摘要】
1.一种通过NKG2D活化NK细胞的中药方剂，其特征在于，该中药方剂包含以下中药原材料：红参、茯苓、白术和炙甘草；所述的红参、茯苓、白术和炙甘草的重量比为2：3：3：1。2.根据权利要求1所述的通过NKG2D活化NK细胞的中药方剂，其特征在于，该中药方剂包含以下中药原材料：红参6克、茯苓9克、白术9克、炙甘草3克。3.根据权利要求2所述的通过NKG2D活化NK细胞的中药方剂，其特征在于，该中药方剂通过将红参、茯苓、白术和炙甘草加入水浸泡，加热回流提取，获得提取液，过滤，减压，蒸发至浸膏，减压干燥成干粉而制备获得。4.根据权利要求3所述的通过NKG2D活化NK细胞的中药方剂，其特征在于，所述的水加入体积为中药原材料的重量的6倍。5.根据权利要求4所述的通过NKG2D活化NK细胞的中药方剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：石晓兰，樊瀛哲，禹雯琦，周诣，潘树芳，杜锦芳，宋运来，梁泽嘉，
申请(专利权)人：上海市普陀区中心医院，
类型：发明
国别省市：上海,31