一种猴头菇活性多糖的酸降解方法技术

本发明专利技术公开了一种猴头菌多糖的酸降解方法，包括如下步骤：溶解，将猴头菌多糖溶解于水中，配成溶液；水解，向水溶液加入酸，进行水解；中和，将水解后得到的溶液立即冷却，然后用碱溶液进行中和，调pH至中性；离心，将步骤3)得到的溶液离心；透析，将离心后的上清液透析；冷冻干燥，得到猴头菌多糖酸水解产物。利用本发明专利技术的方法得到的猴头菌多糖片段溶解性好、活性高，并且能够刺激巨噬细胞，提高NO的释放量，增强巨噬细胞的吞噬能力，发挥免疫活性，其在增强免疫力的食品、功能食品以及药物的制备中具有重要的应用价值。

An acid degradation method for the active polysaccharide of Hericium erinaceus

The invention discloses an acid degradation method of Hericium erinaceus polysaccharide, which includes the following steps: dissolving, dissolving the polysaccharide of Hericium erinaceus in water and forming a solution, hydrolyzing, adding acid to water solution, hydrolyzing, neutralizing the hydrolyzed solution immediately, and neutralizing pH to neutral by alkali solution; centrifuge, Centrifugation was obtained by step 3. Dialysis was used to dialysis the supernatant after centrifugation, and then the acid hydrolysate of Hericium erinaceus polysaccharide was obtained by freeze drying. The polysaccharide fragment of Hericium erinaceus obtained by this method has good solubility and high activity, and can stimulate macrophage, increase the release of NO, enhance the phagocytosis of macrophage, and play an immune activity. It has important application value in the preparation of immune food, functional food and drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种猴头菇活性多糖的酸降解方法
本专利技术涉及食用菌加工领域，具体的涉及一种猴头菌活性多糖的酸降解方法。
技术介绍
猴头菌或猴头菇(Hericiumerinaceus)是一种著名的食药用真菌，其性平、味甘、入药利五脏、助消化，可治疗神经衰弱、胃炎及胃溃疡等。猴头菌多糖是其最主要的活性成分之一，具有提高免疫力、抗氧化、抗肿瘤、抗衰老、降血糖等多种功效。活性多糖是食用菌中的主要生物活性物质，本实验室从猴头菌子实体中提取得到一种分子量达200万Da的猴头菌β-葡聚糖H6PC20，但由于此多糖本身黏度较大，溶解度不高，限制了该多糖深度开发利用。此多糖具有纯度高、颜色浅、分子量大、活性佳、制备简单等优点。猴头菌中分离获得一种具有体外免疫活性的大分子，由于此多糖粘度较大，在水中的溶解度不高，从而限制了其深度开发利用。采用物理或化学方法对其进行适当的降解改性或化学修饰，制备溶解性好、活性更高的多糖衍生物，将会扩大该多糖在食品、保健品乃至药品的开发应用。现有技术中仅有少量的文献公开了对提取的猴头菌多糖做进一步的降解或水解处理，例如，CN201610935637公开了一种猴头菌活性多糖及其制备方法，其将猴头菌多糖进行原料预处理，然后进行超声降解，最后冷冻干燥得到所需的猴头菌活性多糖。然而，还未发现利用酸降解猴头菌多糖来制备溶解性好、活性更高的多糖衍生物的方法。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，得到溶解性好、活性更高的猴头菌多糖产物，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术的一方面提供一种猴头菌多糖的酸降解方法，包括如下步骤：1)溶解，将猴头菌多糖溶解于水中，配成溶液；2)水解，向水溶液加入酸，进行水解；3)中和，将水解后得到的溶液立即冷却，然后用碱溶液进行中和，调pH至中性；4)离心，将步骤3)得到的溶液离心；5)透析，将离心后的上清液透析；6)冷冻干燥，得到猴头菌多糖酸水解产物。根据本专利技术的优选实施方式，所述方法具有下述中的一个或多个：所述猴头菌多糖是猴头菌β-葡聚糖H6PC20，步骤1)中所述溶液溶度为1-2g/L，步骤2)中水解温度为90-100℃，步骤3)中碱溶液是NaOH溶液，步骤4)中以8000-12000×g离心15-20min，步骤5)中用3500Da透析袋进行透析。根据本专利技术的优选实施方式，所述步骤2)中的酸为盐酸、硫酸、三氟乙酸。根据本专利技术的优选实施方式，所述酸为三氟乙酸。根据本专利技术的优选实施方式，所述三氟乙酸的终浓度为0.1-1.0mol/L。根据本专利技术的优选实施方式，所述三氟乙酸的终浓度为0.1-0.5mol/L。根据本专利技术的优选实施方式，所述水解时间为30-90min。根据本专利技术的优选实施方式，所述水解时间为30-50min。本专利技术的另一方面提供了猴头菌多糖酸水解产物，由上述方法制备得到。优选地，猴头菌多糖酸水解产物的分子量为1.97×106-6.66×105Da或1.65×106-8.80×105Da。本专利技术的又一方面还提供上述猴头菌多糖酸水解产物在制备提高免疫力的食品、保健品或药品中的应用。有益效果1.本专利技术的方法对大分子猴头菌β-葡聚糖H6PC20进行适当的化学降解改性，制备出的猴头菌多糖片段溶解性好、活性高。2.采用本专利技术获得稳定的大分子猴头菌多糖的降解方法，所获得的猴头菌多糖片段能够刺激巨噬细胞，提高NO(一氧化氮)的释放量，增强巨噬细胞的吞噬能力，发挥免疫活性，扩大该多糖在食品、保健品乃至药品的开发应用。附图说明根据下文结合附图对本专利技术具体实施例的详细描述，本领域技术人员将会更加明了本专利技术的上述以及其他目的、优点和特征。图1为H6PC20降解后的液相色谱图，其中，图1a为柠檬酸降解H6PC20后的产物的液相色谱图；图1b为三氟乙酸降解H6PC20后的产物的液相色谱图；图1c为盐酸降解H6PC20后的产物的液相色谱图；图1d为硫酸降解H6PC20后的产物的液相色谱图。图2显示三氟乙酸(TFA)降解反应时间与H6PC20降解产物相对分子质量的关系。图3显示三氟乙酸降解反应时间与经H6PC20降解产物刺激后的巨噬细胞NO释放量的关系。图4显示三氟乙酸浓度与H6PC20降解产物分子量的关系。图5显示三氟乙酸浓度与经H6PC20降解产物刺激后的巨噬细胞NO释放量的关系。具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术做进一步的阐述，实施例中所用原料和设备均为本领域技术人员熟知，且均为市场上能够购买到或容易获得或制得。实施例1：酸种类筛选称取4份100mg的大分子猴头菌β-葡聚糖H6PC20分别放于具塞试管中，加水溶解，配成2g/L的溶液；然后分别加入的柠檬酸、盐酸、硫酸、三氟乙酸，酸的终浓度为0.5mol/L。将具塞试管放置于100℃的水浴，水解2h，待彻底水解结束后，酸性多糖溶液立即置于冰浴中冷却，然后用1M的NaOH溶液进行中和，调pH至中性。12000×g离心15min，去除杂质。取离心后的上清液用3500Da的透析袋进行透析，将酸去除。冷冻干燥得到酸水解产物，高效液相色谱法分别测定大分子猴头菌多糖H6PC20酸水解之后的分子量分布图。柠檬酸、三氟乙酸、盐酸和硫酸降解猴头菌β-葡聚糖H6PC20的效果图，如图1所示(其中，图a为柠檬酸降解H6PC20后的产物的液相色谱图；图b为三氟乙酸降解H6PC20后的产物的液相色谱图；图c为盐酸降解H6PC20后的产物的液相色谱图；图d为硫酸降解H6PC20后的产物的液相色谱图)。由图a的液相色谱图可见，柠檬酸的酸性很弱，只能将H6PC20降解到1.227×106Da，对多糖的降解效果不明显，而且后续处理较繁琐，透析时间长；由图c和d的液相色谱图可见，硫酸、盐酸降解时降解的组分较多，且各个组分之间相隔较小，难以分离；由图b的液相色谱图可见，三氟乙酸可以将H6PC20降解到7.016×105Da，组分单一，所以根据降解效果优选三氟乙酸降解，但这不表明其他酸不适合本专利技术的方法。实施例2：三氟乙酸降解时间确定称取5份100mg的猴头菌β-葡聚糖H6PC20分别放入具塞试管中，加水溶解，配成1g/L的溶液；每管加入三氟乙酸溶液，使得三氟乙酸的终浓度为0.5mol/L，封管，放置于90℃的水浴锅中，分别反应30min、50min、70min、90min和110min。反应结束后，冷却，8000×g离心20min去沉淀，取离心后的上清液用3500Da的透析袋进行透析，除去三氟乙酸，真空冷冻干燥，得降解猴头菌多糖片段。高效液相色谱法测定不同多糖片段的分子量，并且测定不同分子量猴头菌多糖体外刺激巨噬细胞RAW264.7释放NO的活性。在三氟乙酸浓度为0.5mol/L，温度为90℃反应的条件下，反应不同时间后所得的多糖分子片段的相对分子质量如图2所示。由该图可以看出，随着反应时间的延长，多糖的相对分子质量降低，在50min～90min，分子质量迅速下降，之后随着时间的延长，分子质量变化较小，在90～110min时，相对分子质量降低的速率减慢，反应90min内降解有一定效果。在酸终浓度为0.5mol/L，温度为90℃反应的条件下，不同降解时间所得降解多糖分子片段刺激RAW264.7巨噬细胞释放NO的作用如图3所示。结果表明，三氟乙酸降解反应30min和50min所对应的分子片段本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猴头菌多糖的酸降解方法，包括如下步骤：1)溶解，将猴头菌多糖溶解于水中，配成溶液；2)水解，向水溶液加入酸，进行水解；3)中和，将水解后得到的溶液立即冷却，然后用碱溶液进行中和，调pH至中性；4)离心，将步骤3)得到的溶液离心；5)透析，将离心后的上清液透析；6)冷冻干燥，得到猴头菌多糖酸水解产物。

【技术特征摘要】
1.一种猴头菌多糖的酸降解方法，包括如下步骤：1)溶解，将猴头菌多糖溶解于水中，配成溶液；2)水解，向水溶液加入酸，进行水解；3)中和，将水解后得到的溶液立即冷却，然后用碱溶液进行中和，调pH至中性；4)离心，将步骤3)得到的溶液离心；5)透析，将离心后的上清液透析；6)冷冻干燥，得到猴头菌多糖酸水解产物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法具有下述中的一个或多个：所述猴头菌多糖是猴头菌β-葡聚糖H6PC20，步骤1)中所述溶液溶度为1-2g/L，步骤2)中水解温度为90-100℃，步骤3)中碱溶液是NaOH溶液，步骤4)中以8000-12000×g离心15-20min，步骤5)中用3500Da透析袋进行透析。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)...

【专利技术属性】
技术研发人员：李婷婷，杨焱，吴迪，李彩金，金月玲，
申请(专利权)人：上海健康医学院，上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：上海,31