观察标本制作用细胞保持基材保持件及包括其的套件以及观察标本的制作方法技术

本发明专利技术提供一种可简便地进行细胞保持基材的装卸的观察标本的制作用细胞保持基材保持件及细胞保持基材套件，并提供能够同时解决细胞剥离、干燥、立体性的消失这三个问题、而且能够用光学显微镜充分地观察细胞器的观察标本的制作方法。所述细胞保持基材保持件包括：(一)支撑板(1)，其具有细胞保持基材配置部(12)，所述细胞保持基材配置部(12)具有可通水的窗部；以及(二)夹持用板(2)、(3)，其具有可通水的窗部，并可与所述支撑板(1)配合地将细胞保持基材(9)夹持固定于细胞保持基材配置部(12)，且可拆卸。所述细胞保持基材套件(10)包括所述细胞保持基材保持件、和细胞保持基材(9)。在所述方法中，利用无机纤维集合体捕获细胞，并直接实施湿固定、染色、及利用折射率与无机纤维的折射率相同的封固剂的封固。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】观察标本制作用细胞保持基材保持件及包括其的套件以及观察标本的制作方法
本专利技术涉及：能够在出于对细胞实施各种染色并利用显微镜(光学、荧光)进行观察的目的而制作的观察标本的制作中使用的细胞保持基材保持件及包括其的套件、以及观察标本的制作方法，更详细而言，涉及：实施了在细胞诊(细胞诊断)中实施的病理染色中的、湿固定和其后的使用染色槽的染色(巴氏染色、PAS染色、阿尔新蓝染色等)的观察标本的制作方法。
技术介绍
该领域主要用于癌的诊断，并按下述步骤实施：由采集自患者的细胞制作观察标本，具有细胞诊断士、细胞诊断专门医、病理专门医等资格的人进行镜检，检出异常细胞(异型细胞)。此外，该领域主要在医院等医疗机构实施，需要每天制作并检查大量的检体(观察标本、镜检标本)。细胞诊根据细胞的采集方法分类，包括有：对混入有剥离的细胞的体液进行采集的剥离细胞诊(痰、尿、胸水、腹水、心包液、脑脊液、胆汁等)；将刷子、棉棒等插入体内并擦过病变部从而采集细胞的脱落细胞诊(子宫颈部或子宫体部、支气管、胆管、胰管等)；将细针刺入病变部并进行吸取从而采集细胞的穿刺吸取细胞诊(乳腺、甲状腺、淋巴结、肝脏等)等，将这些采集的细胞涂抹于观察用基板(载玻片)，制作观察标本。向载玻片的涂抹多以将细胞分散于液体的状态进行，在采集的状态不是体液等液状的情况下，有时在分散于固定液体后进行涂抹(液状化检体细胞诊)。“细胞染色”除了该领域以外还存在多种领域。根据制作而成的观察标本的使用目的(完成度)不同，染色方法、试剂、器具、设备也完全不同。染色的目的例如可列举出：将组织根据细胞种类不同染成不同颜色，从而明确各自的位置(例：免疫组织染色)；以细胞具有的一些标记、形态学特征为基础，只要利用装置能够检出目的细胞的数目、染色强度即可(例：高内涵筛选、流式细胞术)；前述的目的中，利用人眼进行观察(例：血细胞计数器的细胞计数)；将细胞内外的目标物质染色，从而观察位置(例：荧光显微镜观察)；观察细胞器的形状、颜色(例：细胞诊)；进一步详细观察到乃至细胞器内部结构(例：电子显微镜观察)，但在该领域中，通过光学显微镜下的观察来进行观察，要求以能够充分观察细胞器的观察倍率(大约200～400倍)，取得能够判别细胞器的形状、染色的颜色及浓淡的观察影像。此外，由于所提供的细胞试样的状态、使用的试剂的性质、需要的标本的完成度等原因，在该领域的迄今为止的通常的观察标本制作工序中，需要没有在其它染色领域中进行过的、如下所述的独特的作业工序。涂抹是将所提供的细胞试样涂敷于观察用基板(载玻片)的操作。包括直接涂敷于载玻片的方法(拉片法、推片法、离心直接涂抹法等)、在利用过滤器捕获细胞后转移至载玻片的方法(过滤器法)。前者的拉片法、推片法虽然简便，但是难以涂抹于狭窄的范围，并且由于在推片所使用的玻璃侧也附着有细胞，因此细胞密度变薄，存在观察操作时必须观察较大范围这样的问题。此外，由于后者的过滤器法无法将捕获的所有细胞转移到载玻片，因此存在细胞损失的问题，此外存在因转移操作时的压力而导致细胞形状变性这样的问题。湿固定是浸渍于试剂(固定液)进行固定以避免涂抹后的细胞变性的操作。在该领域中湿固定是重要的，若细胞干燥变性，则染色性发生变化，对诊断产生影响。通常，涂抹至载玻片的细胞必须在几秒内进行湿固定。因此，难以同时涂抹大量的检体。此外，在涂抹中使用设备的离心直接涂抹法、过滤器法存在下述问题：在从设备、载玻片架上取出期间、还有过滤器法的转移操作的期间会晾干。另外另外，刚刚涂抹后的细胞容易从载玻片剥离，若浸渍于固定液，则也存在导致大量细胞从载玻片剥离这样的问题。在细胞具有块状的堆叠性的情况下，就更加难以将它们保持于载玻片。为了解决该剥离的问题，也有施加防细胞剥离涂层(硅烷涂层等)的载玻片的方案，但实际上并未获得充分的效果。此外，为了同时解决剥离、干燥的问题，提出了喷射或滴下具有保湿性的固定液而涂覆细胞与载玻片的方法。然而，由于在喷射固定液的瞬间也会引起细胞的剥离，并且保湿成分(PEG等)涂覆细胞，因此存在使细胞的染色性发生变化、对诊断产生影响这样的新问题。染色(包括溶剂更换、分离、显色)通过将数片完成了涂抹及湿固定的载玻片垂直地设置于染色筐，并投入至加入有染色液等试剂的染色槽或覆盖有自来水的垫子，使其静置或出没，来进行实施。染色工序长且复杂，例如在巴氏染色的手法中进行三重染色，虽然根据实施装置不同而有些许差异，但是全部工序需要20～25个步骤左右。这是由于：除了染色之外，还包括根据染色试剂更换溶剂的工序、冲洗多余的染色液的清洗工序(分离)、以及为了进行显色而浸渍于溶液中的工序等。此外，各染色步骤的时间、在试剂中的出没次数优选以严密设定的状态实施，将细胞器等目标分别染色的该领域的染色中，获得染色的稳定性和再现性非常重要。这样，该领域的染色中，针对大量的患者检体，必需均匀快速地处理，进行具有稳定性和再现性的染色，此时，使用染色筐及染色槽是有用的。由于染色筐能够以不损伤涂抹面的方式保持多个载玻片，因而使在染色槽间的移动、出没这样的操作变得容易。此外，为了不产生染色不均匀、脱色不均匀，需要将涂抹面快速浸渍于大容量的染色液、分离液(清洗液)中，但通过利用染色筐及染色槽进行投入、出没这样的操作能够避免这样的不均匀。这样，在染色工序中，由于经过若干步骤进行与试剂的接触，因此与湿固定工序同样地，存在导致涂抹于载玻片的细胞发生剥离这样的问题。脱水·澄澈通过从低浓度的乙醇槽逐渐地向纯乙醇槽转移进行脱水，并最终浸渍于二甲苯槽中来实施。通过该操作使组织变得透明，成为适于镜检的标本。在澄澈中使用了溶解力强的溶剂，因此若对在过滤器法中主要使用的聚碳酸酯制薄膜上的细胞直接进行澄澈，则会引起薄膜的溶解、白浊，因此无法将薄膜用作观察用基材，需要将捕获的细胞转移至载玻片。封固向涂抹面投入封固剂(树脂溶解于溶剂而成)，并利用盖玻片和载玻片夹持细胞来实施。通过用封固剂密封染色后的细胞，由此能够防止镜检操作时对涂抹面的物理性冲击、显微镜照明导致的劣化、以及经时性褪色而长期保存。观察利用光学显微镜来实施。例如，由于在巴氏染色中需要进行核内染色质结构的观察，而在PAS染色中则需要观察颗粒的颜色，因此最低程度也需要获得200～400倍的清晰的观察影像。在该领域中，到目前为止的通常的观察标本的制作是通过上述那样的工序来实施的。这样的使用了染色筐、染色槽的染色工序通过人工或利用自动染色装置来实施。此外，在该领域中，以往公知的观察标本的制作是通过涂抹于载玻片来实施的。载玻片的观察性良好，细胞以稍微扩散的状态贴附于玻璃表面进行分布，因此易于观察细胞内部，且由于平坦而具有易于进行封固操作的优点。另一方面，则由于其平面的结构，在观察标本的制作工序中无法保持细胞，会引起剥离。而且缺乏保湿性，容易引起干燥导致的细胞的变性。此外，由于细胞为伸展的形状，因此存在难以检出作为癌细胞的特征的细胞形状、细胞核的立体不规则的问题。这样，迄今为止还没有能够同时解决细胞剥离、干燥、立体性的消失这三个问题、且能够用光学显微镜充分地观察细胞器的观察标本的制作方法。另外，使用过滤器来捕获细胞并制作分析、诊断用的标本这样的方法如下所述已经提出，但是其无法解决所述技术问题。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种观察标本制作用细胞保持基材保持件，其包括：(1)支撑板，其具有细胞保持基材配置部，所述细胞保持基材配置部具有可通水的窗部；以及(2)夹持用板，其具有可通水的窗部，并可与所述支撑板配合地将细胞保持基材夹持固定于细胞保持基材配置部，且可拆卸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.14 JP 2015-180832;2015.09.14 JP 2015-180831.一种观察标本制作用细胞保持基材保持件，其包括：(1)支撑板，其具有细胞保持基材配置部，所述细胞保持基材配置部具有可通水的窗部；以及(2)夹持用板，其具有可通水的窗部，并可与所述支撑板配合地将细胞保持基材夹持固定于细胞保持基材配置部，且可拆卸。2.根据权利要求1所述的观察标本制作用细胞保持基材保持件，其特征在于，支撑板具有细胞保持基材配置部和框架部。3.根据权利要求1或2所述的细胞保持基材保持件，其特征在于，支撑板以隔着窗部的方式在两侧具有凹陷，夹持用板是具有可嵌装于所述两凹陷的爪的盖板。4.根据权利要求2所述的细胞保持基材保持件，其特征在于，夹持用板是具有可与支撑板的框架部抵接的凸缘部的凸缘板，还包括可将支撑板的框架部和凸缘板的凸缘部夹持固定的夹子。5.根据权利要求4所述的细胞保持基材保持件，其特征在于，凸缘板具有可投入检体且可与凸缘部的窗部连通的杯部。6.根据权利要求5所述的细胞保持基材保持件，其特征在于，杯部可分离。7.根据权利要求3～6中任一项所述的细胞保持基材保持件，其特征在于，包括盖板、凸缘板、和夹子。8.根据权利要求1～7中任一项所述的细胞保持基材保持件，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：向所贤一，服部隆则，岩佐卓哉，川部雅章，熊谷聪士，
申请(专利权)人：国立大学法人滋贺医科大学，日本宝翎株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP