一种组织细胞标本石蜡包埋的制作方法技术

本发明专利技术提供一种组织细胞标本石蜡包埋的制作方法，其特点是：制作方法包括将组织细胞标本经沉淀、离心处理后，提取组织细胞标本并加入一种环保型生物合成剂，经超声波组织处理仪或医用微波炉对组织细胞标本同步进行固定、脱水、透明、浸蜡处理，石蜡包埋组织切片、染色及封片。本发明专利技术的优点是快速，无污染，操作简便，染色过程可与日常工作一并进行，也可进行分子病理检测，且结果稳定。提高了病理诊断的阳性检出率及准确率。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供，其特点是：制作方法包括将组织细胞标本经沉淀、离心处理后，提取组织细胞标本并加入一种环保型生物合成剂，经超声波组织处理仪或医用微波炉对组织细胞标本同步进行固定、脱水、透明、浸蜡处理，石蜡包埋组织切片、染色及封片。本专利技术的优点是快速，无污染，操作简便，染色过程可与日常工作一并进行，也可进行分子病理检测，且结果稳定。提高了病理诊断的阳性检出率及准确率。【专利说明】
本专利技术属于临床病理诊断、科研领域中对细胞学检测方法，具体说。
技术介绍
通过胸、腹水及淋巴液检测肿瘤细胞是临床病理诊断常用的检测方法之一，目前采用较多的方法有涂片法、TCT、LCT等，其制作的细胞涂片分布均匀，形态清晰，阳性诊断率较高，但由于负载的肿瘤细胞少，可出现细胞成团、重叠、挤压等现象，同时也不能满足后期的免疫组化的鉴别诊断。经细胞蜡块制作的切片细胞数量多，可连续切片，并可满足免疫组化、分子病理检测，满足了临床病理的需求。但常规制作时间需要3?5天，加上免疫组化时间往往需要5?7天才能拿到诊断报告。且在制作过程中因甲醛、二甲苯的挥发对人体产生一定的毒害。因此，目前的制作方法亟待改进。如何提供，具有制作时间短，操作简便，步骤少，结果稳定，阳性检出率及准确率高，并减少污染环境。这是本专利技术面临的技术问题。
技术实现思路
本专利技术为解决现有技术存在的上述问题，提供，具有制作时间短，操作简便，步骤少，不易出差错，结果稳定，阳性检出率及准确率高，并减少环境污染。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的:，其特征在于，制作方法包括将组织细胞标本经沉淀、离心处理后，提取组织细胞标本并加入一种环保型生物合成剂，经超声波组织处理仪或医用微波炉对组织细胞标本同步进行固定、脱水、透明、浸蜡处理，石蜡包埋组织切片、染色及封片。对上述技术方案的一种改进:所述的组织细胞标本为胸腔积液或腹腔积液，所述提取组织细胞标本的具体步骤如下: (1)沉淀组织细胞:将抽取的胸腔积液或腹腔积液100?500ml放入干净的器皿中，静止1-2小时，使大量的胸腔积液或腹腔积液中的组织细胞自然沉降到器皿的底部； (2)采集组织细胞:弃去上清液，将底层的沉淀50?IOOml置于多个容积为5ml的试管中离心，离心转速为2000?2500转/分，离心时间为5-10分钟，将上清液弃去，最后将所述多个试管内的组织细胞集中至一个试管中，直到获得较多的组织细胞数量； (3)凝固组织细胞:在最后沉淀组织细胞中加入10%中性缓冲甲醛，并用吸管将沉淀的组织细胞打散，再离心1-3分钟，至少静置15分钟后将半凝固状成团的组织细胞放入纱布中包好，放入包埋盒中。对上述技术方案的进一步改进:对于离心后组织细胞数量少的标本: (I)所述采集组织细胞步骤中，所述多个试管内的组织细胞集中至一个试管的形状为锥形的试管，使用锥形试管再次离心1-3分钟后，弃去上清液，加入少量的蛋白甘油，与组织细胞混合，使较少的组织细胞与蛋白相溶； (2)所述包埋包括初次包埋和二次包埋，所述初次包埋是向组织细胞中加入无水酒精，1-3分钟后取出半凝固状的组织细胞放入纱布中包好，放入包埋盒中；无水酒精与蛋白凝固将组织细胞包裹在内，起支撑固定作用。对上述技术方案的另一种改进:所述的组织细胞标本为尿液、淋巴液或细胞悬液，具体步骤如下: (1)离心采集组织细胞:先将大量的尿液、淋巴液或细胞悬液中的一种，用大型离心机分多次离心，弃去上清液，最后将沉淀物集中到一个试管内离心，弃去上清液；淋巴液和细胞悬液因标本总量较少，但细胞含量大，可直接放入试管中离心后弃去上清液； (2)所述包埋包括初次包埋和二次包埋，所述初次包埋是向所述尿液、淋巴液或细胞悬液中的一种组织细胞内加入熔点为45°C -52°C的5%琼脂或5%蛋白，室温下快速凝聚成团状，放入纱布中包好放入包埋盒中，起支撑作用；或者，所述初次包埋是向所述尿液、淋巴液或细胞悬液中的一种组织细胞内加5%蛋清，用吸管打散后加入10%的中性缓冲甲醛，至少静置15分钟后，将已凝固的组织细胞取出放人纱布中包好放入包埋盒中。对上述技术方案的进一步改进:所述的固定步骤之前增加预固定步骤，预固定步骤是将所述包埋盒放入装有10%中性缓冲甲醛的脱水缸中，置入超声波组织处理仪或医用微波炉中15分钟； 所述固定、脱水、透明、浸蜡步骤为:将固定好的组织细胞标本继续放入超声波组织处理仪或微波炉中，用环保型生物合成剂，温度45°C，时间12分钟，共3次； 浸蜡时间在温度为62°C条件下10分钟；使用环保型生物合成剂脱水、透明、浸蜡同时进行，以达到石蜡浸入组织细胞的目的； 所述二次包埋步骤:将纱布中的组织取出，放入盛有液状石蜡的包埋框中，将成团的组织细胞打散后均匀的平铺在底部，待冷却后制成组织细胞蜡块；如经过初次包埋的组织细胞，可将组织细胞标本周围凝固的琼脂或蛋清去除，再行石蜡包埋，已得到组织细胞数量的最大面积； 所述组织细胞切片步骤:将上述经石蜡包埋的组织细胞蜡块在组织切片机上切成3?4微米切片，温度为65°C条件下，烤片时间10?15分钟； 所述染色包括HE染色和免疫组织化染色； 所述HE染色步骤如下: (I)先将环保透明脱蜡液放入60°C恒温干燥箱预热； (2)将切片浸入环保透明脱蜡液中进行第一次脱蜡2分钟； (3)将切片浸入环保透明脱蜡液中进行第二次脱蜡2分钟； (4)将切片浸入环保透明脱蜡液中进行第三次脱蜡2分钟； (5)无水乙醇洗去环保透明脱蜡液2分钟； (6)95%乙醇冲洗2分钟； (7)80%乙醇冲洗2分钟； (8)自来水冲洗2分钟； (9)苏木素染色5-10分钟； (10)自来水冲洗2分钟； (11)1%盐酸酒精分化，0.5%氨水返蓝； (12)自来水流水冲洗10分钟； (13)1%伊红染色I分钟； (14)80%酒精、95%酒精、100%酒精梯度脱水，环保透明脱蜡液2分钟，每步至少2次； (15)环保型中性快干胶封片； 对部分无法诊断的蜡块，或科研需要的细胞悬液制成的蜡块，根据诊断需求进行免疫组织化染色，免疫组织化染色步骤如下: (1)切片前先将环保透明脱蜡液放入58°C恒温干燥箱预热； (2)将切片浸入环保透明脱蜡液中进行第一次脱蜡2分钟； (3)将切片浸入环保透明脱蜡液中进行第二次脱蜡2分钟； (4)将切片浸入环保透明脱蜡液中进行第三次脱蜡2分钟； (5)无水乙醇洗去环保透明脱蜡液； (6)95%乙醇冲洗2分钟； (7)80%乙醇冲洗2分钟； (8)自来水冲洗2分钟； (9)蒸馏水I分钟； (10)抗原修复，按第一抗体选择不同的修复液及修复方式； (11)蒸馏水I分钟，至少3次； (12)3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶； (13)蒸馏水I分钟，至少2次，pH7.2的磷酸缓冲液，至少I次； (14)滴加第一抗体； (15)pH7.2的磷酸缓冲液，2分钟，至少3次； (16)滴加第二抗体； (17)pH7.2的磷酸缓冲液，2分钟，至少3次； (18)DAB显色，自来水流水冲洗10分钟， (19)苏木素浅染核后，吹风机吹干，经环保透明脱蜡液透明，中性快干胶封片。对上述技术方案的进一步改进:所述环保本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组织细胞标本石蜡包埋的制作方法，其特征在于，制作方法包括将组织细胞标本经沉淀、离心处理后，提取组织细胞标本并加入一种环保型生物合成剂，经超声波组织处理仪或医用微波炉对组织细胞标本同步进行固定、脱水、透明、浸蜡处理，石蜡包埋组织切片、染色及封片。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵洁，付海洋，
申请(专利权)人：青岛大学医学院附属医院，
类型：发明
国别省市：山东;37