一种利用细菌纤维素膜做载体固定化白腐真菌的方法技术

一种利用细菌纤维素膜做载体固定化白腐真菌的方法，由以下步骤组成：白腐真菌的分离及其孢子液的制备、细菌纤维素膜的制备、细菌纤维素膜的改性处理和固定化细胞的制备。细菌纤维素膜用环氧氯丙烷、无水乙醇和高氯酸等处理后，以得到的改性细菌纤维素膜为载体与２５％戊二醛溶液反应，经反复洗涤等处理，与白腐真菌孢子液混合，密封，４℃过夜，再反复洗涤，即得细菌纤维素膜固定化白腐真菌，经对木糖醇生产废水中有机物及色度连续３批处理试验表明，其处理效果未见明显下降，具有显著的稳定性。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用细菌纤维素膜做载体固定化白腐真菌的方法，是由如下的过程和步骤组成：　（１）白腐真菌Ｗｈｉｔｅ　ｒｏｔ　ｆｕｎｇｉ的分离及孢子液的制备　Ａ．白腐真菌的分离：取腐木２ｇ加入灭菌后的１００ｍＬ液体培养基中，置于生化培养箱中３０℃恒温培养，随时观察培养基中菌的生长状况；所述的液体培养基中各组分占液体培养基质量用量百分比分别为：ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］　０．０２％，ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ　０．００５％，ＣａＣｌ↓［２］　０．００１％，葡萄糖１％，ＮＨ↓［３］Ｃｌ　０．０２％，Ｈ↓［２］Ｏ↓［２］　０．０５％，酒石酸钠０．０２８％，琥珀酸钠０．０５４％，马铃薯提取液为液体培养基体积的０．０５％，其中马铃薯提取液为２００ｇ马铃薯在１Ｌ蒸馏水中煮沸３０分钟后，用１６层纱布过滤掉不溶物制得；１２１℃灭菌３０分钟；４８小时后，取该培养液１０ｍＬ重复进行富集培养，经３次富集培养后，取最终富集液在固定培养基平板上进行涂布培养；所述的固体培养基中各组分占固体培养基质量用量百分比分别为：葡萄糖２％，ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］　０．３％，ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ　０．１５％，维生素Ｂ１　０．０００５％，琼脂１．２％，马铃薯提取液占固体培养基体积用量百分比为８０％；１２１℃灭菌３０分钟；２４小时后，在平板上挑取白色绒形的菌种进行划线分离，待出现白色菌丝后，挑取单个菌落再划线分离，直至重复得到纯的单菌株，斜面保存，备用；　Ｂ．白腐真菌孢子液的制备：从上述步骤Ａ．得到的白腐真菌保存斜面挑取少量菌丝，划线法接种于固体培养基上，所述的固体培养基的组成与步骤Ａ中的固体培养基相同，３０℃培养５天后，白腐真菌孢子大量扩增，用无菌水轻轻洗出平板表面上的分生孢子，并在无菌条件下用１６层滤布滤除菌块，得到乳白色孢子悬浮液为白腐真菌孢子液，４℃冰箱保存备用；　（２）细菌纤维素膜的制备　Ａ．木醋杆菌Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｘｙｌｉｎｕｍ的分离：将醋醅稀释１００倍后接种于５０ｍＬ富集培养基中，富集培养基中各组分占富集培养基质量用量百分比分别为：葡萄糖５％：酵母膏０．５％；乙酸钠０．２％；ＣａＣＯ↓［３］１％；用乙酸调节ｐＨ至５．０；１２１℃下灭菌３０分钟后，加入占富集培养基体积用量百分比为２％的无水乙醇和质量用量百分比为０．５％的制霉菌素，再于２８℃温度下培养５天，液面长有乳白色胶质菌膜者为阳性；揭去富集培养基表面的凝胶膜，将此膜仔细贴在第一块分...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：于大禹，张金榜，徐富超，关晓辉，刘文超，崔长龙，沈凌宏，林娟，
申请(专利权)人：东北电力大学，
类型：发明
国别省市：22[中国|吉林]