一种米黑根毛霉来源的β‑1,3‑葡聚糖酶及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种米黑根毛霉来源的β‑1,3‑葡聚糖酶及其应用。该酶为嗜热真菌米黑根毛霉来源的内切型β‑1,3‑葡聚糖酶(RmLam81A)，特异作用于可得然多糖中的β‑1,3‑糖苷键。利用毕赤酵母进行异源表达，经高密度发酵培养，最终酶活力可达694U/mL。本发明专利技术以食品级β‑1,3‑葡聚糖(可得然多糖、昆布多糖及酵母葡聚糖等)为原料，酶解得到聚合度(DP)2‑5的β‑1,3‑葡寡糖，可溶性寡糖得率约75‑85％，水解液经渣液分离、料液浓缩和喷雾干燥得到β‑1,3‑葡寡糖。本发明专利技术所公开的β‑1,3‑葡聚糖酶具有优良的酶学性质，与已公开的化学或酶法制备β‑1,3‑葡寡糖方法相比，反应条件温和、环境友好、寡糖得率较高，在酶法制备β‑1,3‑葡寡糖中具有重要的应用价值。

A source of beta Rhizomucor miehei 1,3 glucanase and its application

【技术实现步骤摘要】
一种米黑根毛霉来源的β-1,3-葡聚糖酶及其应用
本专利技术涉及食品生物
，具体地涉及一种米黑根毛霉来源的β-1,3-葡聚糖酶及其应用。
技术介绍
β-1,3-葡聚糖酶(β-1,3-glucanase，EC3.2.1.39)又称昆布多糖酶，是一种特异性水解β-1,3-葡聚糖中的β-1,3-糖苷键的酶类。β-1,3-葡聚糖酶从糖链的内侧水解聚糖，产物为一系列不同大小的寡糖。β-1,3-葡聚糖酶分布广泛，如真菌、细菌、植物及一些低等动物和病毒，具有多种生物学功能(Ferrer,P.MicrobialCellFactories,2006,5:10)。微生物是β-1,3-葡聚糖酶的主要来源。细菌β-1,3-葡聚糖酶主要属于糖苷水解酶(glycosidehydrolase；GH)16家族，分泌的胞外β-1,3-葡聚糖酶主要用于降解其生长环境中的真菌细胞壁或植物来源的β-1,3-葡聚糖，作为其生长繁殖的能源(JBacteriol1995,177:6937–6945.)。此外，一些古生菌或线虫内也发现有内切β-1,3-葡聚糖酶的存在(BiochemJ2005,389:117–125.)。真菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种β‑1,3‑葡聚糖酶，其特征在于：所述β‑1,3‑葡聚糖酶是由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

【技术特征摘要】
1.一种β-1,3-葡聚糖酶，其特征在于：所述β-1,3-葡聚糖酶是由SEQIDNO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。2.权利要求1所述蛋白质的编码基因。3.如权利要求2所述蛋白质的编码基因，其特征在于：所述β-1,3-葡聚糖酶的编码基因是SEQIDNO：2所示的DNA分子。4.一种重组载体，其特征在于：所述重组载体是将权利要求2所述的编码基因插入毕赤酵母pPIC9K质粒的多克隆位点得到的。5.一种重组菌，其特征在于：所述重组菌是将权利要求4所述的重组载体导入毕赤酵母得到的重组毕赤酵母。6.一种制备如权利要求1所述的β-1,3-葡聚糖酶的方法，其特征在于：将权利要求5所述的重组菌进行高密度发酵培养，诱导表达目的蛋白。7.如权利要求6所述的制备β-1,3-葡聚糖酶的方法，其特征在于：所述发酵培养依次经过如下步骤：1)种子培养：将所述重组毕赤酵母菌株接种到装有100mLBMGY培养基的500mL三角瓶中，在30℃、200rpm振荡培养24-30h，得到OD600nm为3.0的种子液；2)甘油发酵阶段：将步骤1)得到的种子液接种到5L发酵罐中的2LBMGY培养基中培养，所述培养的温度为30℃、用氨水和磷酸调节...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫巧娟，游鑫，江正强，杨绍青，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11