一种生物腐熟剂的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种生物腐熟剂的制备方法，属于农业领域。本发明专利技术通过土壤中筛选植物固氮菌得到ACC脱氨酶阳性菌株，施入土壤不仅可以促进生物腐熟，同时对土壤中的氮有固定作用，直接作用于植物根部，植物促生细菌具有ACC脱氨酶活性，能够把ACC分解成氨和α－丁酮酸减少乙烯合成，从而降低植物对逆境的敏感性，提高植物抗逆能力，而且可以促进有机物污染和重金属污染土壤的植物修复。本发明专利技术解决了目前有机料腐熟剂腐熟过程中伴有恶臭气体产生且腐熟效率低的问题。

A preparation method of biological decomposing agent

The invention discloses a preparation method of a biological decomposing agent, which belongs to the field of agriculture. Through the screening of plant soil Azotobacter ACC deaminase positive strains in soil can not only promote the biological maturity, and a fixed effect on soil nitrogen in the direct effect on plant roots, plant growth promoting bacterium with ACC deaminase activity, can ACC divided into ammonia and alpha ketobutyric acid reduced ethylene synthesis thus, reduced sensitivity to abiotic stress, improve plant resistance, but also can promote the organic pollution and plant remediation of heavy metal contaminated soil. The present invention solves the problem that the odour gas is produced and the decayed efficiency is low during the process of decomposing organic maturing agent at present.

【技术实现步骤摘要】
一种生物腐熟剂的制备方法
本专利技术属于农业领域，具体涉及一种生物腐熟剂的制备方法。
技术介绍
腐熟剂是指能加速各种有机物料（包括农作物秸秆、畜禽粪便、生活垃圾及城市污泥等）分解、腐熟的微生物活体制剂。随着我国农业和加工业的高速发展，中国已经成为世界上农业有机物料产生量最大的国家，每年产生的农业有机物料以几十亿吨计，其中，每年产生畜禽粪便近40亿吨，农作物秸秆7亿吨。近年来，国内外农业废弃物资源化利用技术的研究取得了较大的发展，农业废弃物资源化利用逐渐步入科学化的新阶段。在所有利用方式中，利用微生物技术进行高温好氧堆肥是目前常用的一种有效处理有机废弃物的方法，因营养损失较小、无害化程度高、处理量大、成本较低、适于工厂化生产等诸多优点已成为畜禽粪便和农作物秸秆的首选处理方式。传统的堆肥发酵是利用原料中的土著微生物来完成有机物质生物转化过程。堆肥发酵过程主要分为升温期、高温期、降温期三个阶段，每个阶段都有其独特的微生物种群。升温期，嗜温性微生物利用可溶性和易降解性有机物作为营养和能量来源，迅速增殖，并释放出热能，使温度不断上升。高温期，嗜温性微生物受到抑制，嗜热性微生物逐渐取而代之，活跃的微生物主要是嗜热性真菌和放线菌等。随着有机物消耗或转化，温度下降，嗜温微生物又开始成为优势种群。因此，根据堆肥过程微生物种群变化特点，利用多种微生物协助处理堆肥原料是加速腐熟，提高堆肥成品品质的关键。使用有机物料腐熟剂进行腐熟，不仅对有机物料有强大腐熟作用，而且在发酵过程中还繁殖大量功能细菌并生产多种特效代谢产物（如激素、抗生素等），从而刺激作物生长发育，提高作物抗病、抗旱、抗寒能力。功能细菌进入土壤后，可固氮、解磷、解钾、增加土壤养分、改善土壤结构、提高化肥利用率。有机物料腐熟剂使用安全，可处理多种有机物料，无毒，无害，无污染。目前有机物料腐熟剂主要由能在发酵或生长过程中分泌纤维素酶和蛋白酶的真菌、细菌和放线菌等微生物复合而成，通过混合发酵或者经单一发酵过后简单混合后即为一种有机物料腐熟剂。但由于复配的微生物种类不同，其产品的特性、功能和效果差异很大。采用有机物料腐熟剂生产有机肥料的过程中常伴随着恶臭气体的产生，使人食欲不振、头昏脑胀、恶心、呕吐，且腐熟效果不理想。因此，生产出一种腐熟效果好且使用中消除异味的腐熟剂存在很大的市场需求。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题：针对目前有机料腐熟剂腐熟过程中伴有恶臭气体产生且腐熟效率低的问题，提供了一种生物腐熟剂的制备方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下所述的技术方案是：一种生物腐熟剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：（1）取土样与无菌水混合均匀，摇床振荡，得土样混合液，将土样混合液加入固氮菌液体培养基中培养，得富集固氮菌培养液，重复富集培养3次，得复培养富集固氮菌培养液，将复培养富集固氮菌培养液用质量分数为0.9%的生理盐水稀释至10-5稀释级，得稀释后固氮菌液，取稀释后固氮菌液涂布于固氮菌分离平板培养基，培养，得固氮菌菌落，重复划线培养2~3次，得纯化固氮菌菌落；（2）挑取纯化固氮菌菌落接种至固氮菌液体培养基中培养，得固氮菌培养液，将固氮菌培养液接种至DF培养基振荡培养，得培养液，将培养液接种至ADF培养基中培养，重复接种培养2~3次，得脱氨酶阳性菌培养液，离心，取沉淀，干燥，得脱氨酶阳性菌；（3）取污泥与无菌水混匀，培养，，得污泥混悬液，静置，取污泥混悬液的上清液，接种脱硫菌富集培养基中富集培养，得富集培养液，将富集培养液稀释至10-5的稀释级，得稀释后脱硫菌菌液，将稀释后脱硫菌菌液接种至脱硫菌筛选培养基培养，得脱硫菌菌落，挑取菌径最大的脱硫菌菌落划线接种至脱硫菌筛选培养基培养，重复划线培养2~3次，得纯化脱硫菌；（4）将EM菌、假阮丝酵母菌、金宝贝发酵菌、ACC脱氨酶阳性菌、纯化脱硫菌混合均匀，得混合腐熟菌剂，将混合腐熟菌剂、鸡粪、稻壳、米糠混合均匀，得生物腐熟剂。所述步骤（1）中土壤样品取自处于生长期的土豆根际土壤；固氮菌液体培养基的配方为按质量份数计，取蔗糖10~15份、K2HPO4·3H2O0.2~0.5份、NaCl0.2~0.5份、CaCO31~2份、MgSO4·7H2O0.2~0.4份、酵母膏0.5~0.8份、蒸馏水1000份，pH7.0±0.2；固氮菌分离平板培养基：向固氮菌液体培养基中加琼脂20~25份，其他组分不变。所述步骤（1）中土样与无菌水的质量比为1：9；土样混合液与固氮菌液体培养基的体积比为1：8，富集固氮菌培养液的培养条件为25~28℃、100r/min摇床振荡培养2~3天；纯化固氮菌菌落的培养条件为25~29℃培养2~3d。所述步骤（2）中DF培养基的配方为按质量份数计，取KH2PO44~6份、Na2HPO46~10份、MgSO4·7H2O0.2~0.5份、葡萄糖2~6份、葡萄糖酸钠3~5份、柠檬酸1~2份、(NH4)2SO42~4份，组分一溶液0.1~0.2份、组分二溶液0.1~0.2份、水1000份、pH7.2±0.2，其中组分一为按质量份数计，取H3BO30.01~0.03份、MnSO4·H2O0.01~0.02份、ZnSO4·7H2O0.1~0.3份、CuSO4·5H2O0.07~0.09份、MoO30.01~0.02份，水100份；组分二将FeSO4·7H2O与灭菌蒸馏水按质量比1：100混合均匀，即得；ADF培养基的配方为将分离得到纯化固氮菌按质量比1：30接种至不含(NH4)2SO4组分的灭菌DF培养基中，得ADF培养基，pH为7~7.5。所述步骤（2）中纯化固氮菌菌落与固氮菌液体培养基的质量比为1：5，培养条件为25~30℃、200r/min振荡培养24~36h；固氮菌培养液与DF培养基的体积比为1：5；培养液按体积比1：50接种至ADF培养基中在25~30℃条件下振荡培养24~48h。所述步骤（3）中脱硫菌筛选样品取自污水沉积底部的污泥；脱硫菌富集培养基的配方为按质量份数计，取蛋白胨10~12份，牛肉膏5~7份，氯化钠5~8份，水1000份，pH为7.0±0.2；脱硫菌筛选培养基的配方为按质量份数计，取KH2PO42~5份，蛋白胨15~18份，牛肉膏3~5份，Na2HPO4·12H202~5份，氯化钠3~5份，琼脂20~25份，水1000份，pH为7.0±0.2。所述步骤（3）中污泥与无菌水的质量比为1：10，培养条件为25~30℃、120r/min振荡培养3~5h；污泥混悬液上清液与脱硫菌富集培养基的质量比为1：10，培养条件为25~30℃、120r/min富集培养2~3天。所述步骤（4）中混合腐熟菌剂为EM菌、假阮丝酵母菌、金宝贝发酵菌、脱氨酶阳性菌、纯化脱硫菌按质量比5：2：1：4：4混合均匀，生物腐熟剂为混合腐熟菌剂、鸡粪、稻壳、米糠按质量比5：7：8：4混合均匀。本专利技术与其他方法相比，有益技术效果是：（1）本专利技术通过土壤中筛选植物固氮菌得到脱氨酶阳性菌株，施入土壤不仅可以促进生物腐熟，同时对土壤中的氮有固定作用，直接作用于植物根部，植物促生细菌具有脱氨酶活性，能分解成氨和α－丁酮酸减少乙烯合成，从而降低植物对逆境的敏感性，提高植物抗逆能力，而且可以促进有机物污染和重金属污染土壤的植物修本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物腐熟剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：取土样与无菌水混合均匀，摇床振荡，得土样混合液，将土样混合液加入固氮菌液体培养基中培养，得富集固氮菌培养液，重复富集培养3次，得复培养富集固氮菌培养液，将复培养富集固氮菌培养液用质量分数为0.9%的生理盐水稀释至10

【技术特征摘要】
1.一种生物腐熟剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：取土样与无菌水混合均匀，摇床振荡，得土样混合液，将土样混合液加入固氮菌液体培养基中培养，得富集固氮菌培养液，重复富集培养3次，得复培养富集固氮菌培养液，将复培养富集固氮菌培养液用质量分数为0.9%的生理盐水稀释至10-5稀释级，得稀释后固氮菌液，取稀释后固氮菌液涂布于固氮菌分离平板培养基，培养，得固氮菌菌落，重复划线培养2~3次，得纯化固氮菌菌落；挑取纯化固氮菌菌落接种至固氮菌液体培养基中培养，得固氮菌培养液，将固氮菌培养液接种至DF培养基振荡培养，得培养液，将培养液接种至ADF培养基中培养，重复接种培养2~3次，得脱氨酶阳性菌培养液，离心，取沉淀，干燥，得脱氨酶阳性菌；取污泥与无菌水混匀，培养，，得污泥混悬液，静置，取污泥混悬液的上清液，接种脱硫菌富集培养基中富集培养，得富集培养液，将富集培养液稀释至10-5的稀释级，得稀释后脱硫菌菌液，将稀释后脱硫菌菌液接种至脱硫菌筛选培养基培养，得脱硫菌菌落，挑取菌径最大的脱硫菌菌落划线接种至脱硫菌筛选培养基培养，重复划线培养2~3次，得纯化脱硫菌；将EM菌、假阮丝酵母菌、金宝贝发酵菌、ACC脱氨酶阳性菌、纯化脱硫菌混合均匀，得混合腐熟菌剂，将混合腐熟菌剂、鸡粪、稻壳、米糠混合均匀，得生物腐熟剂。2.根据权利要求1所述的生物腐熟剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中土壤样品取自处于生长期的土豆根际土壤；固氮菌液体培养基的配方为按质量份数计，取蔗糖10~15份、K2HPO4·3H2O0.2~0.5份、NaCl0.2~0.5份、CaCO31~2份、MgSO4·7H2O0.2~0.4份、酵母膏0.5~0.8份、蒸馏水1000份，pH7.0±0.2；固氮菌分离平板培养基：向固氮菌液体培养基中加琼脂20~25份，其他组分不变。3.根据权利要求1所述的生物腐熟剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中土样与无菌水的质量比为1：9；土样混合液与固氮菌液体培养基的体积比为1：8，富集固氮菌培养液的培养条件为25~28℃、100r/min摇床振荡培养2~3天；纯化固氮菌菌落的培养条件为25~29℃培养2~3d。4.根据权利要求1所述的生物腐熟剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中DF培养基的配方为按质量份数计，取KH2PO44~6份、...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄淑枝，李璐，刘沁，
申请(专利权)人：常州文诺纺织品有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32