一种钙结合/肌动蛋白交联蛋白及编码它的多核苷酸序列制造技术

本发明专利技术公开了一种新的分离的肌动蛋白交联蛋白基因的多核苷酸序列及其编码的多肽，以及制备这种多肽的方法。并且公开了通过检测该基因核酸水平的突变及多肽水平的改变，检测与该基因的核酸及其编码的多肽异常有关的疾病的诊断方法，也公开了利用该基因的多核苷酸序列和多肽治疗与该基因异常有关的疾病的用途和用于上述治疗的药物组合物。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开了一种新的人肌动蛋白交联蛋白(以下简称为CBACP)及编码它的多核苷酸序列，还涉及所述蛋白质和多核苷酸在诊断、预防和治疗与该蛋白质表达异常相关疾病中的应用。钙在各种细胞活动，包括基因调控、DNA合成、脑神经递质的释放、细胞周期调控、肌肉收缩、蛋白分泌、有丝分裂等过程中起重要作用。钙的调节涉及到一组同源的钙结合蛋白，这些蛋白都共有一个EF手钙结合结构域。EF手钙结合结构域是由一个十二个氨基酸组成的环及其两边各十二个氨基酸组成的α螺旋构成，且这二个螺旋几乎形成90度角。钙与这个环结合时形成五边形的双锥体构象。结构域中第1，3，5，7，9，12位残基参与结合功能。第12位保守残基谷氨酸(Glu)或天冬氨酸(Asp)提供二个氧原子和钙配位。(Kawasaki H.等人(1995)Protein Prof.2305-490)，(Moncrief N.D.等人(1990)J.Mol.Evol，30522-562)。肌动蛋白丝是细胞骨架的主要组成部份，它在细胞内通过肌动蛋白交联蛋白交联成束状和网状结构，为细胞器的固定提供了脚手架结构，同时也是一些蛋白质合成和代谢的场所。所有的肌动蛋白交联蛋白都至少有两个肌动蛋白结合点，一般还含有寡聚化功能的结构域，钙调节功能的结构域，膜结合功能的结构域等。(Matsudaira，P.(1991)生物化学科学趋势(Trends Biochem.Sci).16，87-92)。如肌动蛋白交联蛋白超家族中的血影蛋白家族含有一保守的肌动蛋白结合结构域，并有血影蛋白重复区域，钙调节结构域(EF手钙结合结构域)等。研究表明肌动蛋白结合结构域功能同源，在肌动蛋白上的结合位点相同。(Matsudaira，P.(1994)细胞生物学杂志(J.Cell Biol.)126，285-287)肌动蛋白交联蛋白超家族蛋白与许多遗传疾病相关。肌营养不良蛋白缺陷导致杜兴式和贝克型肌营养不良症(Monaco，A.P.等人(1988)Adv.Hum.Genet.17，61-89)。血影蛋白缺陷导致遗传性溶血性贫血(Palek，J.等人(1993)Semin.Hematol.30.249-283)。因此，为治疗目的研究和开发人肌动蛋白交联蛋白有重要意义。一种新的钙结合/肌动蛋白交联蛋白(以下简称CBACP)编码基因的分离为确定该蛋白在健康和疾病状态下作用的提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。可用于其相关疾病的诊断和治疗。本专利技术的目的就是提供一种新的人肌动蛋白交联蛋白CBACP及编码它的多核苷酸。本专利技术的多肽含有钙结合蛋白家族的特征性基元，即EF手钙结合基元，因而本专利技术的CBACP是该家族中的一个新成员。本专利技术涉及一种分离的多肽，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少80％相同性的多核苷酸。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制该肌动蛋白交联蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与该肌动蛋白交联蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激动剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗肿瘤、不育症、恢复或增强神经功能、免疫系统疾病、高血压、肾脏衰竭、肌肉萎缩、营养不良、神经细胞信号传导紊乱、病毒和细菌感染或胞外过量肌动蛋白的存在所引起疾病的药物等方面的用途。本专利技术还涉及本专利技术多肽的拮抗剂或反义多核苷酸在制备用于治疗病毒和细菌感染如痘病毒感染或胞外过量肌动蛋白的存在所引起疾病的药物中的用途。本专利技术上述的和其它的方面对于本领域的技术人员来说，从本文以下的详细描述看应该是很清楚的。附图说明图1为用GCG软件包中的gap程序将人肌动蛋白交联蛋白CBACP的氨基酸序列(上排，以Query表示)与鼠微管-肌动蛋白交联因子(下排，以Sbjct表示)的氨基酸序列作同源性比较的结果。本说明书和权利要求书中所用下列术语除非特别说明具有如下含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与CBACP结合时，一种可引起该蛋白质改变从而调节该蛋白质活性的分子。激动剂可以包括蛋白质、核酸、碳水化合物或任何其它可结合CBACP的分子。“拮抗剂”或“抑制物”是指当与CBACP结合时，一种可封闭或调节CBACP的生物学活性或免疫学活性的分子。拮抗剂和抑制物可以包括蛋白质、核酸、碳水化合物或任何其它可结合CBACP的分子。“调节”是指CBACP的功能发生改变，包括蛋白质活性的升高或降低、结合特性的改变及CBACP的任何其它生物学性质、功能或免疫性质的改变。″基本上纯″是指基本上不合天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化CBACP。基本上纯的CBACP在非还原性聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。CBACP多肽的纯度可用氨基酸序列分析。“互补的”或“互补”是指在允许的盐浓度和温度条件下通过碱基配对的多核苷酸天然结合。例如，序列“C-T-G-A”可与互补的序列“G-A-C-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽，它包含具有ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２氨基酸序列的多肽、或其保守性变体或其活性片段或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海生元基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]