一种双功能化核酸适体介导的A549肿瘤细胞检测方法技术
A bifunctional aptamer mediated A549 tumor cell detection method
The invention relates to a bifunctional aptamer detection method of A549 tumor cells mediated, the preparation method of aptamer - inhibition of chain complexes, preparation of cell suspension and preparation of catalytic reaction solution, hairpin self-assembly acquisition of fluorescence intensity, 6 steps to establish the standard curve equation and the calculation of cell concentration. The detection method can achieve rapid detection of tumor cells in homogeneous system, and has the advantages of high sensitivity and specificity, and can be used for rapid screening.
【技术实现步骤摘要】
一种双功能化核酸适体介导的A549肿瘤细胞检测方法
本专利技术涉及光学检测领域，具体涉及通过检测荧光信号变化来测试或分析肿瘤细胞。
技术介绍
传统的肿瘤细胞检测方法主要包括免疫组化法、流式细胞术、荧光原位杂交、聚合酶链式反应和二代测序方法等，这些方法不同程度地解决了肿瘤细胞检测的相关问题，但目前仍缺乏一种适用于临床实验室的简便、快速、高灵敏、高特异的检测方法。流式细胞术是一种经典的细胞计数方法，它在流体系统中，通过测定库尔特电阻、荧光、光散射和光吸收实现细胞的快速定量及分选。然而该方法需要昂贵的设备，对操作及结果分析的人员专业性要求极高而限制其在临床推广。近年来备受关注的用于循环肿瘤细胞检测的平台，是目前唯一获得美国食品药品监督管理局批准用于临床的循环肿瘤细胞检测平台。该平台利用抗体标记磁珠对细胞进行富集，并将细胞固定后用荧光染料和荧光抗体标记细胞后进行细胞鉴定。该技术能较好的保护细胞形态结构，利于观察肿瘤细胞形态，为肿瘤细胞检测提供了新思路，却仍存在标志物种类局限、假阴性率高和设备精密昂贵等不足。因此，为适应临床诊断治疗，尤其是个体化医疗的需求，发展一种简便、快...
【技术保护点】
一种双功能化核酸适体介导的A549肿瘤细胞检测方法，该方法包括以下步骤：(1)用TE缓冲液分别将双功能化适体和抑制链溶解并稀释至2μmolL
【技术特征摘要】
1.一种双功能化核酸适体介导的A549肿瘤细胞检测方法，该方法包括以下步骤：(1)用TE缓冲液分别将双功能化适体和抑制链溶解并稀释至2μmolL-1和4μmolL-1，然后将两者等体积比例混合，于95℃反应5min，缓慢降至室温，得到适体—抑制链复合物；其中，所述的双功能化适体的核酸序列为：5'-TGAGGTAGTAGGTTGTGTGGTTGCAGTTGATCCTTTGGATACCCTGG-3'(SEQIDNO.1)；所述的抑制链序列为：5'-TCAACTGCAACCACACAACCT-3'(SEQIDNO.2)；(2)取待测细胞悬液，加入步骤(1)所得到的适体-抑制链复合物10μL，用结合缓冲液定溶至1mL，置于杂交仪中，37℃中速杂交1h后，离心，弃去上清，沉淀物用15μL无菌PBS缓冲液重悬，得细胞悬液；其中，所述结合缓冲液pH为7.5，由Tris-HCl、NaCl、MgCl2和去离子水组成，其中所述Tris-HCl、NaCl、MgCl2的终浓度依次为：10mmolL-1、500mmolL-1、1mmolL-1；(3)取步骤(2)所得到的细胞悬液，加入浓度为5μmolL-1的H1-F2μL、浓度为5μmolL-1的H22μL和TNaK缓冲液1μL，置于PCR仪在等温模式...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑磊，刘菊梅，张晔，王前，李文源，罗世华，司徒博，李博，
申请(专利权)人：南方医科大学南方医院，
类型：发明
国别省市：广东,44
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