用于脑血管疾病的治疗肽制造技术

本发明专利技术涉及通过使用从牛痘病毒致炎兔皮提取物分离的肽治疗或改善受试者的脑血管疾病的方法。本发明专利技术还涉及包含与SEQ ID NO:1具有至少70%同一性的氨基酸序列的肽，或其变异体、突变体、衍生物或片段。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于脑血管疾病的治疗肽专利
本专利技术涉及脑血管疾病的治疗。具体地，其涉及通过使用从牛痘病毒致炎兔皮提取物分离的肽而治疗或改善受试者的脑血管疾病的方法。专利技术背景脑血管疾病为局部脑血液供应异常引起的神经功能损伤。在大多数国家，脑血管疾病为所有死亡原因的前三位，可导致成年人脑损伤。脑血管疾病为危及中年和老年人的健康的主要原因，并且为大多数国家中年和老年人死亡或残疾的主要原因。中风是急性脑血管疾病的一种，其为全世界人口死亡的第三个主要原因，在各种疾病中诱发最高的残疾率。脑血管疾病可严重影响老年人的生活质量，给患者家庭和社会带来巨大负担。其在年轻人群中也有上升趋势。脑血管疾病主要分为两种类型，出血性和缺血性，其中后者占60-70%，为最常见的脑血管疾病类型。研究缺血性脑血管疾病的病理生理机制并寻找起神经保护功能的药物非常重要。自二十世纪八十年代以来，对脑缺血病理生理机制的研究一直是神经科学领域的热点之一，至今提出了脑缺血的能量代谢、酸中毒、过氧化损伤、兴奋性氨基酸诱导的毒性损伤、钙超载等学说，其中后两者在缺血性神经元损伤和死亡中起重要作用。根据缺血性脑血管病的病理生理基础，目前临床上用于治疗脑缺血的药物主要包括钙离子拮抗剂(尼莫地平)、氧自由基清除剂(VitE、SOD)、神经营养因子(神经生长因子、神经营养因子)、兴奋性氨基酸拮抗剂、抗氧化剂和改善迟发性神经元损伤的药物。这些药物通过不同的作用机制发挥作用，但治疗作用不确定或特异性不强或伴有严重不良反应，因此尚不能满足临床需要。存在许多可用于改善脑循环、代谢和功能的市售可得的药物，例如吡拉西坦(piracetam)、氟桂利嗪(flunarizine)、卡兰(calan)、银杏提取物。尽管它们都具有某些特征，但其对脑血管疾病的治疗效果不确定。用于治疗缺血性脑血管疾病的新型药物的研究和开发在药学和药理学领域变得愈来愈重要。牛痘病毒致炎兔皮提取物以商品名恩再适(analgecine)市售可得，其由VanworldPharmaceutical(Rugao)Co.Ltd制造。先前的实验证据显示接种牛痘病毒诱导的炎症性兔皮的粗提取物可对镇痛产生生理学效果。然而，促成该效果的恩再适的活性成分尚未有报道。因此，需要深入了解哪些组分涉及这一效果。专利技术概述在一个方面，本专利技术提供用于治疗或改善受试者的脑血管疾病的方法，其中所述方法包括给予受试者有效量的一种或多种包含与DEAQETAVSSH(SEQIDNO:1)具有至少70%同一性的氨基酸序列的肽或其变异体、突变体、衍生物或片段。在另一个方面，本专利技术提供一种或多种包含与SEQIDNO:1具有至少70%同一性的氨基酸序列的肽或其变异体、突变体、衍生物或片段在制造用于治疗受试者的脑血管疾病的药物中的用途。在一个实施方案中，如本文所述的脑血管疾病为导致神经系统损伤伴随功能缺陷的脑血管疾病。在一个具体的实施方案中，如本文所述的脑血管疾病选自：缺血性脑损伤或出血性脑损伤。在一个更具体的实施方案中，所述脑血管疾病为中风。表述“与SEQIDNO:1具有至少70%同一性”意在指与SEQIDNO:1具有至少75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%或更多同一性的氨基酸序列。在进一步的实施方案中，所述肽包含SEQIDNO:1和/或DEAQETAVSSHEQD(SEQIDNO:2)。在一个更具体的实施方案中，所述肽由SEQIDNO:1和/或SEQIDNO:2组成。在多个实施方案中，所述肽包含至少一个氨基酸添加、缺失和/或置换，优选1-5个，优选1-3个氨基酸添加、缺失和/或置换。在另一个实施方案中，所述氨基酸添加、缺失和/或置换位于C-端和/或N-端。在又一个实施方案中，所述疾病通过保护神经细胞而治疗或改善。在一个具体的实施方案中，所述受试者为人。在另一个方面，本专利技术涉及编码本专利技术肽的多核苷酸，包含这样的多核苷酸的载体，以及包含这样的多核苷酸或这样的载体的宿主细胞。在另一个方面，提供包含有效量的本专利技术肽、如本文所述的多核苷酸、载体或宿主细胞和药学上可接受的载体的药物组合物。本专利技术还涉及用作药物的如本文所述的肽、多核苷酸、载体、宿主细胞或药物组合物。具体地，本专利技术涉及包含SEQIDNO:1和SEQIDNO:2或由SEQIDNO:1和SEQIDNO:2组成的肽组合物，包含这样的组合物的药物组合，及其使用方法。附图简述图1为用于从接种牛痘病毒诱导的发炎兔皮的粗提取物筛选多肽/小肽-水平镇痛剂的程序的图示。图2说明功能肽的鉴定。示出了双价离子m/z772.745的MS/MS光谱。作为例子显示的一个氨基酸序列DEAQETAVSSHEQD(SEQIDNO:2)从y-和b-碎片离子系列的MS差异确定并与兔α1-抗蛋白酶F的残基1-14匹配。图3说明肽-5在多个pH值下的稳定性。图4显示样品的MALDI-TOFMS光谱。图5显示肽5的CD(圆二色性)。图6说明用或不用AGC0.25、0.5或1U/ml处理，暴露于H2O224h的PC12细胞的细胞存活。**与无处理相比P<0.01。数据表示为来自3个实验的平均值±SD。图7说明用或不用ACG1U/ml或肽1(10µg/ml)、肽5(10µg/ml)或肽1和5组合(每种10µg/ml)处理，暴露于H2O224h的PC12细胞的细胞存活。**与单独使用肽1或5相比P<0.05。数据表示为来自3个实验的平均值±SD。图8说明AGC对L-谷氨酸处理的PC12细胞的细胞存活的作用。图9比较AGC、肽1和肽5之间对L-谷氨酸处理的PC12细胞的细胞存活的作用。图10说明用或不用AGC0.25、0.5或1U/ml处理，PC12细胞在低血糖、缺氧或二者组合的条件下持续24h的细胞存活。**与无处理相比P<0.01。数据表示为来自3个实验的平均值±SD。图11说明用或不用AGC1U/ml或肽1(SEQIDNO:1)(10µg/ml)、肽5(SEQIDNO:2)(10µg/ml)或肽1和5组合(每种10µg/ml)处理，PC12细胞在低血糖、缺氧或二者组合的条件下持续24h的细胞存活。**与单独使用肽1或5相比P<0.01。数据表示为来自4个实验的平均值±SD。图12显示注射肽1和5(左侧和右侧大鼠)使得15和30分钟内在脑中检测到高荧光强度(以黄色显示)，而注射对照肽没有(中)。数据代表3个实验。图13显示注射肽1和5(左侧和右侧大鼠)使得30和60分钟内在脊髓中检测到高荧光强度(以黄色显示)，而注射对照肽没有(中)。数据代表3个实验。专利技术详述本专利技术人令人惊讶地发现从牛痘病毒致炎兔皮提取物分离的2种肽在体外和/或体内，在缺氧、低血糖条件或二者组合下，当暴露于H2O2或L-谷氨酸时明显保持神经细胞存活力。更令人惊讶地，肽1和肽5对抑制缺氧、低血糖条件或二者组合、H2O2和L-谷氨酸诱导的神经元细胞(PC12)的细胞毒性显示协同作用，具有与使用AGC(例如，1U/ml)所观察到的相似的效能。我们的数据因此成功鉴定了在AGC中作为活性成分的两种短肽，其可至少部分是AGC在缺血性中风中的神经保护作用的原因。H2O2是重要的活性氧组分，与神经系统疾病例如脑缺血、创伤、本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于治疗或改善受试者的脑血管疾病的方法，其中所述方法包括给予受试者有效量的一种或多种包含与DEAQETAVSSH (SEQ ID NO: 1)具有至少70%同一性的氨基酸序列的肽或其变异体、突变体、衍生物或片段。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于治疗或改善受试者的脑血管疾病的方法，其中所述方法包括给予受试者有效量的一种或多种包含与DEAQETAVSSH(SEQIDNO:1)具有至少70%同一性的氨基酸序列的肽或其变异体、突变体、衍生物或片段。2.权利要求1的方法，其中所述氨基酸序列与SEQIDNO:1具有至少75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%或更多同一性。3.权利要求1或2的方法，其中所述肽包含SEQIDNO:1和/或DEAQETAVSSHEQD(SEQIDNO:2)。4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述肽基本上由SEQIDNO:1和/或SEQIDNO:2组成或由SEQIDNO:1和/或SEQIDNO:2组成。5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述肽包含至少一个氨基酸添加、缺失和/或置换。6.权利要求5的方法，其中所述氨基酸添加、缺失和/或置换位于C-端和/或N-端。7.权利要求5或6的方法，其中所述肽具有1-5个，优选1-3个氨基酸添加、缺失和/或置换。8.前述权利要求中任一项的方法，其中所述脑血管疾病为导致神经系统损伤伴随功能缺陷的脑血管疾病。9.前述权利要求中任一项的方法，其中所述脑血管疾病选自：缺血性脑损伤或出血性脑损伤。10.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述脑血管疾病为中风。11.前述权利要求中任一项的方法，其中所述脑血管疾病通过保护神经细胞而治疗或改善。12.前述权利要求中任一项...

【专利技术属性】
技术研发人员：林成龙，
申请(专利权)人：首创生物药品发展有限公司，
类型：发明
国别省市：维尔京群岛,VG