一种用于制备HIV-1病毒载量测定外参照的质粒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种用于制备ＨＩＶ－１病毒量测定用外参照的质粒，建立ＨＩＶ－１感染者和艾滋病人血浆中ＨＩＶ病毒量定量测定用外参照的方法以及该外参照在ＨＩＶ病毒量测定中的应用。其制备方法为：利用ＨＩＶ外围引物ＨＦ／ＨＲ从ＨＩＶ－１↓［ⅢＢ］病毒的ＲＮＡ经反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）得到的ＨＩＶ－１ｃＤＮＡ片断，克隆到载体以构建含有ＨＩＶ－１ｃＤＮＡ片断的ｐＺｈｃＴ－５５０重组质粒，转化至大肠杆菌感受态细胞，经ＰＣＲ鉴定，筛选出阳性克隆子，获得大量重组质粒ｐＺｈｃＴ－５５０。体外转录重组质粒ｐＺｈｃＴ－５５０，获得供ＨＩＶ病毒载量定量测定使用的ＲＮＡ外参照，然后在荧光定量ＰＣＲ仪上通过ＨＩＶ　　ＬＵＸ↑［＊］引物的配合使用，建立了ＨＩＶ感染者和艾滋病患者血浆中ＨＩＶ病毒载量的定量测定方法。本发明专利技术操作简单，价格便宜，特异性好，灵敏度高，并有较好的可重复性，将为艾滋病的科学研究与防治提供有力工具。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种用于制备ＨＩＶ－１病毒测定的ＲＮＡ外参照的重组质粒载体，其包含用引物Ｆ／Ｒ以ＨＩＶ－１基因组ＲＮＡ为模板反转录扩增而获得的核酸片段，其中所述引物Ｆ／Ｒ序列如下：Ｆ：５’－ＣＧＡＣＴＣＡＴＧＧＡＧＣＡＴＣＣＴＧＣＣ ＴＡＡＧ－３’，Ｒ：５’－ＡＣＡＧＣＧＧＴＣＡＣＴＴＧＡＣＧＡＧＴＡＡＴＣＡＣＴＡＧＣ－３’。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：任若通，贲昆龙，李卫云，陈韵，陈震球，陶剑，
申请(专利权)人：李卫云，李燕琴，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]