一种细鳞鲑三倍体苗种的育苗方法技术

本发明专利技术涉及一种细鳞鲑三倍体苗种的育苗方法，包括受精后15‑20min，将受精卵放入17‑20℃水浴中过渡1min；然后放入26℃水浴中热处理10‑20min；再置于6‑10℃孵化水温的容器中进行孵化。采用本发明专利技术方法30天左右得到细鳞鲑三倍体仔鱼。孵化期间受精卵发眼率为80％以上，孵化率达到90％以上，得到的仔鱼经流式细胞仪检测，三倍体率达到100％。本发明专利技术提供的细鳞鲑三倍体苗种制备方法，缓解了由于亲鱼繁殖后死亡率高、幼鱼生长速度慢、抗病力低、稚鱼开口驯化成活率低等问题，具有成本低，易操作等优点，具有较好的市场价值。

A method for raising triploid seedling of fine scale salmon

The invention relates to a method for breeding of triploid salmon fry, including 15 20min after fertilization, the zygote transition of 1min into 17 20 DEG C water bath; then put in 26 DEG C water bath heat treatment 10 20min; hatch container and placed 6 10 DEG C temperature in the incubator. The trout trout triploid larvae were obtained by the method of the present invention for about 30 days. During the incubation period, the rate of fertilized eggs was more than 80%, the hatching rate was over 90%, and the rate of triploid was 100%. Lenok seeds were the preparation method of the invention, alleviate the broodstock reproduction after high mortality, juvenile growth is slow, low resistance, low survival rate of juvenile open domestication, has the advantages of low cost, easy to operate, and has good market value.

【技术实现步骤摘要】
一种细鳞鲑三倍体苗种的育苗方法
本专利技术涉及一种细鳞鲑三倍体苗种的育苗方法。
技术介绍
鲑鳟鱼是世界目前主要养殖的鱼类之一，由于其自身的品质和对生活环境的特殊要求，决定了它绿色、环保营养食品的性质，因此颇受消费者的青睐。据FAO统计资料，近年来全球鲑鳟鱼养殖年产量超过200万t，排在鲤科鱼类和罗非鱼之后，是世界第三大主要养殖鱼类(纪锋等.水产学杂志，2012，25(3)：63-68)。鲑鳟鱼是我国目前主要的冷水性养殖鱼类，随着我国鲑鳟鱼养殖的迅速发展，基础理论研究相对滞后、亲鱼种质退化导致苗种质量退化、生产效益下降等问题逐渐突出，从而制约了鲑鳟鱼养殖业的可持续发展(孙大江等.水产学杂志,2010，23(2):56-63)。我国目前仍需要大量进口鲑鳟鱼，进口量超过同期国内鲑鳟鱼年度养殖产量2倍以上(农业部渔业渔政管理局.中国渔业统计年鉴.2016)。利用现代生物技术，培育生长迅速、个体大、肉质好、抗病能力强的种苗，成为我国鲑鳟鱼养殖业的持续、稳定、健康发展的必由之路。鱼类染色体组操作是遗传育种工作的重点研究领域之一。在多倍体鱼中，三倍体鱼因染色体组成不平衡，性腺不能发育成熟，避免了性腺发育时期生长停滞和鱼肉质量下降等不利影响，对控制过度繁殖、增加生长速率、延长成熟鱼的寿命以及提高养殖产量和鱼肉质量具有重要的意义。自上世纪80年代以来，国内外三倍体鱼的人工诱导工作取得了长足进展，已获得60多种三倍体鱼。我国三倍体的异育银鲫、湘云鲫已进入实用化生产阶段，在鲑鳟鱼方面尚不能达到规模化生产程度，年度进口鲑鳟鱼发眼卵约3000万粒以上，占据虹鳟全雌三倍体发眼卵市场的几乎全部份额(农业部渔业渔政管理局.中国渔业统计年鉴.2016)。国产鲑科鱼类的三倍体育种生产还是空白。细鳞鲑(Brachymystaxlenok)是我国名贵的鲑科冷水性鱼类，常见个体1kg左右，具有重要的经济价值，由于幼鱼生长速度较慢，繁殖后亲鱼死亡率较高等因素影响了规模化生产。三倍体鱼可有效解决上述问题。温度休克法是成本最低、技术最易掌握的鱼类三倍体育种方法。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供一种细鳞鲑三倍体苗种的育苗方法。本专利技术采用如下技术方案：一种细鳞鲑三倍体苗种的育苗方法，包括：受精后15-20min，将受精卵放入17-20℃(优选17℃)水浴中过渡1min；然后放入26℃水浴中热处理10-20min；再置于6-10℃孵化水温的容器中进行孵化。进一步地，上述细鳞鲑三倍体苗种的育苗方法，包括：受精后15-20min，将受精卵放入17℃水浴中过渡1min；然后放入26℃水浴中热处理20min；再置于6-10℃孵化水温的容器中进行孵化。较佳地，上述细鳞鲑三倍体苗种的育苗方法，包括：受精后20min，将受精卵放入17℃水浴中过渡1min；然后放入26℃水浴中热处理20min；再置于6-10℃孵化水温的容器中进行孵化。进一步地，将性腺发育成熟的亲鱼经注射催产剂催产，采用干法受精，获得受精卵。所述催产剂可用促黄体素释放激素类似物和马来酸地欧酮混合使用。进一步地，受精卵孵化可采用虹鳟常规孵化方法。进一步地，将热处理后的受精卵置于6-10℃孵化水温的容器中2-4h内，检出死卵，再进入正常孵化。进一步地，受精卵发眼前用孵化桶孵化，发眼后移入到平列槽。进一步地，受精卵孵化期控制水温8-10℃，溶解氧＞5mg/L；和/或，整个孵化期积温需要260-280度·日。具体地，上述细鳞鲑三倍体苗种的育苗方法，包括如下步骤：1)采卵与受精：将性腺发育成熟的亲鱼经注射催产剂催产，干法受精获得受精卵；亲鱼年龄：雌亲鱼4+龄以上，雄亲鱼3+龄以上；最小规格：雄亲鱼500g以上，雌亲鱼750g以上；催产剂为促黄体素释放激素类似物和马来酸地欧酮；受精时雌雄亲鱼尾数配比接近1：1；采卵水温6-8℃；精卵用羽毛搅拌15-20s使精卵混合均匀，加入少量清水缓慢搅拌1min，再用清水冲洗2-3遍，洗去过多精液、卵皮、血块，加入清水放置，待卵吸水膨胀；2)热休克诱导：受精后15-20min，将受精卵放入不锈钢漏网(例如直径15cm)中，先在17-20℃水浴锅中过渡1min；然后再放入26℃的电子恒温水槽中，轻轻上下晃动漏网，使受精卵尽快与周围水温相一致；热处理10-20min后将受精卵直接放入6-8℃孵化水温的容器中，2-4h内检出死卵，进入正常孵化；3)受精卵孵化：采用虹鳟常规孵化方法；受精卵发眼前用孵化桶孵化，发眼后移入到平列槽；孵化期控制水温8-10℃，溶解氧＞5mg/L；整个孵化期积温需要260-280度·日。采用本专利技术方法，一般30天左右即可得到细鳞鲑三倍体仔鱼。孵化期间受精卵发眼率为80％以上，孵化率达到90％以上，得到的仔鱼经流式细胞仪检测，三倍体率达到100％。如无特殊说明，本专利技术倍性检测采用PactecCyFlowCube8型流式细胞仪检测鱼苗血液DNA相对含量的方法确定三倍体率。鱼苗培育至5cm左右，试验组每组随机采样25-30尾，断尾抽血，每次检测3尾二倍体鱼苗作为对照。有益效果：1)本专利技术方法所用雌亲鱼4+龄以上，雄亲鱼3+龄以上，经流水刺激、药物催产，采卵水温6℃以上，催产率可达90％以上。2)掌握采卵时机，防止卵过熟，雌雄亲鱼尾数配比接近1：1，受精率可达95％以上。3)受精卵热休克处理前，在17-20℃水中过渡1min，可减少温差过大对卵的刺激，2-4h死亡率控制在10％以下。受精后15-20min，热处理10-20min，三倍体率可达100％。4)孵化期用蓄水箱调节水温在8-10℃，避免水温浮动过大，定期用药物消毒，控制水霉菌滋生，孵化率可达90％以上。实验结果表明，采用本专利技术方法，受精卵2-4h死亡率4.71-8.31％，发眼率78.18-92.62％，孵化率82.59-90.74％，三倍体率68.56-100％。本专利技术提供的细鳞鲑三倍体苗种制备方法，缓解了由于亲鱼繁殖后死亡率高、幼鱼生长速度慢、抗病力低、稚鱼开口驯化成活率低等问题，具有成本低，易操作等优点，具有较好的市场价值。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。以下所用水浴锅和电子恒温水槽控制温度范围5-99℃，误差≦0.5℃，灵敏度0.1℃。催产剂为宁波激素总厂生产的促黄体素释放激素类似物(LHRH-A2)和马来酸地欧酮(DOM)。实施例1一种细鳞鲑三倍体苗种的制备方法，具体包括如下步骤：1)采卵与受精：挑选4+龄以上，体质健壮，发育良好的亲鱼，雄亲鱼规格500g以上，雌亲鱼规格750g以上。雌鱼使用催产剂剂量为每千克鱼2.5ugLHRH-A2+2.5mgDOM，雄鱼减半，雌雄配比为1：1，干法受精。采卵水温6-8℃。精卵用羽毛搅拌15-20s使精卵混合均匀，加入少量清水缓慢搅拌1min，再用清水冲洗2-3遍，洗去过多精液、卵皮、血块，加入清水放置，待卵吸水膨胀。2)热休克诱导：受精后15-20min，将受精卵放入直径15cm的不锈钢漏网中，先在水温17℃的水浴锅中过渡1min，再放入24-28本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细鳞鲑三倍体苗种的育苗方法，其特征在于，包括：受精后15‑20min，将受精卵放入17‑20℃水浴中过渡1min；然后放入26℃水浴中热处理10‑20min；再置于6‑10℃孵化水温的容器中进行孵化。

【技术特征摘要】
1.一种细鳞鲑三倍体苗种的育苗方法，其特征在于，包括：受精后15-20min，将受精卵放入17-20℃水浴中过渡1min；然后放入26℃水浴中热处理10-20min；再置于6-10℃孵化水温的容器中进行孵化。2.根据权利要求1所述的育苗方法，其特征在于，包括：受精后15-20min，将受精卵放入17℃水浴中过渡1min；然后放入26℃水浴中热处理20min；再置于6-10℃孵化水温的容器中进行孵化。3.根据权利要求1所述的育苗方法，其特征在于，受精后20min，将受精卵放入17℃水浴中过渡1min；然后放入26℃水浴中热处理20min；再置于6-10℃孵化水温的容器中进行孵化。4.根据权利要求1-3任一项所述的育苗方法，其特征在于，受精卵孵化期控制水温8-10℃，溶解氧＞5mg/L；和/或，整个孵化期积温需要260-280度·日。5.根据权利要求1-4任一项所述的育苗方法，其特征在于，所用雌亲鱼4+龄以上，雄亲鱼3+龄以上；和/或，所用雄亲鱼500g以上，雌亲鱼750g以上。6.根据权利要求1-5任一项所述的育苗方法，其特征在于，将性腺发育成熟的亲鱼经注射催产剂催产，采用干法受精，获得受精卵；优选地，所述催产剂为促黄体素释放激素类似物和马来酸地欧酮...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈春山，魏凯，郑伟，胡红霞，张保莉，时晓，韩姝伊，董颖，郭明磊，马龙，
申请(专利权)人：北京市水生野生动植物救护中心，
类型：发明
国别省市：北京,11