公开了几个玫瑰红黄马杜拉放线菌突变株，其特征在于，它们能通过发酵而产生ＵＫ－６１，６８９，ＵＫ－６１，６８９是一种以前只靠ＵＫ－５８，８５２的选择性酸水解才能得到的酸性多环醚类抗球虫抗生素；还公开了具有ＣＣＴＣＣ Ｎｏ：Ｍ８８０８８、ＣＣＴＣＣ Ｎｏ：Ｍ８８０８７、ＣＣＴＣＣ Ｎｏ：Ｍ８８０８６和ＣＣＴＣＣ Ｎｏ：Ｍ８８０８９的鉴定特征的玫瑰红黄马杜拉放线菌。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生产抗生素UK-61，689的微生物学方法，抗生素UK-61，689是一种以前只是靠化学方法才能得到的酸性多环醚抗球虫抗生素。更具体地说，本专利技术涉及通过培养具有玫瑰红黄马杜拉放线菌F.D.27684(Actinomadura roseorufa F.D.27684，CCTCC NoM88088，88年9月5日保藏;ATCC53，666)的鉴定特征的玫瑰红黄马杜拉放线菌(Actinomadura roseorufa)来发酵生产UK-61，689的方法，涉及具有玫瑰红黄马杜拉放线菌F.D.28474、F.D.28499和F.D.28454(Actinomadura roseorufa F.D.28474，F.D.28499和F.D.28454，1988年9月5日保藏在CCTCC，编号分别为M88087、M88086和M88089;ATCC保藏号分别为ATCC53，665、ATCC53，664和ATCC53，674)鉴定特征的玫瑰红黄马杜拉放线菌突变株。1986年1月22日分布的EP-0169011描述了生产多环醚抗生素UK-58，852的方法，该抗生素是通过在深层通气条件下用液体营养培养基培养玫瑰红黄马杜拉放线菌新亚种(Actinomadura roseorufa Huang sp.nov.)ATCC39，697而产生的。UK-61，689是一种单配糖基酸性多环醚，其结构如式(Ⅰ)所示， 1986年8月1日提交的英国专利申请第8618844号描述了其制备方法，即对式(Ⅱ)所示的二配糖基多环醚UK-58，852进行选择性酸水解。 其中所描述的方法包括UK-58，852的酸水解，水解最好在室温下以乙腈/水作溶剂用1∶1当量的对甲苯磺酸和UK-58，852钠盐进行。1986年1月22日分布的欧洲申请169011描述了UK-58，852的制备方法。UK-58，852本身就是一种有效的抗生素，更是有效的抗球虫剂。它是由玫瑰红黄马杜拉放线菌新亚种ATCC39，697在液体营养培养基中深层通气发酵所产生。在发酵生产UK-58，852的同时还产生两个相关的微量组份，每个组份在控制球虫病方面均是有效的抗生素。这二个微量组份分别定名为CP-70，228和CP-70，828，它们具有上述式(Ⅱ)所示的结构，前者R是H，R1是CH3;后者R和R1均为甲基。本专利技术涉及制备UK-61，689的微生物学方法，它包括在液体营养培养基中，最好在深层通气条件下培养玫瑰红黄马杜拉放线菌CCTCC NoM88088的突变株。UK-61，689是一种有价值的酸性多环醚抗生素和强抗球虫剂。本专利技术特别涉及得自玫瑰红黄马杜拉放线菌CCTCC NoM88088的突变株CCTCC NoM88089和M88087，其特征在于它们能在产生UK-61，689的同时产生UK-58，852;涉及CCTCC NoM88087的一个突变株，其特征在于它能在产生UK-61，689时基本上不产生UK-58，852，所述突变株具有玫瑰红黄马杜拉放线菌CCTCC NoM88086的鉴定特征。产生UK-61，689和UK-58，852的微生物是从玫瑰红黄马杜拉放线菌的一个称为FD-27684(CCTCC NoM88088)的新菌株突变而得到的，该新菌株是从采自日本镰本山江村(YamaeVillage，Kamamoto，Japan)的土壤样品中分离的。用N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(NTG)作为诱变剂，然后考察经处理微生物的单菌落的UK-61，689的产生。一般的步骤包括在28℃下，在深层好气条件下在液体营养培养基中振荡培养CCTCC NoM88088。生长阶段培养基的选择并不重要。培养基中含有西瑞糖(10.0克)、玉米淀粉(5.0克)、玉米浆(5.0克)、N Z Amine YTT(5.0克)(酪蛋白酶解物的注册商标，Humko Sheffield化学公司)、氯化钴(0.002克)，将该培养基悬浮在1升水中，用氢氧化钠调PH至7.0，分装(800毫升)到一个费氏烧瓶中。高压灭菌后，用斜面生长悬浮液或冻干的营养菌丝体接入瓶中，而后在约200转/分的摇床上28℃下振荡培养8天。然后取出50毫升样品，菌丝体用特氟隆杵组织研磨器匀浆，随后再进行超声波断裂。离心断裂的菌丝体，洗去培养液，再悬浮在装有50毫升新鲜培养液的300毫升三角瓶中，在32℃下摇瓶培养2小时，然后再离心细胞，用无菌水洗去培养液，再悬浮于50毫升PH9.0的三(羟甲基)氨基甲烷-苹果酸缓冲液中。各份悬浮液再在34℃下，在250-300转/分的旋转水浴摇床上，用浓度为每毫升750-1500微克的诱变剂NTG处理1小时。离心处理后的细胞，用无菌水洗去诱变剂，并悬浮于装有新鲜生长培养基的三角瓶中，32℃下在200转/分的柜式摇床上振荡培养。3天后，对生长良好的菌丝体作匀浆和超声处理。对每份超声过的菌悬液进行逐级稀释并涂在固体营养培养基上，平皿在28℃下进行培养，直到菌落形成单位的大小足以转接到斜面上为止。一种适合于平皿和斜面的培养基是N-Z Amine Type A(Humko Sheffield化学公司)减至1.0克/升的172号ATCC培养基。使接种后的斜面在28℃生长10-14天，而后就可以用作试验了。该试验是接种300毫升三角瓶中装有的25毫升合适培养基(这样一种培养基含有西端糖，45.0克;黄豆粉，10.0克;玉米浆，15.0克;MnSO4·H2O，0.1克;MgSO4·7H2O，0.1克;氯化钴，0.002克;碳酸钙，3.0克;水1升，调培养基的PH至7.0)。121℃高压灭菌30分钟后，用斜面生长悬浮液分别接入三角瓶中，在New Brunswick摇床上，28℃振荡培养7天。为检测突变株培养物FD-28454(CCTCC NoM88089)，使用所收集的全培养液经甲基异丁酮抽提，薄层层析(硅胶)展层后用香草醛试剂喷层析板，在100℃下加热5分钟后进行考察。展层系统为9份氯仿与1份甲醇，在该系统中，UK-61，689的Rf值约为0.3，UK-58，852的Rf值约为0.65。这样获得的突变株培养物产生UK-61，689和UK-58，852的混合物。UK61，689与UK58，852的比例变化在某种程度上似乎取决于发酵条件。所得突变株的形态和培养特征基本如本文所述的玫瑰红黄马杜拉放线菌CCTCC NoM88088。该突变株的不同特征在于它能产生UK-61，689和UK-58，852的混合物，其中UK-61，689是主要产物。突变株的培养和UK-61，689抗生素的分离可在与以前发酵生产聚醚类抗生素所用的相似条件下进行。参见例如美国专利4，361，649。最好采取在24-36℃温度下，用液体营养培养基在深层搅拌通气条件下进行培养。培养用营养培养基包括可同化的碳源，如糖、淀粉和甘油;有机氮源，如酪蛋白、酶解酪蛋白、黄豆饼、棉籽饼、花生饼、麸皮、豆粉、肉粉、鱼粉。生长物质的原料如可溶性谷物、鱼粉、棉籽粉、酵母浸汁，还有无机盐，如氯化钠、碳酸钙，以及微量元素如铁、镁、铜、锌、钴和锰也可以加以利用而产生有益的结果。发酵中如果泡沫过多，可向发酵培养本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备抗球虫剂组合物的方法，该方法包括回收由发酵玫瑰红黄马杜拉放线菌ＣＣＴＣＣ Ｍ８８０８７、Ｍ８８０８６或Ｍ８８０８９所产生的菌丝体所带的ＵＫ－６１，６８９，所述发酵是在深层通气发酵条件下，在含有可同化的碳源、氮源和无机盐的液体营养培养基中，发酵至在全发酵液中积累大量所述化合物。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：爱德华约瑟夫泰南，
申请(专利权)人：美国辉瑞有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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