一种同时测定扎冲十三味丸中乌头碱及其降解产物的方法技术

本发明专利技术涉及一种提供一种同时测定扎冲十三味丸中乌头碱及其降解产物的方法。取本品适量，研细，取20g，精密称定，加氨试液15ml润湿，加乙醚‑氯仿混合溶液(体积比1∶1)30ml，摇匀，放置24小时，滤过，取滤液上大孔吸附树脂柱，分别用水溶液和氨水洗脱，弃去洗脱液，然后用乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至干，用二氯甲烷溶解，即得。采用HPLC‑MS方法测定，能够检测出乌头碱，苯甲酰乌头原碱，乌头原碱和焦乌头碱，很好的控制扎冲十三味丸的质量。

A method for the simultaneous determination of aconitine and its degradation products in Zhchong thirteen pill

The present invention relates to a method for the simultaneous determination of aconitine and its degradation products in Zhchong thirteen flavor pills. Take this amount of goods, fine grinding, 20g, precision said, adding ammonia solution with ether, chloroform 15ml wetting, mixed solution (the volume ratio of 1 to 1 30ml), and for 24 hours, take on the filtrate filtration, macroporous adsorption resin column, water solution and ammonia water elution, discarding the eluent. And then eluted with ethanol aqueous solution, collecting the eluent, the eluent is concentrated, dissolved by dichloromethane, i.e.. Using HPLC MS determination method, can detect aconitine, benzoylaconine, aconine and pyraconitine, good quality control of the Zha Chong pill of thirteen ingredients.

【技术实现步骤摘要】
一种同时测定扎冲十三味丸中乌头碱及其降解产物的方法
本专利技术属于蒙药化学成分分析领域，具体涉及一种HPLC-MS法同时测定扎冲十三味丸中乌头碱及其降解产物的方法。
技术介绍
扎冲十三味丸是蒙医临床最常用的传统方剂之一，又名嘎日迪十三扎冲十三味丸，它主要由诃子、石菖蒲、木香、沉香、制草乌等十三种中药成分组成，在临床中该药主要用于半身不遂、左右瘫痪、口歪眼斜、四肢麻木、风湿、关节疼痛等。临床研究表明，扎冲十三味丸对血肿有明显的促进吸收、改善脑血液循环、清除氧自由基、抑制血小板聚集、保护心肌缺血和增加脑血流量等作用。诃子为处方中的君药，具有涩肠止泻，敛肺止咳，降火利咽等功效(包那钦，阿古拉，王兰英.扎冲十三味丸对心脑血管疾病的治疗效果[J].中国民族医药杂志，2005，11(6)：9-10.)。没食子酸为扎冲十三味丸中主要有效成分之一，没食子酸(Gallicacid，GA)，是一种广泛存在于水果和中草药等植物中的天然酚酸类化合物，它具有较强的抗氧化性，具有抗菌、抗病毒和抗肿瘤作用(付煜荣，张万明，陈桂敏.景天三七中没食子酸和总酚酸含量测定[J].中药，2006，28(7)：1016-1018.)。草乌是蒙药常用的药材，并在蒙医很多经典著作中都有记载。据统计，在《蒙医金匮》、《甘露四部》、《中国医学百科全书·蒙医学》、《蒙医方剂学》、《内蒙古蒙成药标准》所记载的蒙药方剂中含草乌方剂达到11.27％。蒙医学认为，草乌具有杀“粘”，止痛，燥“协日乌素”的功效。但草乌属于乌头类中药材，含有乌头碱型生物碱。现代药理学实验表明，乌头碱型生物碱具有抗炎作用、镇痛作用、调节免疫作用、扩张冠状血管的作用等。但是，乌头碱具有强毒性，口服3～4mg即可致人死亡。通过水解炮制，可以使极毒的乌头碱C8位上的乙酰基水解，失去一分子醋酸，得到相应的苯甲酰乌头原碱，其毒性可降低至双酯型乌头碱的1/50～1/100，若再进一步将C14位上的苯甲酰基水解，失去一分子的苯甲酸，得到的亲水性氨基醇类乌头原碱，其毒性仅为双酯型乌头碱的1/2000～1/4000，这种水解炮制方法可以大大降低乌头碱的毒性。乌头碱的水解过程复杂，水解途径不明确，水解产物众多。魏巍等将乌头碱加热水解，分离得到了新的水解产物焦乌头碱(魏巍，乌头碱水解产物的研究)。谭鹏等发现了乌头原碱进一步的水解产物-脱水乌头原碱。现有技术中仅仅报道了草乌药材中的乌头碱检测方法以及可能的降解产物，其方法并不能用于扎冲十三味丸中乌头碱及其类似物的检测(有干扰)，也无法预测扎冲十三味丸剂中含有哪些乌头碱类似物。为了保证扎冲十三味丸的安全性，有必要专利技术一种同时检测该制剂中乌头碱及其降解产物的方法。
技术实现思路
本专利技术的技术方案在于，提供一种同时测定扎冲十三味丸中乌头碱及其降解产物的方法。(1)供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取20g，精密称定，加氨试液15ml润湿，加乙醚-氯仿混合溶液(体积比1∶1)30ml，摇匀，放置24小时，滤过，取滤液上大孔吸附树脂柱，分别用水溶液和氨水洗脱，弃去洗脱液，然后用乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至干，用二氯甲烷溶解，即得。所述的大孔吸附树脂柱型号为AB-8或D101，优选AB-8型，所述的水溶液和氨水洗脱体积为2-3倍柱体积，氨水pH值为9-10，所述乙醇水溶液体积为3-4倍柱体积，所述乙醇水溶液中乙醇浓度为80％(v/v)，pH为4-5。(2)色谱条件：色谱柱：AgilentZobaxStableBondC18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-氨水溶液(B，pH为8.0)，梯度洗脱，0～20min：20％→60％A；20～40min：60％→80％A；40～60min：80％→60％A；60～80min：60％→20％A；流速：0.5mL/min，柱温：室温；检测波长：240nm，进样量10μL。(3)质谱条件：雾化气和干燥气均为氮气，采集模式为正离子，毛细管压力为3500ev，雾化温度为350℃，干燥气为10.0L/min，雾化压力为5.8KPa，质谱扫描范围为m/z为200～800。本专利技术的优点是：现有技术公开HPLC-MS检测草乌中乌头碱的方法无法直接应用于检测扎冲十三味丸中的乌头碱，原因是该丸剂中还还有其他组分，造成了很大的干扰，为此，我们进行了多方面的改进：①调整了样品的预处理方法，采用有机溶剂提取，并经大孔吸附树脂除去一些干扰的杂质，研发发现，采用弱极性的AB-8型号的大孔树脂优于非极性的D101型号，采用80％浓度的乙醇溶液具有更好的洗脱效果，优于95％乙醇溶液。②采用二氯甲烷溶解的样品具有更好的稳定性，优于甲醇及氯仿，乌头碱在甲醇及氯仿中更容易降解，不利于准确判断样品中的乌头碱含量。③调整了高效液相色谱的梯度条件，排除了阴性样品的干扰，且保留时间适中，出峰时间短，峰型良好。检测波长由230nm调整为240nm，减小了基线波动造成的干扰。④针对乌头碱水解产生的成分，采用诊断离子化碎片以及通过质谱得到的数据进行分析。该方法有助于分析过程中成分的归属及分类，根据总结的诊断碎片及一定分子量的中性丢失，可以初步判断某一成分所属类别，有利于发现某类成分中的未知成分。⑤本专利技术通过对乌头碱水解化合物的综合系统分析，借助数据后处理技术，建立快速分类与鉴定的方法，对扎冲十三味丸剂中的乌头碱及乌头碱的水解产物进行了鉴定，鉴别出了苯甲酰乌头原碱、乌头原碱和焦乌头碱，确保了产品的质量可控。具体实施方式对比例1参照药典制草乌的提取方法：取本品适量，研细，取20g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氨试液15ml，精密加入异丙醇-乙酸乙酯(1∶1)50ml，摇匀，称定重量，超声处理(功率300W，频率40kHz；水温在25℃以下)30min，放冷，再称定重量，用异丙醇-乙酸乙酯(1∶1)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，40℃以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入异丙醇-乙酸乙酯(1∶1)混合溶液3ml溶解，滤过，取续滤液，即得。色谱柱：AgilentZobaxStableBondC18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-氨水溶液(B，pH为8.0)，梯度洗脱，0～20min：20％→60％A；20～40min：60％→80％A；40～60min：80％→60％A；60～80min：60％→20％A；流速：0.5mL/min，柱温：室温；检测波长：240nm，进样量10μL。质谱条件：雾化气和干燥气均为氮气，采集模式为正离子，毛细管压力为3500ev，雾化温度为350℃，干燥气为10.0L/min，雾化压力为5.8KPa，质谱扫描范围为m/z为200～800。该样品直接进样导致干扰严重，无法判断乌头碱及其类似物。对比例2在对比例1的基础上将样品过大孔树脂纯化样品将对比例所得样品上大孔吸附树脂D101，分别用2倍柱体积的水溶液和pH9的氨水洗脱，弃去洗脱液，然后用3倍柱体积的80％乙醇水溶液(pH4.0，用0.1MHCl调)洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至干，用二氯甲烷溶解，即得。色谱柱：AgilentZobaxStableBondC18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-氨水溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时测定扎冲十三味丸中乌头碱及其降解产物的方法：(1)供试品溶液的制备：取本品适量，研细，精密称定，加氨试液润湿，加乙醚‑氯仿混合溶液，摇匀，放置24小时，滤过，取滤液上大孔吸附树脂柱，分别用水溶液和氨水洗脱，弃去洗脱液，然后用乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至干，用二氯甲烷溶解，即得；(2)色谱条件：色谱柱：C18柱；流动相：乙腈(A)‑氨水溶液(B，pH为8.0)，梯度洗脱条件为0～20min：20％→60％A；20～40min：60％→80％A；40～60min：80％→60％A；60～80min：60％→20％A；流速：0.5mL/min，柱温：室温；检测波长：240nm，进样量10μL；(3)质谱条件：雾化气和干燥气均为氮气，采集模式为正离子，毛细管压力为3500ev，雾化温度为350℃，干燥气为10.0L/min，雾化压力为5.8KPa，质谱扫描范围为m/z为200～800。

【技术特征摘要】
1.一种同时测定扎冲十三味丸中乌头碱及其降解产物的方法：(1)供试品溶液的制备：取本品适量，研细，精密称定，加氨试液润湿，加乙醚-氯仿混合溶液，摇匀，放置24小时，滤过，取滤液上大孔吸附树脂柱，分别用水溶液和氨水洗脱，弃去洗脱液，然后用乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至干，用二氯甲烷溶解，即得；(2)色谱条件：色谱柱：C18柱；流动相：乙腈(A)-氨水溶液(B，pH为8.0)，梯度洗脱条件为0～20min：20％→60％A；20～40min：60％→80％A；40～60min：80％→60％A；60～80min：60％→20％A；流速：0.5mL/min，柱温：室温；检测波长：240nm，进样量10μL；(3)质谱条件：雾...

【专利技术属性】
技术研发人员：佘宜寰，上官同强，齐平，宋华先，韩风雨，于秀玲，孔新颖，
申请(专利权)人：赤峰陆尔草中蒙药科技有限公司，内蒙古天奇中蒙制药股份有限公司，内蒙古博奥蒙中药工程研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15