一种珊瑚拟青霉菌种及其培育方法、应用技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，具体涉及一种珊瑚拟青霉菌种及其培育方法、应用，该菌株的保藏编号为CGMCC 14129，本发明专利技术通过固体培养及液体培养后，筛选出的菌株具有旺盛的菌丝体生长能力，富含丰富的蛋白质、醌茜素、无机盐及多种多糖体，在保健和医药行业具有重要的作用，为肿瘤和抑郁症患者带来新的福音；本发明专利技术培养的菌株耐盐碱性提高。

A species of Penicillium coralline and its cultivation methods and Application

The invention belongs to the technical field of microorganism, in particular to a coral Paecilomyces strain and its cultivation method, application, the preservation number of the strain was 14129 CGMCC, the invention through solid culture and liquid culture, the screened strains have strong growth ability of mycelium, protein, Quinalizarin, inorganic salts and various polysaccharides rich in body, plays an important role in the health and medical industry, lead to new treatments for cancer and depression; the cultivation of salt tolerant strains increased.

【技术实现步骤摘要】
一种珊瑚拟青霉菌种及其培育方法、应用
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种珊瑚拟青霉菌种及其培育方法、应用。
技术介绍
珊瑚拟青霉最早于1887年被Solms-Laubach和Reink发现，广泛的在印度尼西亚等热带地区的柿子上发现。在台湾收集到的pesudocordycepsseminicola自然生长的成熟子座上发现了子囊孢子。PenicilliopsisclavariaeformisAP结晶纯化得到的代谢产物penicilliopsin，是一种橘黄色的色素物质，分离提取得到醌茜素(skyrin(dediemodin(8,8’)）或大黄素(emodin）。Skyrin和emodin有抗抑郁或者抗肿瘤活性。近年来，具有抗抑郁和抗肿瘤作用的先导化合物一直是国内、外药物工作者寻找的热点。而最理想的有效成分来源途径是通过微生物发酵培养大规模生产低成本原料。现有技术中，我国大陆地区尚未发现珊瑚拟青霉菌种。本专利技术首次在中国大陆地区发现了珊瑚拟青霉新菌株。
技术实现思路
本专利技术提供了一种新的珊瑚拟青霉菌种。本专利技术还提供了上述珊瑚拟青霉菌种的培育方法。本专利技术为了实现上述目的所采用的技术方案为：本专利技术提供了一种珊瑚拟青霉菌株，其保藏编号为CGMCC14129。本专利技术还提供了一种珊瑚拟青霉菌种的培育方法，包括以下步骤：（1）制作母种：将第二年不能正常发芽的君迁子种子用75%酒精消毒2-3次，再切成小块放置于消毒好的PDA培养皿中，然后置于25℃培养箱中恒温暗培养7d，直至长出黄绿色菌丝即得生产母种，再用试管培养基斜面保存；（2）固体培养：将斜面保存的珊瑚拟青霉菌株，取小块接在新鲜的燕麦固体斜面培养基上，然后置25℃的恒温培养箱中培养7d，将该菌种放入－4℃的冰箱内冷冻保存待用；（3）液体培养：从燕麦固体培养基上挑选棒状菌丝接种与种子培养液中，置25℃控温摇床和150r·min-1的转速下培养3d，备用。进一步的，所述综合PDA斜面是由以下重量本分比的原料组成：马铃薯20%、葡萄糖2%、琼脂2%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.15%，其余为水。进一步的，所述燕麦斜面培养基是由燕麦40g、琼脂6g、葡萄糖20g、蔗糖10g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾（KH2PO4）1g、硫酸镁（MgSO4）0.5g、0.2g枸缘酸铵、25g橘汁及水组成。进一步的，所述燕麦斜面培养基采用以下方法制备而成：称取重量份燕麦煮沸30min，过滤，取其滤液按比例加入琼脂，待琼脂完全溶解，再加入葡萄糖、蔗糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁、枸缘酸铵及橘汁，加水至1000mL后灭菌，温度降至室温时倒入试管中制备成为斜面。进一步的，所述种子培养液是由以下重量百分比的原料组成：蔗糖3%、葡萄糖3%、酵母膏2%、蛋白胨1%、MgSO40.05%、KH2PO40.1%、琼脂2%、余量为蒸馏水，PH值5.0--5.5。本专利技术还提供了一种培育的珊瑚拟青霉在抗肝癌和鼻咽癌或抗抑郁症药物中的应用。专利技术人在山东进行水生、耐盐中药资源普查时发现的一种拟青霉类的真菌，经过人工培养和分子鉴定为PenicilliopsisclavariaeformisAP，即“珊瑚拟青霉”PenicilliopsisclavariaeformisAP.是penicilliopsispesudocordyceps的无性型，Penicilliopsispesudocordyceps的全型是pesudocordycepsseminicola。本专利技术的有益效果为：（1）本专利技术通过固体培养及液体培养后，筛选出的菌株具有旺盛的菌丝体生长能力，富含丰富的蛋白质、醌茜素、无机盐及多种多糖体，在保健和医药行业具有重要的作用；（2）本专利技术培养的菌株耐盐碱性提高；（3）珊瑚拟霉菌菌丝体中多糖具有显著地还原力和清除自由基的能力，能够显著提高抗氧化酶活性。菌种保藏信息保藏时间：2017年6月1日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCCNo.14129，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101分类命名：Penicilliopsisclavariaeformis。附图说明图1为实施例1中产孢结构的光学显微镜图。图2为产孢结构脱落的孢子及正常孢子形态结构的光学显微镜图。图3为实施例1中光学显微镜下的菌丝结构图。图4为实施例1中菌丝的扫描电镜图。图5为分生孢子的扫描电镜图。图6为培育的菌丝体。图7为不同碳源对珊瑚拟青霉发酵液3天后的PH值变化图。具体实施方式下面通过具体的实施例对本专利技术进行详细说明，但这些例举性实施方式的用途和目的仅用来例举本专利技术，并非对本专利技术的实际保护范围构成任何形式的任何限定，更非将本专利技术的保护范围局限于此。材料与方法1.1材料与试剂实验室所用的珊瑚拟青霉（PenicilliopsisclavariaeformisAP）菌株采集于君迁子（DiospyroslotusL）种子，该种子从济南佛慧山摘取。硫酸亚铁、硝酸钠、甘油、二甲亚砜、石油醚、乙酸乙酯、95%乙醇、正丁醇、甲醇、磷酸二氢钾、苯酚均购自天津广成公司1.2仪器OBY-S80-SE1智能生化培养箱常州欧邦电子公司SW-CJ-1G型单人净化工作台苏州净化设备公司实施例1一种珊瑚拟青霉菌种的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制作母种：将第二年不能正常发芽的君迁子种子用75%酒精消毒2-3次，再切成小块放置于消毒好的PDA培养皿中，然后置于25℃培养箱中恒温暗培养7d，直至长出黄绿色菌丝即得生产母种，再用试管培养基斜面保存；所述综合PDA斜面是由以下重量本分比的原料组成：马铃薯20%、葡萄糖2%、琼脂2%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.15%，其余为水；（2）固体培养：将燕麦斜面保存的珊瑚拟青霉菌株，取小块接在新鲜的燕麦固体斜面培养基上，然后置25℃的恒温培养箱中培养7d，将该菌种放入－4℃的冰箱内冷冻保存待用；所述斜面培养基制备方法为：称取燕麦40g煮沸30min，过滤，取其滤液按比例加入琼脂棒6g，使琼脂完全溶解，再加入葡萄糖20g、蔗糖10g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾（KH2PO4）1g、硫酸镁（MgSO4）0.5g、枸缘酸铵0.2g、橘汁25g，加水至1000mL后灭菌，温度降至室温时倒入试管中制备成为斜面；（3）液体培养：从燕麦固体培养基上挑选棒状菌丝接种与种子培养液中，置25℃控温摇床和150r·min-1的转速下培养3d，备用。本专利技术中接种量均按本领域的常规接种量进行接种即可。该实施例中中，产孢结构由菌柄、小枝、梗基组成，菌柄黄褐色，圆柱形，光滑，分支或不分支，5.0-6.0um；每个菌柄有2-3个小枝，橄榄绿色，短棒状或筒状6-15um，每个小枝上有3-5个梗基，棒状，光滑，顶部有微小的孢子，5-14um；每个梗基上有5-10个瓶梗，紧密，淡黄色，长筒状，3-15um。分生孢子由上到下产生，淡黄色到橄榄绿色，卵圆形（4.32*7.50um）到长椭圆形（3.27*7.70um），光滑或稍粗糙，如图1和图2所示；菌丝透明或半透明，光滑，直径4-7um，有扫帚状，对称，有明显的分隔，紧密的分生孢子梗，分生孢子梗光滑，产孢结构帚状二轮生或者多轮生，孢子本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种珊瑚拟青霉菌株，其特征在于，其保藏编号为CGMCC 14129。

【技术特征摘要】
1.一种珊瑚拟青霉菌株，其特征在于，其保藏编号为CGMCC14129。2.一种如权利要求1所述的珊瑚拟青霉菌种的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制作母种：将第二年不能正常发芽的君迁子种子用75%酒精消毒2-3次，再切成小块放置于消毒好的PDA培养皿中，然后置于25℃培养箱中恒温暗培养7d，直至长出黄绿色菌丝即得生产母种，再用试管培养基斜面保存；（2）固体培养：将斜面保存的珊瑚拟青霉菌株，取小块接在新鲜的燕麦固体斜面培养基上，然后置25℃的恒温培养箱中培养7d，将该菌种放入－4℃的冰箱内冷冻保存待用；（3）液体培养：从燕麦固体培养基上挑选棒状菌丝接种与种子培养液中，置25℃控温摇床和150r·min-1的转速下培养3d，备用。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述综合PDA斜面是由以下重量本分比的原料组成：马铃薯20%、葡萄糖2%、琼脂2%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.15%，其余为水。4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈文华，徐凌川，
申请(专利权)人：山东中医药大学，
类型：发明
国别省市：山东,37