新的细菌植酸酶及其生产方法技术

本发明专利技术涉及新的细菌植酸酶，以及有关的生产方法。更具体地说，本发明专利技术涉及从酸孢菌（Ａｃｉｄｏｃｅｌｌａ）属的细菌获得的新植酸酶，以及编码所述植酸酶的多核苷酸。本发明专利技术还涉及含有所述多核苷酸的载体，以及在其组织中表达所述植酸酶的转化的宿主生物。本发明专利技术进一步涉及含有至少一种植酸酶活性的新细菌提取物。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细菌来源的新植酸酶，以及有关的生产方法。本专利技术更具体地涉及衍生自酸孢菌(Acidocella)属细菌的新植酸酶，以及编码这些植酸酶的多核苷酸。本专利技术还涉及含有这些多核苷酸的载体，以及在其组织内表达所述植酸酶的转化的宿主生物。本专利技术还涉及包含至少一种植酸酶活性的新细菌提取物。具体而言，本专利技术的细菌提取物和植酸酶特别适合用于动物营养物的饲料组合物。该适合性与它们的特性有关，具体的是，在与制备所述组合物的条件以及在动物的消化系统中遇到的条件相对应的温度和pH条件下它们的活性。磷是所有生物的生存所必需的元素。具体地说，对于家畜的饲养者确保他们的动物摄取足够量的磷以使它们得到最佳生长和发育是至关重要的。大多数家畜饲喂以植物为基础的饲料组合物。这些植物含有大量的磷酸盐，它们将这些磷酸盐以储藏化合物—植酸的形式贮存在它们的组织中。按平均值，植酸含有50-70％存在于植物中的磷酸盐。植酸自然流动，其所含有的磷酸盐在大多数家畜中释放，特别是反刍动物。然而，植酸不能被单胃的动物所代谢，例如猪和家禽。因此，在这些动物中，包含在其摄入食物中的植酸随粪便排除，饲养者不得不用无机磷酸盐补充所述的摄入量，以使动物摄取足够量的磷酸盐。这一策略造成饲养者额外的花费并产生来自排放到环境中的非-同化植酸的污染。在密集的饲养区域更增加了这种污染。还已知植酸是包含于摄取的食物中的重要营养元素的螯合剂，例如，镁、钙、锌或铁。这一特性导致食物摄取的营养质量下降，给予植酸抗营养剂的特性。为了对与单胃的动物缺乏植酸的同化作用有关的各种缺点作出反应，设想将一种酶——植酸酶引入这些家畜摄取的食物中。植酸酶水解植酸，释放肌醇和无机磷酸盐。植酸酶，和编码这些植酸酶的基因已从很多生物中分离得到。植酸酶主要是从真菌中分离得到(Howson和Davis，1983，Enzyme Microb.Technol.5，377-382；Wyss等，1999，Appl.Environ.Microbiol.，65(2)，359-366)。在产生植酸酶的真菌中，将涉及曲霉属(Aspergillus)，具体是无花果曲霉(A.ficuum)(Ullah和Gibson，1987，Preparative Biochemistry17(1)，63-91；Ullah和Dischinger，1993，Biochem.Biophys.Res.Commun.，192(2)，747-753)，土曲霉(A.terreus)(Mitchell等，1997，Microbiology，143(部分1)，245-252)，黑曲霉(A.niger)(Dvorakova等，1997，FoliaMicrobiol(Praha)，42(4)，349-352)，烟熏曲霉(A.fumigatus)(Pasamontes等，1997，Appl.Environ.Microbiol，63(5)，1696-1700)，在青霉属Penicillium中，具体是乳酶青霉(P.caseicolum)，在菌丝霉属(Myceliophthora)中，具体是嗜热菌丝霉(M.thermophila)(Mitchell等，1997，Microbiology，143(部分1)，245-252)，在蓝霉属(Talaromyces)中，具体是嗜热蓝霉(T.thermophilus)，在脉孢菌属(Neurospora)中，具体是粗糙脉孢菌(N.crassa)和好食脉孢菌(N.sitophila)，在茶毒菌属(Thermomyces)中，具体是绒状荷毒菌(T.lanuginosus)(Berka等，1998，Appl.Environ.Microbiol.，64(11)，4423-4427)，或者在红曲霉属(Monascus)中，具体是安卡细曲霉(M.anka)。还在细菌中发现植酸酶。通过实施例，将涉及芽胞杆菌属(Bacillus)的细菌，具体是枯草杆菌(B.subtilis)(Powar和Jagannathan，1982，J.Bacteriol.151(3)，102-1108；Shimizu，1992，Biosci.Biotech.Biochem.56(8)，1266-1269；Keruvo等，1998，Appl.Environ.Microbiol.，64(6)，2079-2085)，假单胞菌属(Pseudomonas)(Cosgrove，1970，Austral.J.Biol.Sci.23，1207-1220)，埃希氏菌属(Escherichia)，具体是大肠杆菌(Golovan等，2000，Can.J.Microbiol.46，59-71)，肠杆菌属(Enterobacter)(Yoon等，1996，Enzyme and Microbiol.Technol.；18，449-454)，或链霉菌属(Streptomyces)。还分离了酵母植酸酶(Dvorakova，1998，Folia Microbiol.43(4)，323-338)，例如许旺酵母(Schwaniiomyces occidentalis)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。最后，在植物中发现植酸酶，具体是在大豆中(Ullah和Gibson，1988，Arch.Biochem.Biophys，260(2)，514-20)，在玉米中(Maugenest等，1997，Biochem J.，322(部分2)，511-7)；Maugenest等，1999，Plant Mol.Biol.，39(3)，503-14)，或在拟南芥菜属(Arabidopsis)(Mullaney和Ullah，1998，Biochem.Biophys.Res.Commun.，251(1)，252-5)。可以表征植酸酶的特性包括植酸的米氏常数(Km)，活性的最适pH和最适温度，以及在给定的pH和温度下该活性的稳定性。也可使用有关植酸酶结构的数据，例如分子量(MW)，等电点(pI)或肽序列。由于可以将它们用于动物营养物中，植酸酶必须具有与用于这种营养物的饲料成分进行的加工不矛盾的特性。具体的是，必须保持使用的植酸酶的活性，如果可能，在制备这些饲料的过程温度和pH的条件下植酸酶的活性必须是最佳的，并且存在于动物消化道中的植酸酶吸收这些饲料的营养成分。这些限制引导人们主要去寻找具有活性的植酸酶，该活性耐受高温条件，例如在制备饲料组合物的过程中使用的温度条件，并且它还耐受酸性pH条件，例如家畜消化道中存在的pH条件。为了满足这些标准，人们在生物中寻找植酸酶，具体的是微生物，它们在符合这些标准的温度和pH条件的环境中发育。该策略使之可以分离耐受高温的植酸酶，例如，描述于专利申请WO 97/35016或EP 0 684 313中的那些植酸酶，以及具有低Km的植酸酶，例如，描述于专利申请EP 0 960 934的那些植酸酶。为了赋予其优越的特性，另一个策略是通过定点诱变人工改变已知植酸酶的序列。这一策略具体描述于专利申请WO 99/48380，EP0 897 985和EP 0897 010。只鉴别了几种在低的最适pH下具有活性的植酸酶。这种植酸酶具体鉴别于真菌中，例如描述于专利本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种编码植酸酶的分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸选自：（ａ）一种编码由序列标识ＳＥＱＩＤＮＯ：２描述的植酸酶的分离的多核苷酸，（ｂ）一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸与如（ａ）所述的多核苷酸杂交（ｃ）一 种与如（ａ）所述多核苷酸同源的分离的多核苷酸（ｄ）如（ａ）、（ｂ）或（ｃ）所述多核苷酸的片段。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：G拉沃特，
申请(专利权)人：埃迪塞欧法国联合股份有限公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]