一种神经干细胞的无血清冻存液制造技术

本发明专利技术提供一种人神经干细胞的冻存液，属于干细胞培养技术领域，是适合临床应用的干细胞冻存液的组合物，采用多种成分对冻存条件进行优化，其体积百分比为含有人神经干细胞的无血清培养基65%‑75%、中药天麻来源的单体化合物溶液3‑5.5%、二甲基亚砜9‑12%、腺苷3‑5.5%、以及人神经干细胞来源的外泌体溶液2.5‑5%和人神经干细胞来源的短肽和多肽类化合物溶液2.5‑5%。人神经干细胞在上述冻存液中冻存后复苏率达到85%以上。冻存液中不含胎牛血清，防止了外源性不明成分和病原性污染，有效保证干细胞治疗产品的质量稳定与安全，以及标准化生产，为用于临床治疗奠定了基础。

A serum-free cryopreservation fluid of neural stem cells

The invention provides a human neural stem cells cryopreserved stem cell culture, belonging to the technical field, is suitable for the clinical application of stem cell freezing liquid composition, using a variety of ingredients on the freezing conditions are optimized, the monomer compound solution containing the volume percentage of human neural stem cells in serum free culture medium 65% 75%, Tianma from 3 5.5%, two dimethyl sulfoxide 9 12%, 5.5%, and 3 adenosine human neural stem cells derived exosomes solution 2.5 5% and human neural stem cell derived peptides and peptide compounds solution 2.5 5%. The resuscitation rate of human neural stem cells in the frozen storage liquid was over 85%. The cryopreservation solution does not contain fetal bovine serum, which prevents exogenous unknown components and pathogenic pollution, effectively guarantees the quality, stability and safety of stem cell therapy products, and standardized production, which lays the foundation for clinical treatment.

【技术实现步骤摘要】
一种神经干细胞的无血清冻存液
本专利技术涉及干细胞培养
，具体地说是一种神经干细胞的无血清冻存液。
技术介绍
神经干细胞是指来源胚胎和成体脑、脊髓等神经组织中分离培养的一种干细胞，是具有分裂潜能和自我更新能力的一类母细胞，能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞，可提供大量神经组织细胞的干细胞。因此培养神经干细胞旨在获得足够数量的具有增殖及分化潜能的神经干细胞，以进行中枢神经系统功能损害的治疗和攻击肿瘤的生长的治疗等。目前大量临床前实验研究表明神经干细胞对于脑中风和创伤性脑损伤有一定的治疗效果，并取得令人鼓舞的实质性进展。神经是人身体中复杂和高度分化的组织，神经干细胞的培养难度高，在培养过程中容易出现自发分化，从而很快就失去干性和分化功能。所以目前有大量神经干细胞体外培养的研究，均旨在培养高质量和数量的神经干细胞，但也存在受冻存条件限制而不能大规模应用的问题，干细胞冻存过程中无外源性污染是神经干细胞在临床治疗应用中安全可靠的关键，一方面由于常规冻存液中的胎牛血清含有各种不明确的细胞生长因子，会对细胞的分化形成干扰，在不明生长因子、营养因子或其他细胞因子的刺激下，细胞内关键的信本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人神经干细胞的无血清冻存液，其特征在于其混合溶液体系中成分的百分比为：含有人神经干细胞的无血清培养基65%‑75%、中药天麻来源的单体化合物溶液3‑5.5%、二甲基亚砜9‑12%，腺苷3‑5.5%、以及人神经干细胞来源的外泌体溶液2.5‑5%和人神经干细胞来源的短肽和多肽类化合物溶液2.5‑5%。

【技术特征摘要】
1.一种人神经干细胞的无血清冻存液，其特征在于其混合溶液体系中成分的百分比为：含有人神经干细胞的无血清培养基65%-75%、中药天麻来源的单体化合物溶液3-5.5%、二甲基亚砜9-12%，腺苷3-5.5%、以及人神经干细胞来源的外泌体溶液2.5-5%和人神经干细胞来源的短肽和多肽类化合物溶液2.5-5%。2.根据权利要求1所述的一种人神经干细胞的无血清冻存液，其特征在于人神经干细胞的无血清培养基的配制可以选择不同体积百分比的无血清培养基建立储存体系，优化后分别配制体积百分比为65%、67%、69%、71%，73%，75%的冻存液体系。3.根据权利要求1所述的一种人神经干细胞的无血清冻存液，其特征在于人神经干细胞无血清培养基包括基础培养基和添加营养因子成份，其中基础培养基为Alpha-MEM培养基，根据需要添加如下成份：营养因子A1（50ng/mL），营养因子B1（50ng/mL），4-羟乙基呱嗪乙磺酸（5mg/mL），血小板源性细胞因子（50ng/mL），表皮生长因子（50ng/mL），碱性成纤维生长因子（50ng/mL），细胞因子抗体E（20ng/mL），细胞因子抗体F（20ng/mL），细胞因子抗体M（20ng/mL）。4.根据权利要求1所述的一种人神经干细胞的无血清冻存液，其特征在于加入浓度为2mmol/L浓度的中药天麻来源的单体化合物ZTD1，ZTD1溶液的体积百分比分别优化为3%，3.5%，4%，4.5%，5%，5.5%。5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆军，郑元林，刘劼，
申请(专利权)人：江苏师范大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32