一种铜蓝蛋白检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术公开了一种铜蓝蛋白检测试剂盒，包括试剂R1：PBS缓冲液、NaCl、NaN3、海藻糖、曲拉通、PEG‑8000，溶剂为纯化水；试剂R2：PBS缓冲液、NaCl、NaN3、BSA、阿拉伯胶、胶乳包被的铜蓝蛋白抗体，溶剂为纯化水；胶乳包被的铜蓝蛋白抗体的原料为：胶乳微球、铜蓝蛋白抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物。本发明专利技术还公开了一种铜蓝蛋白检测试剂盒的使用方法。本发明专利技术的优点在于：(1)本发明专利技术试剂盒具有较高检测灵敏度和准确度，使用操作简单、快速，检测只需10分钟；(2)本发明专利技术形成的抗原抗体复合物，稳定性佳，在特定波长下有一定的吸光度，特异性强；(3)用于全自动生化分析仪，可大规模开展和推广。

A ceruloplasmin detection kit and use method thereof

The invention discloses a ceruloplasmin assay kit, including reagents R1:PBS buffer, NaCl, NaN3, PEG, trehalose, Triton 8000, solvent for purified water; R2:PBS reagent buffer, NaCl, NaN3, BSA, Arabia rubber and latex package ceruloplasmin antibody was the solvent for purified water; the latex bag ceruloplasmin antibody was the raw material: latex microspheres, ceruloplasmin antibody and polyethylene p-chloromethyl styrene copolymer. The invention also discloses a using method of ceruloplasmin detection kit. The invention has the advantages that: (1) the kit of the invention has high detection sensitivity and accuracy, simple operation, fast detection, only 10 minutes; (2) antigen antibody complexes formed by the invention has good stability, the absorbance at a specific wavelength, specificity (3); for the automatic biochemical analyzer, and can carry out large-scale promotion.

【技术实现步骤摘要】
一种铜蓝蛋白检测试剂盒及其使用方法
本专利技术涉及医学检验
，尤其涉及一种铜蓝蛋白检测试剂盒及其使用方法。
技术介绍
铜蓝蛋白(ceruloplasmin，CER)又称铜氧化酶，是一种含铜的α2糖蛋白，分子量约为12-16万，不易纯化。目前所知，铜蓝蛋白为一个单链多肽，每分子含6-7个铜原子，由于含铜而呈蓝色，含糖约10％，末端唾液酸与多肽链连接，具有遗传上的基因多形性。其作用为调节铜在机体各个部位的分布、合成含铜的酶蛋白，有着抗氧化剂的作用，并具有氧化酶活性，对多酚及多胺类底物有催化其氧化的能力。一般认为，铜蓝蛋白由肝脏合成，一部分由胆道排泄，尿中含量甚微。铜蓝蛋白的测定对某些肝、胆、肾等疾病的诊断有一定意义。目前，检测铜蓝蛋白的方法主要是酶联免疫吸附法，但酶联免疫吸附法的具体操作相对繁琐，且定量检测效果不佳，结果受人为因素影响结果较大。因此，目前急需一种操作简单、结果检测准确的铜蓝蛋白检测试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种操作简单、结果检测准确的铜蓝蛋白检测试剂盒及其使用方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种铜蓝蛋白检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：其溶剂为纯化水；试剂R2：其溶剂为纯化水；所述胶乳包被的铜蓝蛋白抗体的原料成分为：胶乳微球、铜蓝蛋白抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为9％-11％。作为本专利技术的优选方式之一，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：其溶剂为纯化水；试剂R2：其溶剂为纯化水；所述胶乳包被的铜蓝蛋白抗体的原料成分为：胶乳微球、铜蓝蛋白抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为10％。作为本专利技术的优选方式之一，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：其溶剂为纯化水；试剂R2：其溶剂为纯化水；所述胶乳包被的铜蓝蛋白抗体的原料成分为：胶乳微球、铜蓝蛋白抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为10.5％。作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R1的PBS缓冲液的pH为8.3。作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R2的PBS缓冲液的pH为8.3。一种铜蓝蛋白检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：(1)将待测样品与试剂R1混合，37℃孵育5min；(2)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A1；(3)再与试剂R2混合，37℃反应5min；(4)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A2；(5)根据吸光度变化值计算出样本中铜蓝蛋白的浓度。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(1)的试剂R1和步骤(3)的试剂R2的体积比为4:1。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(1)的待测样品与试剂R1和试剂R2构成的试剂液之间的体积比为1:50。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(2)和步骤(4)中，在波长660nm处测定吸光度A1和A2。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(5)中，吸光度变化值为ΔA，即A2减去A1后的值。本专利技术相比现有技术的优点在于：(1)本专利技术试剂盒具有较高的检测灵敏度和准确度，且使用操作简单、快速，从检测到出结果只需10分钟；(2)本专利技术所形成的抗原抗体复合物，稳定性佳，在特定波长下有一定的吸光度，特异性强；(3)本专利技术可用于全自动生化分析仪上，适合全自动测试，可大规模的开展和推广。具体实施方式下面对本专利技术的实施例作详细说明，本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。实施例1本实施例的一种铜蓝蛋白检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：其溶剂为纯化水；试剂R2：其溶剂为纯化水；所述胶乳包被的铜蓝蛋白抗体的原料成分为：胶乳微球、铜蓝蛋白抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为9％。实施例2本实施例的一种铜蓝蛋白检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：其溶剂为纯化水；试剂R2：其溶剂为纯化水；所述胶乳包被的铜蓝蛋白抗体的原料成分为：胶乳微球、铜蓝蛋白抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为11％。实施例3本实施例的一种铜蓝蛋白检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：其溶剂为纯化水；试剂R2：其溶剂为纯化水；所述胶乳包被的铜蓝蛋白抗体的原料成分为：胶乳微球、铜蓝蛋白抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为10％。实施例4本实施例的一种铜蓝蛋白检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：其溶剂为纯化水；试剂R2：其溶剂为纯化水；所述胶乳包被的铜蓝蛋白抗体的原料成分为：胶乳微球、铜蓝蛋白抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为10.5％。实施例5本实施例的一种上述实施例中铜蓝蛋白检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)配制试剂R1：①按照上述实施例中试剂R1的组分含量，配制PBS缓冲液，调节pH至配方所示值，作为R1缓冲液；②按照上述实施例中试剂R1的组分含量，将NaCl、NaN3、海藻糖、曲拉通、PEG-8000溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，即制得试剂R1；(2)配制试剂R2：①按照上述实施例中试剂R2的组分含量，配制PBS缓冲液，调节pH至配方所示值，作为R2缓冲液；②按照上述实施例中试剂R2的组分含量，将NaCl、NaN3、BSA、阿拉伯胶溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，即得R2分散液；③制备胶乳包被的铜蓝蛋白抗体：a.取粒径为80nm和120nm的胶乳微球于100mMMES缓冲液中，加入50g/LEDAC溶液混匀后于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清；再加入50g/LNHS溶液恢复至原体积后，混匀于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清，得混合微球乳液；b.在混合微球乳液中加入聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，共聚80nm和120nm粒径的胶乳；离心沉淀，将剩余物质分散于MES缓冲液中，反复3次，最后于MES缓冲液中恢复至原体积，再加入铜蓝蛋白抗体，于37℃下反应3.5h，离心，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，反复3次，最后将沉淀物分散于原体积的NHS缓冲液中，加入BSA30g/L；c.5℃封存48h，得最终所需的胶乳包被的铜蓝蛋白抗体；④用R2分散液来溶解得到的胶乳包被的铜蓝蛋白抗体，超声分散，最终制得试剂R2。实施例6本实施例的一种上述实施例中铜蓝蛋白检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：(1)将5uL待测样品与200uL试剂R1混合，37℃孵育5min；(2)用全自动生化分析仪在波长660nm处测定反应后的吸光度A1；(3)再与50uL试剂R2混合，37℃反应5min；(4)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种铜蓝蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：

【技术特征摘要】
1.一种铜蓝蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：试剂R2：所述胶乳包被的铜蓝蛋白抗体的原料成分为：胶乳微球、铜蓝蛋白抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为9％-11％。2.根据权利要求1所述的铜蓝蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：试剂R2：所述胶乳包被的铜蓝蛋白抗体的原料成分为：胶乳微球、铜蓝蛋白抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为10％。3.根据权利要求1所述的铜蓝蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：试剂R2：所述胶乳包被的铜蓝蛋白抗体的原料成分为：胶乳微球、铜蓝蛋白抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为10.5％。4.根据权利要求1-3任一项所述的铜蓝蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的PBS缓冲液的pH...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴铮，朱雨，丁先骏，庄庆华，吴泽东，朱卫中，
申请(专利权)人：安徽伊普诺康生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34