体外细胞低温保存的保护剂制造技术

本发明专利技术涉及人造血干细胞移植时使用的造血干细胞低温保护剂，其目的在于提高长时间低温保存后造血干细胞的回收率。本发明专利技术在保存的人血细胞悬液中加入适量的超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）可明显提高干细胞活存率。保存５天可提高活存４－５倍。其实施方法是将冻干粉剂ＳＯＤ用生理盐水稀释，加入细胞悬液中，使之最终浓度为每毫升０．１６－６Ｕ。然后置４－６℃冰箱保存。根据需要随时从冰箱中取出细胞悬液，给病人输注。由于在此剂量范围内ＳＯＤ无毒副作用，因此在输注前不需洗脱ＳＯＤ。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种体外低温条件下保存血细胞的保护剂。造血干细胞移植是治疗白血病及恶性肿瘤的一项根本性措施，可使不少不治之症患者启死回生。造血干细胞的保存是造血干细胞移植，特别是外周血干细胞移植的一个重要技术环节。为了使收集到的干细胞达到能在体内植入的阈剂量，需用血细胞分离器多次重复分离，首尾3-5天，在此期间，所分离的细胞保存在4-6℃冰箱中，但随着保存时间的延长，造血干细胞的的死亡迅速增加。有人用二甲基亚砜和血型相同的血清作冷冻保存液4℃保存入骨髓(张效民等两种骨髓保存方法在自体骨髓移植中的应用。临床血液学杂志1992；589)。本专利技术使用超氧化物歧化酶(SOD)作为4℃保存的低温保护剂以长时间体外保存人造血干细胞，在这方面，国外曾有人报道在器官移植中将羊的离体心肺放在4℃条件下保存，在保存前和保存过程中灌注SOD，对改善器官功能和活存情况有良好效果(LeGY et al.Heart-Lung Protection from ischemic injury during 8 hour hypothermicpresservation.Acta Biomed Ateneo Parmense 1994；65181)。本专利技术的目的在于提供一种体外造血干细胞低温保存的保护剂。本专利技术是在保养液中加入超氧化物歧化酶，以减低造血细胞的死亡。本专利技术的具体实施方法如下1、造血干细胞悬液的制备以外周血干细胞制备为例，给供血者或病人自身输注造血干细胞动员剂，待造血干细胞达到高峰时用血细胞分离器从肘静脉分离单个核细胞2-4小时，每日或隔日分离1次，连续3-4次。2、取冻干粉剂SOD，用生理盐水溶解，稀释至适当浓度，加入细胞悬液中，使SOD终浓度在0.16-6U/ml之间。在4-6℃冰箱保存1-7天，根据需要随时可以取出按计划给病人输入。与此同时进行有核细胞计数、活细胞检测和造血祖细胞培养，旨在给出病人移植的造血干细胞的数量。3、如是自体骨髓保存，在采集的骨髓细胞悬液中按比例加入SOD后置于4-6℃冰箱保存，需要时从冰箱取出给病人输注。SOD进入人体后，在细胞外发挥清除超氧化物的作用，经亚急性和慢性实验，证明无明显不良反应。本专利技术(体外细胞低温保存的保护剂)实施后，与以往多种方法相比，具有以下优点4-6℃条件下保存造血细胞，保养液中加SOD与常规不加SOD的方法比较，造血祖细胞回收率明显不同。以保存入骨髓造血干细胞不同时间的CFU-GM产率为例，加SOD保存3天时CFU-GM活存率提高两倍，保存5天提高5倍，从而可以明显增加了输入的干细胞的数量，减少了干细胞的分离次数。每减少一次分离，可节省经费开支约2000元。实施例4-6℃保存自体外周血造血干细胞当肿瘤病人注射造血干细胞动员剂后，在造血于细胞的高峰期通过血细胞分离器采集外周血干细胞，所采集的干细胞一般浓度在1-2×108/ml左右，4℃保存前用细胞培养液将细胞稀释1-2倍，并使保存体系含人10％AB血清和0.16-6U/ml的SOD。上述体系置于4-6℃冰箱保存，保存期间防止冰箱温度变化。一般情况所采集的外周血干细胞需在冰箱中保存3-5天。在此期间给病人进行大剂量放化疗，并保证大部分药物已从体内清除。自体造血于细胞回输时，从冰箱中取出保存体系，在无菌条件下取出约2ml进行造血祖细胞体外集落测定及细胞活性测定，加SOD保存3天时CFU-GM活存率提高两倍，保存5天提高5倍。保存的细胞可不经处理直接回输给病人，不必再洗涤除去所加的SOD。权利要求1.一种人体外低温条件下的血细胞保护剂，其特征是超氧化物歧化酶。2.根据权利要求1的这种超氧化物歧化酶，其特征可以是一种冻干粉剂。3.根据权利要求1的这种超氧化物歧化酶，其特征工作浓度为0.16-6U/ml。全文摘要本专利技术涉及人造血干细胞移植时使用的造血干细胞低温保护剂，其目的在于提高长时间低温保存后造血干细胞的回收率。本专利技术在保存的人血细胞悬液中加入适量的超氧化物歧化酶(SOD)可明显提高干细胞活存率。保存5天可提高活存4-5倍。其实施方法是将冻干粉剂SOD用生理盐水稀释，加入细胞悬液中，使之最终浓度为每毫升0.16-6U。然后置4-6℃冰箱保存。根据需要随时从冰箱中取出细胞悬液，给病人输注。由于在此剂量范围内SOD无毒副作用，因此在输注前不需洗脱SOD。文档编号A01N1/02GK1158894SQ96109808公开日1997年9月10日 申请日期1996年9月17日 优先权日1996年9月17日专利技术者马恩普, 刘秀珍, 刘明东, 韩颍 申请人:中国人民解放军军事医学科学院放射医学研究所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人体外低温条件下的血细胞保护剂，其特征是超氧化物歧化酶。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：马恩普，刘秀珍，刘明东，韩颍，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院放射医学研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]