含有大鳞大马哈鱼生长因子的大肠杆菌制造技术

本发明专利技术公开了含有大鳞大马哈鱼生长因子的工程菌，利用已有的ｓＧＨ ＤＮＡ，采用特定的引物和质粒，重组构建了含有ｐＥＴｓＧＨ质粒高效表达ｓＧＨ的大肠杆菌工程菌，其菌种保藏号：ＣＧＭＣＣ ＮＯ．０３６２－２。还重组构建了含有ｐＡＯｎｓＧＨ质粒高效表达ｓＧＨ的酵母菌工程菌，其菌种保藏号：ＣＧＭＣＣ ＮＯ．０３６２－１。本发明专利技术从降低培养基成本和简化分离纯化步骤入手，突破技术难点，解决发酵工艺和产物处理问题，降低成本，提高产率和功效，研制了由这两种工程菌分别制成的促生长浸泡剂和饲料添加剂，用于水产养殖和禽畜养殖生产中，可大幅度提高养殖产量。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种含有大鳞大马哈鱼生长因子的工程菌，所使用的大鳞大马哈鱼生长因子，其中的ｓＧＨ ｃＤＮＡ基因序列是由Ｄｒ．Ｃｈｏｙ Ｌ．Ｈｅｗ等人构建大鳞大马哈鱼脑垂体ｃＤＮＡ基因文库，分离其ｓＧＨ ｃＤＮＡ基因并构建了质粒ｐｓＧＨ４，其特征在于：所述工程菌中的ｓＧＨ ｃＤＮＡ基因序列是由质粒ｐｓＧＨ４经ＰＣＲ扩增获得的，其基本步骤如下：（１）依据ｓＧＨ ｃＤＮＡ编码区两端的序列设计了一对引物Ｂ－ＧＨ１和Ｂ－ＧＨ２，经ＰＣＲ扩增合成了带有ＢａｍＨＩ和ＮｃｏＩ酶切位点的ＰＣＲ反应产物，再 经过这两种酶酶切后，获得了带ＢａｍＨＩ和ＮｃｏＩ粘性末端的ｓＧＨ ｃＤＮＡ片段；（２）选用质粒ｐＥＴ１５ｂ，用ＢａｍＨＩ和ＮｃｏＩ双酶切，分离５．６ｋｂ的线性化质粒ｐＥＴ１５ｂ ＤＮＡ片段；（３）将上述（１）中的ｓＧＨ ｃＤＮＡ片段 与（２）中的质粒ｐＥＴ１５ｂ的ＤＮＡ片段在Ｔ４连接酶的作用下，进行重组构建成具有环状ＤＮＡ的重组质粒ｐＥＴｓＧＨ；（４）选用大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１菌种，制备ＢＬ２１菌的感受态细胞；（５）在４２℃，１．５ｍｉｎ热休克条件下， 将ｐＥＴｓＧＨ的环状ＤＮＡ转化至ＢＬ２１感受态细胞内；（６）在含氨卡青霉素的ＬＢ固体培养基上铺皿培养，筛选转化子，即得到转化了ｐＥＴｓＧＨ质粒的工程菌种，命名为ＢＬ２１／ｐＥＴｓＧＨ，其菌种保藏号：ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．０３６２－２，保 藏日期：１９９８．９．２９。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张培军，徐永立，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]