一种猪生长抑素基因编辑位点及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种猪生长抑素基因编辑位点及其应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，本发明专利技术将含有该编码序列的sgRNA和Cas9mRNA通过胞质显微注射法注入猪胚胎中，实现对猪SST基因的定点突变。本发明专利技术通过CRISPR‑Cas9技术在胚胎水平上对猪内源基因SST进行编辑。统计结果表明，该位点经过SSA luciferase检测体外酶切活性为65％，并能够在胚胎水平上面敲除猪SST基因，在细胞内形成SST的点突变。本发明专利技术对促进内源基因敲除或外源基因定点整合技术在转基因猪研究和生产中的应用具有十分重要的作用。

【技术实现步骤摘要】
一种猪生长抑素基因编辑位点及其应用
本专利技术属于生物医药
，涉及一种猪生长抑素基因编辑位点及其应用，具体地说，涉及一种猪生长抑素基因SST编辑位点(30-52)及其应用。
技术介绍
将外源基因精准敲入猪基因组中，一直是极为困难的。常见的显微注射、电穿孔、磷酸钙沉淀、逆转录病毒载体感染等方法由于其随机性无法实现外源基因在基因组特定位置的定点整合；依赖于同源重组的基因打靶技术虽然可以将外源基因导入靶细胞的特定位置，但其基因打靶效率低、操作难度大，而且在细胞筛选过程中引入的标记基因也会到来后期的生物安全隐患，这些问题都极大的限制了该技术的发展应用。直到近年来人工核酸内切酶(engineeredendonuclease,EEN)的出现，才彻底改变了这一现状。人工核酸内切酶技术，包括锌指核酸内切酶(zincfingerendonuclease,ZFN)、类转录激活因子效应物核酸酶(transcriptionactivator-likeeffctornuclease,TALEN)和CRISPR/Cas(clusteredregularlyinterspacedshortpalindrom本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪生长抑素基因编辑位点，其特征在于，是一段包含23个脱氧核糖核苷酸的DNA序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，该位点在猪基因组的准确定位是13号染色体SST编码区第一外显子上，染色体坐标为125337589‑125337611，编码区坐标为30‑52。

【技术特征摘要】
1.一种猪生长抑素基因编辑位点，其特征在于，是一段包含23个脱氧核糖核苷酸的DNA序列，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，该位点在猪基因组的准确定位是13号染色体SST编码区第一外显子上，染色体坐标为125337589-125337611，编码区坐标为30-52。2.一种猪生长抑素基因编辑位点在Cas9核酸内切酶特异识别过程中的应用。3.根据权利要求2所述的猪生长抑素基因编辑位点在Cas9核酸内切酶特异识别过程中...

【专利技术属性】
技术研发人员：任红艳，毕延震，李晓敏，李莉，华再东，郑新民，刘西梅，肖红卫，华文君，张立苹，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：湖北,42