一种牙本质非胶原蛋白的程序化制备方法技术

本发明专利技术提供了一种牙本质非胶原蛋白的程序化制备方法，包括如下制备步骤：1）收集新鲜非龋坏牙齿，清洗干净后于15mmol/L叠氮化钠中保存数天,叠氮化钠作为防腐剂和多种酶抑制剂；2）流水冲洗数小时后‑80℃保存备用；3）室温解冻牙齿，去除所有的软组织，清洗；4）用牙钻或者手术刀去除根部牙骨质；5）用金刚石骨锯或慢速切割机将牙齿切为小片；6）去掉牙髓组织和细胞；7）用骨刀或者骨锯去除牙釉质；8）将牙本质片研磨成细粉末。本发明专利技术具有如下有益结果：1）通过简单的制作工艺可以生产大量能用于后续相关牙本质诱导组织再生的非胶原蛋白。2）生产制备的牙本质非胶原蛋白混合物可以模拟天然牙本质在牙髓组织再生中的所发挥的诱导作用。

A method of preparation of non collagen in dentin

The present invention provides a method for preparing a program of dentin non collagenous proteins, which comprises the following steps: 1) preparing to collect fresh non carious teeth, after cleaning with 15mmol/L sodium azide preserved in a few days, sodium azide as a preservative and a variety of enzyme inhibitors; 2) 80 hours after the rinse water stored at standby; 3) room temperature thawing teeth, remove all soft tissue; 4) with dental or surgical knife to remove the root cementum; 5) with diamond saw cutting machine will slow bone or teeth cut into small pieces; 6) to remove the pulp tissue and cells; 7) removal of enamel using bone knife or bone saw; 8) the dentine plates grind to a fine powder. The invention has the following beneficial results: 1) a large number of non collagen proteins that can be used for subsequent dentin induced tissue regeneration can be produced through simple manufacturing process. 2) the produced dentin non collagen mixture can simulate the induction of natural dentin in the regeneration of dental pulp tissue.

【技术实现步骤摘要】
一种牙本质非胶原蛋白的程序化制备方法
本专利技术涉及一种混合蛋白的提取方法，尤其是一种硬组织蛋白的萃取方法，具体的说是一种牙本质非胶原蛋白的程序化制备方法。
技术介绍
临床上牙髓组织暴露、感染或炎症以及根尖区炎症时均需行根管治疗，即去除牙髓组织及感染牙本质，而根管治疗后的患牙大多数机械强度降低，极易缩短患牙的使用寿命。随着组织工程技术的发展，诱导牙髓组织再生逐渐成为研究热点。研究表明利用血运重建方法可以诱导根尖孔破坏的牙齿继续发育，形成有活力的牙髓组织，这提示我们根管壁牙本质在牙髓再生过程中发挥着关键作用。在牙髓暴露的牙齿中，发现牙本质碎片能够诱导修复性牙本质桥的形成，进一步研究表明，牙本质碎片可能为牙髓干细胞的粘附提供了基质或者相关信号因子，从而实现修复性牙本质再生。牙本质作为成牙本质细胞分泌的细胞外矿化基质，不仅与其天生的与成牙本质细胞相匹配的孔径大小及空隙率有关，也与其本身组成成分有关。体外单纯应用不仅能诱导牙髓干细胞向成牙本质细胞分化，形态学上可以观察到牙髓干细胞由成纤维样逐渐变小、变圆、伸出细胞突起进入牙本质小管。此外，牙本质体外还能诱导牙囊细胞向成牙本质细胞分化甚至分泌矿本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牙本质非胶原蛋白的程序化制备方法，其特征在于， 包括如下制备步骤：1）收集新鲜非龋坏牙齿，清洗干净后于15mmol/L叠氮化钠中保存数天, 叠氮化钠作为防腐剂和多种酶抑制剂；2）流水冲洗数小时后‑80℃保存备用；3）室温解冻牙齿，去除所有的软组织，清洗；4）用牙钻或者手术刀去除根部牙骨质；5）用金刚石骨锯或慢速切割机将牙齿切为小片；6）去掉牙髓组织和细胞；7）用骨刀或者骨锯去除牙釉质；8）将牙本质片研磨成细粉末；9）称重后将牙本质粉末以1：4的质量体积比置于含有蛋白酶抑制剂EDTA溶液中，4℃保存，每两天换液一次，持续14天；10）换液时，将含有牙本质/EDTA溶液的混合物离心，然后将上清...

【技术特征摘要】
1.一种牙本质非胶原蛋白的程序化制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：1）收集新鲜非龋坏牙齿，清洗干净后于15mmol/L叠氮化钠中保存数天,叠氮化钠作为防腐剂和多种酶抑制剂；2）流水冲洗数小时后-80℃保存备用；3）室温解冻牙齿，去除所有的软组织，清洗；4）用牙钻或者手术刀去除根部牙骨质；5）用金刚石骨锯或慢速切割机将牙齿切为小片；6）去掉牙髓组织和细胞；7）用骨刀或者骨锯去除牙釉质；8）将牙本质片研磨成细粉末；9）称重后将牙本质粉末以1：4的质量体积比置于含有蛋白酶抑制剂EDTA溶液中，4℃保存，每两天换液一次，持续14天；10）换液时，将含有牙本质/EDTA溶液的混合物离心，然后将上清收集至-20℃保存；11）透析7天，开始每两天换液，随后一天一换；1...

【专利技术属性】
技术研发人员：于金华，雷港，周洲，张光东，庄颖，许涛，闫明，景双林，
申请(专利权)人：南京医科大学附属口腔医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32