治疗胰腺癌的药物制造技术

本发明专利技术涉及治疗胰腺癌的药物，所说的药物含有适用于抑制Ｋ－ｒａｓ基因表达的双链核糖核酸（ｄｓＲＮＡ）。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及治疗胰腺癌的药物和用途，以及生产这种药物的用途。胰腺癌和胰腺的腺癌分别是具有最不好预后的癌症之一。对于胰腺癌的病因现在还不知道。到此刻为止还没有适当的疗法。除了其它基因的改变，胰腺癌细胞经常显示在K-ras基因中的突变。尤其已经在密码子12，13以及61中检测到了突变。K-ras基因是编码GTP-结合K-ras蛋白的原癌基因。K-ras被定位在细胞质膜的细胞质侧，并且与受体-酪蛋白-激酶有关。GTP的结合活化K-ras。已结合GTP的磷酸残基的水解裂解导致失活。结果释放形成的GDP，GTP的重新结合能够导致K-ras的再活化。前面提到的突变能够导致K-ras中氨基酸的交换，因而导致其持久活化。K-ras的活化除其它作用外，还激活蛋白激酶C。从德国专利DE10100586C1中已知一种抑制细胞中靶基因表达的方法，其中将具有双链结构的寡核糖核酸引入细胞。双链结构中的一条链与靶基因互补。在这种方法中，抑制作用的原理被称为RNA干扰。本专利技术的任务是克服现有技术的缺点。特别是获得治疗胰腺癌的有效药物和用途。而且，获得生产这种药物的用途。这个任务通过权利要求1，19和20中的特征解决。从权利要求2至18和21至38中的特征可以得出优选的实施方案。根据本专利技术，含有适合通过RNA干扰方式抑制K-ras基因表达的双链核糖苷酸(dsRNA)的药物用于治疗胰腺癌，特别是人胰腺癌。不是dsRNA中的所有核苷酸都必须显示为典型的沃森-克里克(Watson-Crick)碱基对。特别地，单个的，非互补的碱基对几乎根本不损害效果。最大可能的碱基对数也是dsRNA中所含最短链中的核苷酸数。该药物含有足以抑制胰腺癌中K-ras基因表达剂量的dsRNA。也能将该药物设计成几个药物单位的总和共同含有足够量这样的方式。足够量依赖于给药的方式。为了确定所需要的量，可以以逐渐增加的量或剂量给予dsRNA。接着通过已知方法检验从胰腺癌中获得的组织样品以检测在这种量时是否发生K-ras基因的表达抑制。这些方法，例如可能包括分子生物学、生物化学或者免疫学的方法。使人惊奇地是，通过用能够选择性地抑制K-ras基因表达的dsRNA治疗，已经显示能够抑制胰腺癌细胞的增殖，并且能够减少活肿瘤细胞的数量。令人惊异的是，非恶性细胞的增殖行为在很大程度上没有受到这种疗法的影响。该药物能够增加胰腺癌细胞中的凋亡率。在体内，使用这样的药物可能会有效地抑制胰腺肿瘤的生长。能够以突变K-ras基因这样的方式影响K-ras的持久活化。通过根据本专利技术的药物抑制这种基因的表达在抑制胰腺癌的生长中特别有效。能够在密码子12，13或61中突变K-ras基因。在被突变的K-ras基因中，密码子12能够编码精氨酸、丝氨酸、丙氨酸、缬氨酸、半胱氨酸或天冬氨酸，或者密码子13能够编码天冬氨酸，或者密码子6 1能编码组氨酸或亮氨酸。在野生型K-ras基因中，密码子12和密码子13每个都编码甘氨酸，密码子61编码谷氨酸。优选地，dsRNA的一条链S1具有一个区域，特别地是由少于25个连续核苷酸构成，其至少部分与K-ras基因互补。这样的dsRNA特别非常适于抑制K-ras基因的表达。“K-ras基因”应被理解为指在肿瘤细胞中编码K-ras的双链DNA的DNA链，其与包括所有被转录区，作为转录模板的DNA链互补。因此K-ras基因通常是有意义链。这样S1链能够与RNA转录本或其加工产物，例如在K-ras基因的表达过程中形成的mRNA互补。互补dsRNA区可能具有19到24，优选20到24，特别优选21到23，尤其优选22或23个核苷酸。具有这种结构的dsRNA在抑制K-ras基因中效率特别高。dsRNA的S1链可能具有少于30，优选少于25，特别优选21到24，尤其优选23个核苷酸。这些核苷酸的数量也是在dsRNA中最大可能的碱基对数。这种dsRNA在细胞内特别稳定。已经证明当dsRNA的至少一端具有由1到4个，特别地由2个或3个核苷酸构成的单链突出端时特别有利。与在至少一端没有单链突出端的dsRNA相比，这种dsRNA在抑制K-ras基因的表达中显示了优越的效果。这里，一端是存在5’-和3’-链末端的dsRNA区。仅仅由S1链构成的dsRNA相应地具有环状结构和仅仅一端。由S1链和S2链构成的dsRNA具有两端。在各种情况下，一端由链S1的一个链末端形成，另一端由链S2的链末端形成。单链突出端优选位于S1链的3’-端。单链突出端的这种位置导致药物效率的进一步提高。在一个实例中，dsRNA仅仅在一端，特别是在位于S1链3’末端的一端显示单链突出端。在显示两端的dsRNA中另一端是平端，即，缺乏突出端。已经证明这样的dsRNA在各种各样的细胞培养基中以及在血和血清中特别稳定。优选地，dsRNA除了具有S1链，还具有S2链，即，它由两条单链构成。当S1链(反意义链)是23个核苷酸长，S2链是21个核苷酸长，并且S1链的3’-端具有由两个核苷酸构成的单链突出端时该药物特别有效。这里位于S1链5’-末端的dsRNA端是平端。S1链能够与K-ras基因的初级或已加工的RNA转录本互补。优选地，dsRNA由具有SEQ ID NO1序列的S2链和具有SEQ ID NO2序列的S1链，或由具有SEQ ID NO3序列的S2链和具有SEQ ID NO4序列的S1链，或由具有SEQ ID NO5序列的S2链和具有SEQ ID NO6序列的S1链构成，如所附的序列表中所示。这种dsRNA在抑制K-ras基因的表达中特别有效。dsRNA能够存在于在溶液中的药物中，特别是生理上可耐受的缓冲液或生理盐水溶液中，或者被胶束结构围绕，优选被脂质体、衣壳、类衣壳体，或聚合物纳胶囊或微胶囊围绕，或者被结合到聚合物纳囊或微囊上。生理上耐受的缓冲液可能是磷酸缓冲盐水溶液。胶束结构、衣壳、类衣壳体，或聚合物纳胶囊或微胶囊在肿瘤细胞中能够便于dsRNA的摄取。聚合物纳胶囊或微胶囊由至少一种可生物降解的聚合物，例如聚丁基氰基丙烯酸酯构成。聚合物纳胶囊或微胶囊能够在体内转运和释放包含在其内或被结合到其上的dsRNA。药物能够显示为适于吸入、口服、输注或注射，特别是适于静脉内、腹膜内、或者肿瘤内输注或注射的制剂。适于吸入、输注或注射的制剂最简单地由dsRNA和生理上可耐受的溶剂构成，优选生理盐水溶液或生理上可耐受的缓冲液，特别是磷酸缓冲盐水溶液。使人惊奇地是，已经显示dsRNA不必被包裹在特定的载体中，简单地在这样的溶剂或这样的缓冲剂中溶解和给药的dsRNA也能够被肿瘤细胞摄入，并且抑制K-ras基因的表达。优选地，药物以至少一个剂量单位存在，该剂量单位含有能够以递升的优选顺序排列的最大剂量为每公斤体重每天5mg、2.5mg、200μg、100μg、50μgh和最适25μg dsRNA的dsRNA的量。已经证明甚至在这种剂量时dsRNA也显示出抑制K-ras基因表达的显著效果。能够将剂量单位设计成每日单次给药或摄入剂量。在这种情况中，单剂量单位中包含全部日剂量。如果将剂量单位设计成每天几次给药或摄入的剂量，那么为了获得每日的总剂量，在每个剂量中所含的dsRNA量将相应地变小。也能够将剂量单位设计成例如在几天中单次本文档来自技高网...

【技术保护点】
治疗胰腺癌的药物，其中该药物含有适合通过ＲＮＡ干扰的方式抑制Ｋ－ｒａｓ基因表达的双链核糖核酸（ｄｓＲＮＡ）。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：M奥克尔，C赫罗尔德，A盖克，D舒潘，HP沃恩洛赫尔，R克罗伊策尔，S林默，
申请(专利权)人：里伯药品公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]