一种用于表达恶臭假单胞杆菌肌酐酶的酵母工程菌及其应用制造技术

一种用于表达恶臭假单胞杆菌肌酐酶的酵母工程菌，所述酵母工程菌是通过将含有如下外源DNA的表达载体转化到毕赤酵母而获得：所述外源DNA为恶臭假单胞杆菌肌酐酶的DNA编码序列，所述恶臭假单胞杆菌肌酐酶的氨基酸序列如Seq No.2所示。本发明专利技术还提供了该酵母工程菌的构建方法以及采用本发明专利技术的酵母工程菌发酵获得的重组恶臭假单胞杆菌肌酐酶在肌酐检测中的应用。本发明专利技术的酵母工程菌培养快速简单，诱导条件容易控制，生产成本低，具有工业化生产的潜力；同时由其发酵制备的重组恶臭假单胞杆菌肌酐酶具有良好的肌酐酶活性，并表现出优良的温度稳定性、耐热能力和pH稳定性。

A yeast engineered strain for the expression of Pseudomonas aeruginosa creatinine and its application

For yeast expression of Pseudomonas putida creatinine enzyme, the recombinant yeast expression vectors by containing the following exogenous DNA and transformed into Pichia pastoris obtained: the exogenous DNA DNA encoding sequence of Pseudomonas putida creatinine enzyme, the stench of the amino acid sequence of pseudo single Bacillus creatinine the enzyme is shown as Seq No.2. The invention also provides a method for the construction of the yeast engineering bacterium and the application of recombinant Pseudomonas putida creatinine enzyme obtained from the fermentation of the yeast engineering strain in the detection of creatinine. The invention of the yeast culture and rapid simple, easy to control the induction conditions, low production costs, with industrial production potential; at the same time by the fermentation of recombinant Pseudomonas putida creatinine enzyme preparation with creatinine enzyme activity and showed good, temperature stability, heat resistance and excellent stability of pH.

【技术实现步骤摘要】
一种用于表达恶臭假单胞杆菌肌酐酶的酵母工程菌及其应用
本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种用于表达恶臭假单胞杆菌肌酐酶的酵母工程菌及其应用。
技术介绍
肌酐酶(creatininase；EC3.5.2.10)是一种水解酶，属于脲酶相关的酰胺水解酶家族，分布于少数几种细菌中。肌酐酶的活性中心含有锌离子，肌酐酶的催化水解合成反应即催化环酰胺肌酐可逆的水解为肌酸。血清中和尿液中肌酐测定可为临床评价肾小球滤过功能提供客观指标，因而是临床上常做的生化检验项目，传统的肌酐测定化学法由于反应特异性差，容易受到样品中的非特异性物质的干扰，正在逐步被酶学方法所取代。肌酐酶作用的底物具有特异性，底物只能是肌酐或者是肌酸，酶法检测肌酐有着反应特异性强，操作简单的优点，而作为其中的一个关键酶，肌酐酶在医学检测上有重要的应用价值。在自然环境中，恶臭假单胞菌、脲节杆菌和烟草节杆菌等微生物的代谢物中都有发现肌酐酶。目前研究比较多的肌酐酶大多是野生菌中的肌酐酶，但野生菌培养困难，肌酐酶产量低，比酶活低，提纯存在困难。随着酶法检测肌酐试剂盒的开发，对于肌酐酶的需求越来越大，利用野生菌进行肌酐酶的生产难以实现工本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于表达恶臭假单胞杆菌肌酐酶的酵母工程菌，其特征在于，所述酵母工程菌是通过将含有如下外源DNA的表达载体转化到毕赤酵母而获得：所述外源DNA为恶臭假单胞杆菌肌酐酶的DNA编码序列，所述恶臭假单胞杆菌肌酐酶的氨基酸序列如Seq No.2所示。

【技术特征摘要】
1.一种用于表达恶臭假单胞杆菌肌酐酶的酵母工程菌，其特征在于，所述酵母工程菌是通过将含有如下外源DNA的表达载体转化到毕赤酵母而获得：所述外源DNA为恶臭假单胞杆菌肌酐酶的DNA编码序列，所述恶臭假单胞杆菌肌酐酶的氨基酸序列如SeqNo.2所示。2.如权利要求1所述的用于表达恶臭假单胞杆菌肌酐酶的酵母工程菌，其特征在于：所述外源DNA序列如SeqNo.1所示。3.如权利要求2所述的用于表达恶臭假单胞杆菌肌酐酶的酵母工程菌，其特征在于：所述表达载体为将所述外源DNA克隆至巴斯德毕赤酵母表达载体pHKFA1，得到的表达载体pHKFA1-cre。4.如权利要求3所述的用于表达恶臭假单胞杆菌肌酐酶的酵母工程菌，其特征在于：所述酵母工程菌是所述表达载体pHKFA1-cre线性化后转化到巴斯德毕赤酵母而得。5.一种用于表达恶臭假单胞杆菌肌酐酶的酵母工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、编码基因的获取：以恶臭假单胞杆菌肌酐酶的氨基酸序列为基础，对序列按照毕赤酵母的密码子偏好性进行优化，得到密码子优化的对应编码序列；恶臭假单胞杆菌肌酐酶氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，其编码序列如SEQIDNO.1所示；步骤二、表达载体的构建：将步骤一获取的编码基因克隆至巴斯德毕赤酵母表达载体pHKFA1，得到表达载体pHKFA1-cre；步骤三、表达载体转化及酵母工程菌获取：将表达载体pHKFA1-cre经Kpn2I单酶切...

【专利技术属性】
技术研发人员：林影，梁书利，侯赣生，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东,44