一种雏鸡专用肠道占位菌剂及其生产方法及与应用技术

本发明专利技术公开了一种雏鸡专用肠道占位菌剂及其制备方法与应用，其中所述肠道占位菌剂是由粘附在健康母鸡盲肠粘膜表面的有益菌群细胞与保护剂混匀冷冻干燥后制得，有益菌群细胞与保护剂的比例是每升保护剂中含5～10g有益菌群细胞，且其总的有效菌数不少于5×10

A special intestinal bacterial agent for chick and its production method and its application

The invention discloses a chicken special intestinal occupying agent and preparation method and application thereof, wherein the occupying agent is composed of intestinal adhesion in the cecal mucosa of healthy hens on the surface of the beneficial bacteria cells and the protective agent mixing freeze drying, the proportion of the beneficial bacteria cells and protective agents per liter protection agent containing 5 ~ 10g bacteria cells, and the total effective number of bacteria is not less than 5 x 10

【技术实现步骤摘要】
一种雏鸡专用肠道占位菌剂及其生产方法及与应用
本专利技术涉及一种畜禽养殖用微生态制剂及其制备方法与应用，尤其涉及一种雏鸡专用肠道占位菌剂及其制备方法与应用，属于微生态学

技术介绍
肠道是机体的重要免疫器官，肠道微生物菌群分布关系着动物的健康水平。完善的肠道菌群组成，能赋予机体健康水平；肠道菌群失衡，易引发动物疾病。肠道菌群组成非常复杂，不同动物其菌群组成各异。刚出生的幼畜动物，肠道是无菌的，在呼吸、进食过程中肠道菌群逐渐建立和完善。鸡肠道菌群分布相对简单，7天前的雏鸡，其肠道菌群数量少、菌群种类单一；7天后盲肠中以复杂专性厌氧性乳杆菌占据优势，并逐渐替代十二指肠和回肠中肠球菌。3周后，肠道菌群健全并稳定下来，主要类群有Lactobacillus,Clostridiaceas,StreptococcusEnterococcaceae,Actinobacteria,Proteobacteria,Flavobacteria,Bacteroidacae及一些未培养细菌。这些微生物菌群黏附在肠上皮细胞表面形成有效的天然屏障，抵御致病菌的侵袭。同时在肠道内生长繁殖，产生有机酸和活性代谢物，有助于食物的消化吸收，促进肠道的蠕动；有些代谢物还能促进机体的免疫反应增强其抗病能力。幼畜动物肠道菌群不健全，消化吸收能力差、抗病力低，容易遭受病原菌感染从而引起消化不良和生理性腹泻，甚至导致死亡。为防治幼畜动物疾病的发生，通常在饲料中添加抗生素。随着饲用抗生素的禁用，微生态制剂作为饲用抗生素的替代品已推向市场，但是目前商品化的微生态制剂产品有菌株单一、同质化严重，宿主特异性差等缺点，致使微生态制剂使用效果不如抗生素明显。因此，研制和开发新型微生态制剂成为市场急需。经检索，由母体盲肠粘附有益菌菌群组成、通过空间位阻方式竞争性肠上皮细胞吸附位点的雏鸡专用肠道占位菌剂未见报道。
技术实现思路
针对现有畜禽养殖微生态制剂的不足，本专利技术提出了一种雏鸡专用肠道占位菌剂及其制备方法与应用。本专利技术所述的雏鸡专用肠道占位菌剂，是由粘附在健康母鸡盲肠粘膜表面的有益菌群细胞与保护剂按比例混匀，冷冻干燥后制得；其特征在于：所述有益菌群细胞包含乳杆菌和肠球菌菌群细胞，其总的有效菌数不少于5×109CFU/g；其由如下方法制得：⑴选择无抗生素喂养的22±2日龄的健康母鸡，宰杀后，取其盲肠部分并剪开，用无菌生理盐水冲洗掉内容物，再冲洗粘膜表面2～3次后，将其置于乳酸细菌培养基(MRS)中，37±1℃厌氧富集培养30±6小时，收集培养液作为有益菌群细胞的种子液；⑵将种子液以体积比为5％～10％的接种量接种到装有GS培养基的培养容器中，37℃±1℃厌氧培养22±2小时后，检测所得发酵液，当其pH值降低至4.0时，即可离心获得有益菌群细胞；所述保护剂由如下配方制得：15g甘油，100g脱脂乳，80g淀粉，1000mL水；所述雏鸡专用肠道占位菌剂中有益菌群细胞与保护剂的比例是每升保护剂中含5～10g有益菌群细胞，且其总的有效菌数不少于5×109CFU/g。上述雏鸡专用肠道占位菌剂的生产方法，步骤是：⑴选择无抗生素喂养的22±2日龄的健康母鸡，宰杀后，取其盲肠部分并剪开，用无菌生理盐水冲洗掉内容物，再冲洗粘膜表面2～3次后，将其置于乳酸细菌培养基(MRS)中，37±1℃厌氧富集培养30±6小时，收集培养液作为有益菌群细胞的种子液；⑵将种子液以体积比为5％～10％的接种量接种到装有GS培养基的培养容器中，37℃±1℃厌氧培养22±2小时后，检测所得发酵液，当其pH值降低至4.0时，即可用于制备有益菌群细胞；⑶收集发酵液，以8000±500rpm/min离心5±1min，沉淀即为有益菌群细胞，当检测其总的有效菌数不少于5×109CFU/g时，按每升保护剂中含5～10g有益菌群细胞的比例混匀细胞，常规冷冻干燥后即得制雏鸡专用肠道占位菌剂。上述雏鸡专用肠道占位菌剂的生产方法中，所述GS培养基成分为：15g葡萄糖，5g淀粉，8g大豆蛋白粉，5g酵母浸粉，L-半胱氨酸0.6g，5乙酸钠，0.4g硫酸镁，0.05g氯化钙，加水至1000mL，pH6.8。上述雏鸡专用肠道占位菌剂的生产方法步骤⑶中，优选按每升保护剂中含10g有益菌群细胞的比例混匀细胞，其中所述保护剂由如下配方制得：15g甘油，100g脱脂乳，80g淀粉，1000mL水。本专利技术所述雏鸡专用肠道占位菌剂在增强雏鸡机体的免疫功能提高其抗病能力中的应用。其中，所述应用的操作方法是：将雏鸡专用肠道占位菌剂选择应用于1日龄雏鸡，并以饮水或喷雾方式连续实施7天。本专利技术公开的雏鸡专用肠道占位菌剂中的有益菌群均是分离自健康母鸡盲肠粘膜上的高粘附菌群，是鸡体肠道固有菌群，较目前商品化的禽用微生态制剂更具宿主专一性、定植能力强。当其进入雏鸡肠道后能通过空间位阻方式与病原菌竞争肠道上皮细胞的吸附位点并快速定植，抑制病原菌入侵，具有生理屏障作用，能增强雏鸡机体的免疫功能提高其抗病能力。本专利技术的雏鸡专用肠道占位菌剂作为饲用抗生素的替代品在畜禽养殖规模化生产中应用前景广阔。具体实施方式实施例1：肠道占位菌剂的种子液制备选择22±2日龄无抗生素喂养的健康母鸡，宰杀后，取其盲肠部分并剪开，用无菌生理盐水冲洗掉内容物，再冲洗2次后将其置于乳酸细菌培养基(MRS)中，37℃厌氧富集培养30±6小时后，所得培养液即为肠道占位菌剂的种子液。其中，MRS培养基组成：10.0g酪蛋白胨，10.0g牛肉膏，5.0g酵母粉，5.0g葡萄糖，0.5g乙酸钠，2.0g柠檬酸二胺，1ml吐温80，2.0g磷酸氢二钾，0.2g硫酸镁，0.05g硫酸锰，蒸馏水1000ml，pH6.8。实施例2：肠道占位菌剂中有益菌群细胞培养将种子液以5％的接种量接种到预装有2/3容积量GS培养基的1吨反应器中，37℃±1℃厌氧培养22±2小时后，检测所得发酵液，当其pH值降低至4.0时，即可用于制备有益菌群细胞。其中，所述GS培养基成分为：15g葡萄糖，5g淀粉，8g大豆蛋白粉，5g酵母浸粉，L-半胱氨酸0.6g，5乙酸钠，0.4g硫酸镁，0.05g氯化钙，加水至1000mL，pH6.8。实施例3：肠道占位菌粉剂制备(1)将实施例2获得的发酵液8000±500rpm/min离心5±1min，沉淀即为有益菌群细胞；(2)采用常规的系列稀释涂布平板法，对所得肠道占位菌粉剂进行平板计数，当检测有益菌群细胞总的有效菌数不少于5×109CFU/g时，按每升保护剂中含5g有益菌群细胞的比例混匀细胞，常规冷冻干燥后即得制雏鸡专用肠道占位菌粉剂。其中，上述保护剂溶液成分是：15g甘油，100g脱脂乳，80g淀粉，1000mL水。(3)宏基因组测序和分析发现，所得肠道占位菌剂包含的有益菌类群主要是乳杆菌和肠球菌。其中乳杆菌包括Lactobacilluscrispatus、Lactobacillusfermentation、Lactobacillushelveticus、Lactobacillusjohnsonnii、Lactobacillussalivarius、Lactobacillusacidic；肠球菌包括Enterococcusdurans、Enterococcusfaecalis、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种雏鸡专用肠道占位菌剂，是由粘附在健康母鸡盲肠粘膜表面的有益菌群细胞与保护剂按比例混匀，冷冻干燥后制得；其特征在于：所述有益菌群细胞包含乳杆菌和肠球菌菌群细胞，其总的有效菌数不少于5×10

【技术特征摘要】
1.一种雏鸡专用肠道占位菌剂，是由粘附在健康母鸡盲肠粘膜表面的有益菌群细胞与保护剂按比例混匀，冷冻干燥后制得；其特征在于：所述有益菌群细胞包含乳杆菌和肠球菌菌群细胞，其总的有效菌数不少于5×109CFU/g；其由如下方法制得：⑴选择无抗生素喂养的22±2日龄的健康母鸡，宰杀后，取其盲肠部分并剪开，用无菌生理盐水冲洗掉内容物，再冲洗粘膜表面2～3次后，将其置于乳酸细菌培养基(MRS)中，37±1℃厌氧富集培养30±6小时，收集培养液作为有益菌群细胞的种子液；⑵将种子液以体积比为5％～10％的接种量接种到装有GS培养基的培养容器中，37℃±1℃厌氧培养22±2小时后，检测所得发酵液，当其pH值降低至4.0时，即可离心获得有益菌群细胞；所述保护剂由如下配方制得：15g甘油，100g脱脂乳，80g淀粉，1000mL水；所述雏鸡专用肠道占位菌剂中有益菌群细胞与保护剂的比例是每升保护剂中含5～10g有益菌群细胞，且其总的有效菌数不少于5×109CFU/g。2.权利要求1所述雏鸡专用肠道占位菌剂的生产方法，步骤是：⑴选择无抗生素喂养的22±2日龄的健康母鸡，宰杀后，取其盲肠部分并剪开，用无菌生理盐水冲洗掉内容...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨鹏，张荣岭，李世旭，孔健，
申请(专利权)人：济南森康三峰生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37