一种w/o/w佐剂组合物、制备的疫苗组合物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种w/o/w佐剂组合物，其包括HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯组合物、脂肪醇聚氧乙烯醚和油。本发明专利技术佐剂组合物用于制备的疫苗组合物在不同温度下，稳定不发生分层和破乳现象，疫苗制备条件简单温和。制备的疫苗快速达到免疫效果，且疫苗在使用时无不良反应。

A w/o/w adjuvant composition, prepared vaccine composition and preparation method

The invention relates to a w/o/w adjuvant composition, which includes a HLB value of less than 5 sucrose fatty acid ester compositions, fatty alcohol polyoxyethylene ether and oil. The adjuvant composition of the present invention is used for the preparation of the vaccine composition at different temperatures and does not stabilize the stratification and demulsification, and the preparation conditions of the vaccine are simple and mild. The vaccine prepared quickly reached the immune effect, and there was no adverse reaction when the vaccine was used.

【技术实现步骤摘要】
一种w/o/w佐剂组合物、制备的疫苗组合物及其制备方法
本专利技术涉及水包油包水佐剂组合物，使用其制备的疫苗组合物和疫苗组合物的制备方法，属于兽药领域。
技术介绍
细菌、病毒及寄生虫感染广泛分布于人和动物。由这些病原引起的疾病通常对抗微生物化学药物疗法具有抗性，使得没有有效的治疗方法。因此，愈来愈多的人使用疫苗学方法以控制传染病。完整的传染性病原体可在经化学灭活或合适的遗传工程处理后变得适用于疫苗配制物。或者，可将病原体的蛋白质亚基在重组表达系统中表达并纯化，以用于疫苗配制中。疫苗可通过在组合物中包含合适的佐剂而变得更有效。佐剂一般是指增加对抗原的体液和/或细胞性免疫应答的任何物质。佐剂被用于实现两个目的：其减缓抗原从注射部位释出，且其刺激免疫系统。传统疫苗通常由灭活或被杀死或经修饰的活致病微生物的粗制备物组成。与这些致病微生物的培养物其中的杂质可作为增强免疫应答的佐剂。然而，以利用致病微生物或纯化的蛋白的同质制备物作为抗原而制成的疫苗所激发出的免疫力通常不够。因此，有必要加入某些外源物质(诸如佐剂)。再者，制造合成及亚单位疫苗很昂贵，加入佐剂可容许使用较小剂量的抗原来刺激类似的免疫应答，从而降低疫苗的制造成本。当将药剂与佐剂组合时可显著增加某些可注射药剂的效力。US5424067专利公开了一种水包油包水佐剂，其使用商品化的佐剂，例如SEPPIC,公司的商品名为MontanideISA206，其缺点是免疫效果见效慢，难以在较短时间内达到理想的免疫效果。另外使用较多的表面活性剂，其带来的免疫副反应问题也不容忽视。现有技术的化妆品也采用水包油包水剂型，但其制备乳化通常需要较高的乳化温度，通常乳化温度超过了37度，如采用该技术制备疫苗，在此条件下抗原很容易失活。专利申请CN106511995A公开了一种双相佐剂，专利申请CN106267184A公开了一种水包油包水型乳化剂，专利申请CN103223164A公开了一种水包油包水型佐剂疫苗，上述现有技术共同存在的问题是，制备的乳剂粒径偏大，粘度较大，稳定性差。因此，现有技术需要一种疫苗制备条件简单温和，对其中的抗原影响小，且制备的疫苗中的微粒粒径小，在不同温度下稳定不发生分层和破乳现象，且免疫效果上能快速达到理想效果且基本无不良反应的佐剂，。
技术实现思路
为解决现有技术中的问题，本专利技术提供了一种佐剂组合物，其中，所述w/o/w佐剂组合物包括HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯组合物、脂肪醇聚氧乙烯醚和油；所述佐剂组合物制备的疫苗，产生的微粒粒径小，稳定性高，在不同温度下均稳定不发生分层和破乳现象。本专利技术的所述佐剂组合物制备的疫苗能快速产生抗体，保证免疫动物能及时达到保护的状态。本专利技术还提供了一种疫苗的制备方法，使用所述佐剂组合物和抗原分别加热至25℃-37℃，混合即可制备疫苗。所述方法在温和的条件下制备疫苗，对其中蛋白成分的活性无影响，保证了疫苗的免疫效力。本专利技术的佐剂组合物制备的疫苗，不产生不良反应，快速产生抗体，保证了免疫效果。具体实施方式以下，对本专利技术的实施方式进行说明。本专利技术提供一种w/o/w佐剂组合物，其中，所述w/o/w佐剂组合物包括HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯组合物、脂肪醇聚氧乙烯醚和油。本专利技术的佐剂组合物在不同温度下，尤其在室温稳定不发生分层和破乳现象，疫苗制备条件简单温和，疫苗粒径小。而本领域公知，双相佐剂是油亲水性表面活性剂和亲油性表面活性剂，但一来表面活性剂种类众多，不是现有技术任意组合都能达到合适的粒径范围和稳定。如本文所述“室温”是指18至25℃的温度。如本文所述，“佐剂”是指可增加对抗原的体液或细胞免疫应答的任何物质。佐剂通常被用于达成两种目的：减缓抗原从注射部位释出及刺激免疫系统。如本文所述“HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯组合物”：是指蔗糖与脂肪酸经过酯化反应所得的混合物，蔗糖有8个-OH基团，可以与脂肪酸反应形成不同HLB值的蔗糖脂肪酸酯组合物，本专利技术所述的脂肪酸酯优选碳原子为8-28的脂肪酸，可以举例，辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、硬脂酸、油酸、花生四烯酸。HLB值为5以下的蔗糖脂肪酸酯组合物可以举例商品化的，例如日本三菱Ryoto蔗糖酯，可以选择的型号，L195，蔗糖酯的月桂酸组合物，其HLB值为1，L595，蔗糖酯的月桂酸组合物，其HLB值5；蔗糖酯s170，蔗糖酯的硬脂酸组合物其HLB值为1，中国对应的蔗糖酯型号为SE-1，蔗糖酯s370，蔗糖酯的硬脂酸组合物其HLB值为3s，中国对应的蔗糖酯型号为SE-3，蔗糖酯s570，蔗糖酯的硬脂酸组合物其HLB值为5，中国对应的蔗糖酯型号为SE-5。如本文所述“脂肪醇聚氧乙烯醚”，又称为聚氧乙烯脂肪醇醚。是非离子表面活性剂中。这种类型的表面活性剂是由聚乙二醇(PEG)与脂肪醇缩合而成的醚，，用以下通式表示：RO(CH2CH2O)nH，其中n是聚合度，因聚乙二醇的聚合度和脂肪醇的种类不同而有不同的品种R一般为饱和的或不饱和的C12～18的烃基，可以是直链烃基，也可以是带支链的烃基。n是环氧乙烷的加成数，也就是表面活性剂分子中氧乙烯基的数目，当碳链R为C12时，生成的脂肪醇聚氧乙烯醚则俗称AEO，例如AEO3、AEO5、AEO9、AEO12。如本文所述“油”包括矿物油和植物油或者合成的可代谢油，矿物油包括但不限于，兽用注射用白油、植物油包括但不限于花生油、大豆油、中链脂肪酸甘油酯，合成的可代谢油包括但不限于角鲨烷或者角鲨烯。作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术所述的w/o/w佐剂组合物中，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯的重量百分比为0.25％W/V-8.0％W/V，脂肪醇聚氧乙烯醚为1.0％W/V-12.0％W/V，余量为油。作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术所述的w/o/w佐剂组合物中，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯为碳原子为8-28的脂肪酸酯。作为本专利技术的一种优选实施方式，本专利技术所述的w/o/w佐剂组合物中，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯选自蔗糖辛酸酯、蔗糖癸酸酯、蔗糖月桂酸酯、蔗糖肉豆蔻酸酯、蔗糖硬脂酸酯、蔗糖油酸酯、或蔗糖花生四烯酸酯。作为本专利技术的进一步优选实施方式，本专利技术所述的w/o/w佐剂组合物中，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯为日本三菱Ryoto蔗糖酯L195、L595、蔗糖酯s170、蔗糖酯SE-1，蔗糖酯s370、蔗糖酯SE-3，蔗糖酯s570、或蔗糖酯SE-5。作为本专利技术的进一步优选实施方式，本专利技术所述的w/o/w佐剂组合物中，HLB为1的蔗糖酯的月桂酸组合物、HLB为5的蔗糖酯的月桂酸组合物、HLB为1的蔗糖酯的硬脂酸组合物、HLB为的蔗糖酯的硬脂酸组合物、或HLB为5的蔗糖酯的硬脂酸组合物。作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术所述的w/o/w佐剂组合物中，肪醇聚氧乙烯醚以RO(CH2CH2O)nH通式表示，R为饱和的或不饱和的C12～18的烃基。作为本专利技术的一种优选实施方式，本专利技术所述的w/o/w佐剂组合物中，肪醇聚氧乙烯醚以RO(CH2CH2O)nH通式表示，R为C12。作为本专利技术的进一步优选实施方式，本专利技术所述的w/o/w佐剂组合物中，脂肪醇聚氧乙烯醚为AEO3、AEO5、AEO9、或AEO12。作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术所述的w/o/w佐剂组合物中，HLB值为5以下糖酯本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种w/o/w佐剂组合物，其中，所述w/o/w佐剂组合物包括HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯组合物、脂肪醇聚氧乙烯醚和油；优选地，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯的重量百分比为0.25％W/V‑8.0％W/V，脂肪醇聚氧乙烯醚为1.0％W/V‑12.0％W/V，余量为油。

【技术特征摘要】
1.一种w/o/w佐剂组合物，其中，所述w/o/w佐剂组合物包括HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯组合物、脂肪醇聚氧乙烯醚和油；优选地，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯的重量百分比为0.25％W/V-8.0％W/V，脂肪醇聚氧乙烯醚为1.0％W/V-12.0％W/V，余量为油。2.根据权利要求1所述的w/o/w佐剂组合物，其中，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯为碳原子为8-28的脂肪酸酯；优选地，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯选自蔗糖辛酸酯、蔗糖癸酸酯、蔗糖月桂酸酯、蔗糖肉豆蔻酸酯、蔗糖硬脂酸酯、蔗糖油酸酯、或蔗糖花生四烯酸酯；更优选地，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯为日本三菱Ryoto蔗糖酯L195、L595、蔗糖酯s170、蔗糖酯SE-1，蔗糖酯s370、蔗糖酯SE-3，蔗糖酯s570、或蔗糖酯SE-5；优选地，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯选自HLB为1的蔗糖酯的月桂酸组合物、HLB为5的蔗糖酯的月桂酸组合物、HLB为1的蔗糖酯的硬脂酸组合物、HLB为的蔗糖酯的硬脂酸组合物、或HLB为5的蔗糖酯的硬脂酸组合物；脂肪醇聚氧乙烯醚以RO(CH2CH2O)nH通式表示，R为饱和的或不饱和的C12～18的烃基；优选地，R为C12；更优选地，脂肪醇聚氧乙烯醚为AEO3、AEO5、AEO9、或AEO12。3.根据权利要求1所述的w/o/w佐剂组合物，其中，HLB值为5以下糖酯脂肪酸酯的重量百分比为0.5％W/V-8％W/V；优选为0.75％W/V-8％W/V；脂肪醇聚氧乙烯醚的重量百分比为2％W/V-8％W/V...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，刘永梅，张许科，
申请(专利权)人：洛阳赛威生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41