一种猪用佐剂组合物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种猪用佐剂组合物以及含有该佐剂组合物的疫苗，该猪用佐剂组合物包括维生素E和/或HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油和丙烯酸聚合物。该猪用佐剂组合物具有较好的免疫活性，稳定性良好，可实现大规模生产，克服了注射时的副反应与油佐剂残留造成的生物安全风险。

An adjuvant composition for swine and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种猪用佐剂组合物及其制备方法
本专利技术属于生物制品
，具体涉及佐剂组合物。
技术介绍
免疫佐剂(immunologicadjuvant)是制备蛋白类灭活疫苗的重要组成成份，能提高抗原(免疫原)的免疫原性和免疫反应的可持续性，引导机体的免疫系统对抗原产生体液免疫或细胞免疫反应。佐剂的作用主要包括：①免疫调节作用。②抗原提呈作用。③抗原贮存作用。④靶向作用。⑤诱导CD8+细胞毒性T细胞(CTL)应答。选择合适的佐剂是提高动物疫苗免疫活性的关键因素。目前，我国猪用灭活疫苗主要用油包水体系制备而成。油包水体系佐剂制备的疫苗具有较强的免疫效果，但是具有较强的副作用，特别是皮下注射时在注射部位会引起强烈的炎症和溃疡，油佐剂的残留液液存在生物安全风险。另外，由于某些活疫苗本身免疫刺激能力不够强，或在特定条件下其能力不足以激发机体产生有效应答，仍需要借助佐剂辅助提高免疫效力，而经典的油包水型佐剂会对菌体细胞膜造成溶解破坏，而不能用于活疫苗的研发。因此，以水为连续相的佐剂和水性佐剂的研发极为紧迫。其中，以水为连续相的水包油佐剂受到了研究者的关注。但是，个别水包油佐剂制备时包封不好，油相外露，会对疫苗毒性造成一定影响；且水油易分层，在稳定性方面存在隐患。水性佐剂安全性好、副反应少，但目前水佐剂主要依赖国外进口，成本昂贵，我国缺乏拥有自主知识产权的免疫活性好、稳定性佳、能够实现商品化生产的水佐剂。专利CN107375922A专利技术了一种水溶性复合免疫佐剂，其中含有卡波姆、氢氧化钠、副猪嗜血杆菌莱膜多糖、(副猪嗜血杆菌)蛋白OMP、生育酚、副猪嗜血杆菌DNA，由其制成的猪圆环病毒疫苗具有较好的免疫活性。论文“不同水性及水包油型佐剂对猪支原体肺炎灭活疫苗的免疫增强作用”解海东等介绍了一种水佐剂，其在卡波姆中添加左旋咪唑混合物、黄芪多糖、壳聚糖、免疫刺激复合物基质混合物等，制得的疫苗组合物可增加细胞及体液免疫应答，为猪支原体肺炎灭活疫苗的佐剂研发提供了数据基础。但是，上述水佐剂成分复杂，成本较高，稳定性较差，不易实现工业上的大规模生产使用。
技术实现思路
为克服现有技术存在的缺陷，本专利技术提供了一种猪用佐剂组合物，其中，所述猪用佐剂组合物包括维生素E和/或HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油和丙烯酸聚合物。本专利技术所述的猪用免疫佐剂组合物具有与油佐剂相同或相当的增强免疫效力的作用，且均为水佐剂组分，避免了传统油佐剂带来疫苗注射对动物产生的副作用问题。本专利技术的所述的猪用免疫佐剂组合物制备过程简单，易于在产业上推广。本专利技术还涉及一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括抗原和所述佐剂组合物。本专利技术的疫苗组合物其不含油佐剂，降低了由油佐剂引发的安全隐患，且免疫效力与使用油佐剂的疫苗相同或相当。具体实施方式以下，对本专利技术的实施方式进行说明。本专利技术涉及一种禽用佐剂组合物，其中，所述禽用佐剂组合物包括维生素E和/或HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油和丙烯酸聚合物。术语“佐剂”是指当连同抗原投与时，使受试者对这一抗原的免疫反应增强的化合物。佐剂介导的免疫反应增强可通过所属
中已知的任何方法评估，包括(不限于)以下一种或多种方法：(i)与对单独抗原免疫作用起反应所产生的抗体数相比，对佐剂/抗原组合免疫作用起反应所产生的抗体数增加；(ii)识别抗原或佐剂的T细胞数增加；(iii)一种或多种I型细胞因子的含量增加；和(iv)活激发之后，体内(invivo)的保护作用。与经单独抗原激发的受试者相比，当受试者经抗原与佐剂激发时，若抗原特异性免疫反应性的任何可测量参数(例如抗体效价或T细胞产生增加至少10％，则认为免疫反应增强。在本专利技术的某些实施例中，若抗原特异性免疫反应性的任何可测量参数增加至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少90％、至少95％、至少100％、至少125％、至少150％、至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、至少400％、至少450％、至少500％或至少1000％，则免疫反应增强。如本文所述“HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯组合物”：是指蔗糖与脂肪酸经过酯化反应所得的混合物，蔗糖有8个-OH基团，可以与脂肪酸反应形成不同HLB值的蔗糖脂肪酸酯组合物，本专利技术所述的脂肪酸酯优选碳原子为8-28的脂肪酸，可以举例，辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、硬脂酸、油酸、花生四烯酸。HLB值为5以下的蔗糖脂肪酸酯组合物可以举例商品化的，例如日本三菱Ryoto蔗糖酯，可以选择的型号，L195，蔗糖酯的月桂酸组合物，其HLB值为1，L595，蔗糖酯的月桂酸组合物，其HLB值5；蔗糖酯s170，蔗糖酯的硬脂酸组合物其HLB值为1，中国对应的蔗糖酯型号为SE-1，蔗糖酯s370，蔗糖酯的硬脂酸组合物其HLB值为3s，中国对应的蔗糖酯型号为SE-3，蔗糖酯s570，蔗糖酯的硬脂酸组合物其HLB值为5，中国对应的蔗糖酯型号为SE-5。术语“HLB值(Hydrophile-LipophileBalanceNumber)”称亲水疏水平衡值，也称水油度。表面活性剂为具有亲水基团和亲油基团的两亲分子，HLB值是表面活性剂分子中亲水基和亲油基之间的大小和力量平衡程度的量，也称为表面活性剂的亲水亲油平衡值。聚氧乙烯氢化蓖麻油又称为氢化蓖麻油聚氧乙烯醚、乙氧基化氢化蓖麻油、PEG-n氢化蓖麻油，包括氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-11、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-20、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-30、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-50、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-60、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-75、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-80、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-100；聚氧乙烯氢化蓖麻油可以举例商品化的，例如BASF的CremophorRH40、CremophorRH20或CremophorRH60其组合，其包括了结构相同但不同商品名的类似物。“丙烯酸系聚合物”是指含有丙烯酸系部分的任何聚合物或共聚物。示范性丙烯酸系聚合物包括例如聚丙烯酸、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺、丙烯酸酯、丙烯腈和聚丙烯酸的烷基酯。丙烯酸系共聚物的实例包括例如聚丙烯酰胺-共-甲基丙烯酸丁酯、丙烯酸-甲基丙烯酸、丙烯酸-丙烯酰胺和聚甲基丙烯酸酯。市售丙烯酸系聚合物的实例包括卡波姆，它是在所属
中通常还指并且已知是与聚烯丙基蔗糖交联的丙烯酸的水溶性聚合物。本专利技术的猪用水佐剂，具有与油佐剂相同或相当的增强免疫效力的作用，且均为水佐剂组分，避免了传统油佐剂带来疫苗注射对动物产生的刺激问题及油佐剂成分残留引起的生物安全风险。作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术所述的猪用佐剂组合物中，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯组合物为碳原子为8-28的脂肪酸酯。作为本专利技术的一种优选实施方式，本专利技术所述的猪用佐剂组合物中，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯选自蔗糖辛酸酯、蔗糖癸酸酯、蔗糖月桂酸酯、蔗糖肉豆蔻酸酯、蔗糖硬脂酸酯、蔗糖油酸酯、或蔗糖花生四烯酸酯。作为本专利技术的一种进一步优选的实施方式，本专利技术所述的猪用佐剂组合物中，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯为日本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪用佐剂组合物，其中，所述猪用佐剂组合物包括维生素E和/或HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油和丙烯酸聚合物。

【技术特征摘要】
1.一种猪用佐剂组合物，其中，所述猪用佐剂组合物包括维生素E和/或HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油和丙烯酸聚合物。2.根据权利要求1所述的猪用佐剂组合物，其中，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯组合物为碳原子为8-28的脂肪酸酯；优选地，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯选自蔗糖辛酸酯、蔗糖癸酸酯、蔗糖月桂酸酯、蔗糖肉豆蔻酸酯、蔗糖硬脂酸酯、蔗糖油酸酯、或蔗糖花生四烯酸酯；更优选地，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯为日本三菱Ryoto蔗糖酯L195、L595、蔗糖酯s170、蔗糖酯SE-1，蔗糖酯s370、蔗糖酯SE-3，蔗糖酯s570、或蔗糖酯SE-5；优选地，HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯选自HLB为1的蔗糖酯的月桂酸组合物、HLB为5的蔗糖酯的月桂酸组合物、HLB为1的蔗糖酯的硬脂酸组合物、HLB为的蔗糖酯的硬脂酸组合物、或HLB为5的蔗糖酯的硬脂酸组合物；聚氧乙烯氢化蓖麻油为氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-11、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-20、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-30、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-50、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-60、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-75、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-80、或氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-100；优选地，聚氧乙烯氢化蓖麻油为BASF的CremophorRH40、CremophorRH20或CremophorRH60或其组合；丙烯酸聚合物为聚丙烯酰胺-共-甲基丙烯酸丁酯、丙烯酸-甲基丙烯酸、丙烯酸-丙烯酰胺或聚甲基丙烯酸酯；优选地，丙烯酸系聚合物为卡波姆。3.根据权利要求2所述的猪用佐剂组合物，其中，丙烯酸聚合物为卡波姆。4.根据权利要求2所述的猪用佐剂组合物，其中，维生素E、HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯组合物的浓度范围分别为0.25％W/V-10.0％W/V；维生素E与聚氧乙烯氢化蓖麻油比例为1:0.1-1:1.8；或HLB值为5以下蔗糖脂肪酸酯组合物与聚氧乙烯氢化蓖麻油比例为...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，闫张若平，张许科，
申请(专利权)人：洛阳赛威生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41