一种鱼类免疫方法技术

本发明专利技术公开了一种鱼类免疫方法，包括两步：浸泡免疫：先用鱼体表面处理液清洗鱼体，后用疫苗浸泡液浸泡鱼苗。每1L表面处理液含有0.05‑2mL38‑40wt％的甲醛溶液，0.001‑0.0035g苯扎氯胺，0.04‑0.08g乙醇酸和10‑20mL甘油；每1L疫苗浸泡液含有50‑200mL 0.01‑0.1％的卡波姆，1‑5mL的三乙醇胺，10‑20mL的甘油和1×10

A fish immunization method

The invention discloses a fish immunization method, which comprises two steps: immersing immunity: first cleaning the fish body with the surface treatment solution of fish body, then soaking the fry in the vaccine soaking solution. Each 1L surface treatment liquid containing 0.05 2mL38 40wt% Formaldehyde Solution, 0.0035g 0.001 benzalkonium chloride, 0.04 0.08g and 10 glycolic acid 20mL glycerol; carbomer 1L vaccine soaking solution containing 50 per 200mL 0.01 0.1%, 1 5mL 20mL triethanolamine, 10 glycerol and 1 x 10

【技术实现步骤摘要】
一种鱼类免疫方法
本专利技术涉及水产养殖
，尤其涉及一种鱼类免疫方法。
技术介绍
近几十年来，鱼用疫苗的发展相当迅速，在水产养殖中发挥的作用越来越大，疫苗的种类日益增多，分类方式也多种多样。按免疫方式分为注射疫苗、浸泡疫苗和口服疫苗；按疫苗抗原成分类型分为菌体疫苗、亚单位疫苗、重组疫苗和DNA疫苗等，按照抗原制备方式分为灭活疫苗、减毒疫苗、基因缺失疫苗等。目前鱼用疫苗的接种方法主要有三种：一是注射，二是浸泡，三是口服。注射法虽剂量准确，诱导免疫应答比其它几种方法都强，但注射免疫费时费力，鱼的应激反应也大，对鱼苗和较小的鱼类并不适用；浸泡免疫省时方便，是仅次于注射法的有效给药途径，并且可适用于难以实施注射的鱼苗；口服免疫对鱼体无损伤，操作方便，不受时间、地点、鱼体大小的限制，也是容易实施的免疫途径。目前国产尚无上市的鱼用浸泡和口服疫苗，已有报道多停留在研发阶段。浸泡免疫在生产中，免疫效果受到多种因素影响，效果不佳；口服疫苗受胃肠道环境(pH太低、各种消化酶以及内容物)影响，疫苗抗原很难到达黏膜诱导位点而引起有效的免疫反应。而国外关于无乳链球菌感染罗非鱼时，先通过粘附作用定植于罗非鱼体表或腔道的粘液，且最主要感染途径为胃肠道的研究报道，为其浸泡和口服疫苗的开发可行性奠定了理论基础。因此改善鱼类疫苗浸泡方式，研制新型口服疫苗的制备及免疫方法，是水产养殖健康、快速发展中亟待解决的问题。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种可方便快捷的应用于鱼苗免疫的新型的浸泡免疫和口服疫苗制备及免疫方法，以及最佳的免疫操作规程，联合应用这两种免疫方法能够显著提高疫苗抗原进入机体的量，从而提高疫苗的免疫效果。本专利技术的目的采用如下技术方案实现：一种鱼类免疫方法，包括：浸泡免疫步骤：先利用鱼体表面处理液清洗鱼苗体表，然后用疫苗浸泡液浸泡免疫鱼苗；每1L表面处理液中含有0.05-2mL38-40wt％的甲醛溶液，0.001-0.0035g苯扎氯胺，0.04-0.08g乙醇酸和10-20mL甘油；每1L疫苗浸泡液中含有50-200mL0.01-0.1％的卡波姆，1-5mL的三乙醇胺，10-20mL的甘油和1×106-1×108CFU/mL的疫苗抗原；口服免疫步骤：浸泡免疫后的鱼苗隔12-48h后饲喂口服疫苗饲料；每1kg口服疫苗饲料包括40-100g的口服疫苗佐剂，口服疫苗佐剂由以下按重量份计的以下组分组成：3-6份抗胃酸组分、2-5份胃消化酶抑制组分、2-5份促肠道吸收组分和2-6份多糖包裹组分；所述抗胃酸组分用于将疫苗在胃肠道局部的pH值调节为6.5-7.5；所述促肠道吸收组分用于协助运载疫苗扩散到黏膜细胞，包括表面活性剂、油酸类或增稠剂；所述多糖包裹组分为非蛋白类多糖。进一步地，浸泡免疫步骤中，包括以下三个过程：1)首次浸泡：利用鱼体表面处理液浸泡鱼苗1-3min；2)洗涤：转移至清水桶中洗涤1-2min；3)疫苗浸泡：将洗涤后的鱼苗于含有疫苗浸泡液的疫苗桶中浸泡免疫20-60min。进一步地，浸泡免疫步骤中，全程充氧，鱼苗体重与疫苗浸泡液的比例为30-40kg/250L。进一步地，口服免疫步骤中，连续饲喂疫苗饲料7天，每天饲喂2次，饲喂量为30-50g/kg.bw。进一步地，所述抗胃酸组分为碳酸氢钠、碳酸钠、柠檬酸钠、磷酸钙、碳酸钙、碳酸镁、氢氧化镁、磷酸镁、氧化镁和带有负电荷的多聚体透明质酸中的一种或两种以上。进一步地，所述胃消化酶抑制组分为植物源性胃蛋白酶抑制剂、血红蛋白、卵清蛋白、蛋白酶体或EDTA中的一种或两种以上。进一步地，所述促肠道吸收组分包括皂角苷、水杨酸钠、十二醇硫酸钠、油酸、亚油酸、胆汁盐类、油酸甘油酯、卡波姆、卵磷脂、溶血卵磷脂、山梨糖醇酐和磷脂类中的一种或两种以上。进一步地，所述多糖包裹组分包括多聚赖氨酸、多聚鸟氨酸、壳聚糖、海藻酸、胶原蛋白、琼脂糖和硫酸纤维中的一种或两种以上。进一步地，所述疫苗抗原为无乳链球菌、海豚链球菌、嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、爱德华氏菌、点状假单胞菌、荧光假单胞菌、柱状纤维菌、草鱼出血热病毒和锦鲤疱疹病毒中的任意一种或几种；所述疫苗抗原的所处状态为灭活抗原、亚单位抗原或减毒活疫苗抗原中的任意一种或两种以上。相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：1)本专利技术提供的方法通过鱼体表面处理液与口服免疫佐剂的配合应用，可提高鱼体表皮的通透性，增加鱼体对疫苗的吸收效率，显著提高免疫效果。2)浸泡加口服免疫联合应用的相对免疫保护率比单独应用浸泡免疫可提高10％以上。3)联合免疫操作可在苗种场完成，最大限度的节省了免疫成本且不会增加苗种的养殖周期，从而也节省了养殖成本，免疫后罗非鱼苗养殖发病高峰期的死亡率与普通苗相比可降低10％以上。附图说明图1为实施例2的各组的疫苗水平曲线图。具体实施方式下面，结合附图以及具体实施方式，对本专利技术做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。以下具体实施方式中，如未特殊说明，所采用的组分或抗原均可通过市售方法或常规技术手段获得。一种鱼类免疫方法，包括：浸泡免疫步骤：先利用鱼体表面处理液清洗浸泡免疫鱼苗体表，然后用浸泡疫苗液浸泡免疫鱼苗；每1L表面处理液中含有0.05-2mL38-40wt％的甲醛溶液，0.001-0.0035g苯扎氯胺，0.04-0.08g乙醇酸和10-20mL甘油；每1L疫苗浸泡液中含有50-200mL0.01-0.1％的卡波姆，1-5mL的三乙醇胺，10-20mL的甘油和1×106-1×108CFU/mL的疫苗抗原；口服免疫步骤：浸泡免疫的鱼苗隔12-48h后饲喂口服疫苗饲料；每1kg口服疫苗饲料包括40-100g的口服疫苗佐剂，口服疫苗佐剂由以下按重量份计的以下组分组成：3-6份抗胃酸组分、2-5份胃消化酶抑制组分、2-5份促肠道吸收组分和2-6份多糖包裹组分；所述抗胃酸组分用于将疫苗在肠道中pH值范围调节为6.5-7.5；所述促肠道吸收组分用于运载疫苗扩散到黏膜细胞，包括表面活性剂、油酸类或增稠剂；所述多糖包裹组分为非蛋白类多糖。该鱼类免疫方法，通过浸泡与口服相结合的方式，能有效提高鱼体表皮的通透性，增加鱼体对疫苗的吸收效率，显著提高免疫效果。进一步地，浸泡免疫步骤中，包括以下三个过程：1)首次浸泡：利用鱼体表面处理液浸泡鱼苗1-3min；2)洗涤：转移至清水桶中洗涤1-2min；3)疫苗浸泡：将洗涤后的鱼苗于含有疫苗浸泡液的疫苗桶中浸泡免疫20-60min。进一步地，浸泡免疫步骤中，全程充氧，鱼苗体重与疫苗浸泡液的比例为30-40kg/250L。进一步地，口服免疫步骤中，连续饲喂疫苗饲料7天，每天饲喂2次，饲喂量为30-50g/kg.bw。本专利技术所述的鱼类免疫方法中，所述抗胃酸组分为Bronsted碱，采用抗胃酸组分的主要作用是在疫苗表面形成一保护氛围，使鱼胃中疫苗所在局部pH值为6.5-7.5，以减少疫苗抗原受胃部消化酶的影响而失活；优选地，所述抗胃酸组分可以选自但不限定于碳酸氢钠、碳酸钠、柠檬酸钠、磷酸钙、碳酸钙、碳酸镁、氢氧化镁、磷酸镁、氧化镁和带有负电荷的多聚体透明质酸中的一种或两种以上。进一步地，所述胃消化酶抑制组分为植物源性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鱼类免疫方法，包括：浸泡免疫步骤：先利用鱼体表面处理液清洗鱼苗体表，然后用疫苗浸泡液浸泡免疫鱼苗；每1L表面处理液中含有0.05‑2mL 38‑40wt％的甲醛溶液，0.001‑0.0035g苯扎氯胺，0.04‑0.08g乙醇酸和10‑20mL甘油；每1L疫苗浸泡液中含有50‑200mL 0.01‑0.1％的卡波姆，1‑5mL的三乙醇胺，10‑20mL的甘油和1×10

【技术特征摘要】
1.一种鱼类免疫方法，包括：浸泡免疫步骤：先利用鱼体表面处理液清洗鱼苗体表，然后用疫苗浸泡液浸泡免疫鱼苗；每1L表面处理液中含有0.05-2mL38-40wt％的甲醛溶液，0.001-0.0035g苯扎氯胺，0.04-0.08g乙醇酸和10-20mL甘油；每1L疫苗浸泡液中含有50-200mL0.01-0.1％的卡波姆，1-5mL的三乙醇胺，10-20mL的甘油和1×106-1×108CFU/mL的疫苗抗原；口服免疫步骤：浸泡免疫后的鱼苗隔12-48h后饲喂口服疫苗饲料；每1kg口服疫苗饲料包括40-100g的口服疫苗佐剂，口服疫苗佐剂由以下按重量份计的以下组分组成：3-6份抗胃酸组分、2-5份胃消化酶抑制组分、2-5份促肠道吸收组分和2-6份多糖包裹组分；所述抗胃酸组分用于将疫苗在胃肠道局部的pH值调节为6.5-7.5；所述促肠道吸收组分用于协助运载疫苗扩散到黏膜细胞，包括表面活性剂、油酸类或增稠剂；所述多糖包裹组分为非蛋白类多糖。2.如权利要求1所述的鱼类免疫方法，其特征在于，浸泡免疫步骤中，包括以下三个过程：1)首次浸泡：利用鱼体表面处理液浸泡鱼苗1-3min；2)洗涤：转移至清水桶中洗涤1-2min；3)免疫浸泡：将洗涤后的鱼苗于含有疫苗浸泡液的疫苗桶中浸泡免疫20-60min。3.如权利要求1或2所述的鱼类免疫方法，其特征在于，浸泡免疫步骤中，全程充氧，鱼苗体重与疫苗浸泡液的比例为30-40kg/250L。4.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：李其昌，陈善真，陈克宏，刘博奇，王志花，
申请(专利权)人：广东海大畜牧兽医研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44