马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术涉及生物检测技术领域，具体涉及一种马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条。马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条包括在底板上依次贴附的样品垫、金标结合物垫、带有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫；结合物垫为包被有金标葡萄球菌A蛋白复合物的玻璃纤维膜；硝酸纤维素膜上的检测线包被有马链球菌兽疫亚种抗原；硝酸纤维素膜上的质控线包被有猪IgG。该胶体金使用马链球菌兽疫亚种冻融超声抗原作为测试线包被抗原，具有特异性强，灵敏度高、方便快捷等特点，对马链球菌兽疫亚种检测不需要复杂的检测仪器，特别适合猪场养殖人员和基层兽医工作者使用。

【技术实现步骤摘要】
马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条及其制备方法
专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条。
技术介绍
马链球菌兽疫亚种旧称兽疫链球菌，常存在于皮肤、呼吸道、扁桃体及生殖道，可致各种家畜的炎症和败血症。其中以马最易感，引起子宫炎、流产或不孕症、牛的乳腺炎，对羊和猪及禽类可引起败血性链球菌病。据流行病学调查表明，除了猪链球菌2型外，马链球菌兽疫亚种是中国各地猪链球菌病的主要病原，健康动物或人主要通过与带菌或发病动物接触或食源性感染而发病，该病曾在我国华南、西南和华东等地区大面积流行。目前，控制该菌引起的猪链球菌病的主要手段仍是疫苗，但该疫苗在安全性检测、免疫效力方面的检测还存在不足。而对多种动物体内的马链球菌兽疫亚种抗体检测是这一研究必不可少的环节，因此开展对马链球菌兽疫亚种抗体快速准确检测方法的研究意义重大。目前诊断猪马链球菌兽疫亚种血清学方法主要有平板凝集试验、ELISA、免疫酶组织化学染色法和免疫荧光等方法。但这些方法存在以下不足：第一，敏感度相对低下，抗体水平相对较低时，无法检测；第二，费时或成本高或需要专业人员，只能用于实验室的诊断，不适本文档来自技高网...

【技术保护点】
马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条，其特征在于,试纸条包括在底板上依次贴附的样品垫、金标结合物垫、带有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫；所述的金标结合物垫为包被有金标葡萄球菌A蛋白复合物的玻璃纤维膜；所述的硝酸纤维素膜上的检测线包被有马链球菌兽疫亚种抗原；所述的硝酸纤维素膜上的质控线包被有猪IgG。

【技术特征摘要】
1.马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条，其特征在于,试纸条包括在底板上依次贴附的样品垫、金标结合物垫、带有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫；所述的金标结合物垫为包被有金标葡萄球菌A蛋白复合物的玻璃纤维膜；所述的硝酸纤维素膜上的检测线包被有马链球菌兽疫亚种抗原；所述的硝酸纤维素膜上的质控线包被有猪IgG。2.如权利要求1所述的马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条，其特征在于,吸水垫的材质为吸水纸。3.如权利要求1所述的马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条，其特征在于,金标葡萄球菌A蛋白复合物的制备方法如下：（1）煮制胶体金；（2）制备金标葡萄球菌A蛋白复合物。4.如权利要求1所述的马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条，其特征在于,金标葡萄球菌A蛋白复合物的制备方法如下：（1）煮制胶体金：取氯金酸溶液加入三蒸去离子水在恒温磁力搅拌器上加热至沸腾，然后在快速搅拌下迅速加入柠檬酸三钠溶液，待溶液变为葡萄酒红色后再加热，冷却至室温，以三蒸去离子水定容后，调节pH6.5，得胶体金，保存备用；（2）制备金标葡萄球菌A蛋白复合物取步骤（1）中煮制好的胶体金，快速搅拌下缓慢加入葡萄球菌A蛋白，持续搅拌后，加入牛血清白蛋白溶液，继续搅拌；离心，所得的沉淀采用含聚乙二醇20000的PBS重悬至原量，重复离心，用含牛血清白蛋白的0.01mol/LPBS重悬沉淀，得到金标葡萄球菌A蛋白复合物，保存备用。5.如权利要求1所述的马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条，其特征在于,金标葡萄球菌A蛋白复合物的制备方法如下：（1）胶体金的煮制取质量百分比为1%的氯金酸溶液、三蒸去离子水、质量百分比为1%的柠檬酸三钠溶液，质量百分比为1%的氯金酸溶液、三蒸去离子水、质量百分比为1%柠檬酸三钠溶液的体积比为1:50：0.9；将质量百分比为1%氯金酸溶液加入三蒸去离子水在恒温磁力搅拌器上加热沸腾，然后在快速搅拌下迅速加入质量百分比为1%的柠檬酸三钠溶液，待溶液变为葡萄酒红色后再加热15min，冷却至室温，以三蒸去离子水定容后，调节pH6.5，得胶体金，于4℃下保存备用；（2）金标葡萄球菌A蛋白复合物的制备取步骤（1）中煮制好的胶体金20mL，快速搅拌下缓慢加入1mg/mL葡萄球菌A蛋白200μL，持续搅拌30min后，加入2.5mL质量百分比为10%的牛血清白蛋白溶液，继续搅拌30min；于4℃下离心45min，离心转速为8700r/min；所得的沉淀采用含质量百分比为0.5%聚乙二醇20000的0.005mol/LPBS重悬至原量，10000r/min重复离心2次，用1mL含质量百分比为1%的牛血清白蛋白的0.01mol/LPBS重悬沉淀，得到金标葡萄球菌A蛋白复合物，于4℃下保存备用；上述的含0.5%聚乙二醇20000的0.005mol/LPBS其pH7.2；含牛血清白蛋白的0.01mol/LPBS其pH为7.2。6.如权利要求1所述的马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条，其特征在于,马链球菌兽疫亚种抗原的制备过程中，反复冻融。7.如权利要求1所述的马链球菌兽疫亚种胶体金抗体检测试纸条，其特征在于,马链球菌兽疫亚种抗原的制备方法如下：马链球菌兽疫亚种经过猪攻毒复壮，选用该毒种划线于体积百分比为5%血清改良马丁琼脂平板，37℃培养12h后，挑取单菌落，接种于5mL含体积百分比为2%血清的改良马丁液体培养基，37℃振...

【专利技术属性】
技术研发人员：李书光，曲光刚，李峰，程立坤，沈志强，
申请(专利权)人：山东省滨州畜牧兽医研究院，
类型：发明
国别省市：山东,37